抗體水解片段:在一定條件下,Ig分子肽鏈的某些部分易被蛋白酶水解為不同片段。木瓜蛋白酶(papain)和胃蛋白酶(pepsin)是很常用的兩種Ig蛋白水解酶,并可籍此研究Ig的結(jié)構(gòu)和功能,分離和純化特定的12多肽片段。木瓜蛋白酶水解Ig的部位是在鉸鏈區(qū)二硫鍵連接的兩條重鏈的近N端,可將Ig裂解為兩個(gè)完全相同的Fab段和一個(gè)Fc段。Fab段即抗原結(jié)合片段(fragment antigenbinding,F(xiàn)ab),由一條完整的輕鏈與重鏈的VH和CHl結(jié)構(gòu)域組成。一個(gè)Fab片段為單價(jià),可與抗原結(jié)合但不產(chǎn)生凝集反應(yīng)或沉淀反應(yīng);Fc段即可結(jié)晶片段(fragment crystallizable,F(xiàn)c),由Ig的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域組成。Fc段無抗原結(jié)合活性,是Ig與效應(yīng)分子或細(xì)胞相互作用的部位。多克隆抗體通常由多個(gè)不同的B細(xì)胞克隆產(chǎn)生,這些細(xì)胞分別產(chǎn)生針對不同抗原的抗體。廣東IgM抗體生產(chǎn)廠家
選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細(xì)胞,一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中,未融合的小鼠骨髓瘤細(xì)胞中DNA的從頭合成途徑會被阻止;未融合的骨髓瘤細(xì)胞又因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT),不能利用補(bǔ)救途徑合成DNA;這樣未融合小鼠骨髓瘤細(xì)胞的兩個(gè)DNA合成途徑都被阻止,骨髓瘤細(xì)胞DNA不能復(fù)制而死亡。 未融合的B淋巴細(xì)胞雖具有次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,但其本身不能在體外長期存活也逐漸死亡。 只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從B淋巴細(xì)胞獲得了次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,可以通過補(bǔ)救途徑合成DNA,并具有骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖的特性,因此,雜交瘤細(xì)胞能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。四川兔抗富含脯氨酸蛋白11多克隆抗體試劑單克隆抗體的研究有助于開發(fā)個(gè)體化的醫(yī)療方案。
單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、只針對某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來制備,雜交瘤(hybridoma)抗體技術(shù)是在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上,將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細(xì)胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合為B細(xì)胞雜交瘤。用具備這種特性的單個(gè)雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)成細(xì)胞群,可制備針對一種抗原表位的特異性抗體,即單克隆抗體。單克隆抗體是人工制備的雜交瘤細(xì)胞生產(chǎn)的,雜交瘤細(xì)胞是由一個(gè)經(jīng)抗原啟動(dòng)后的B細(xì)胞與一個(gè)骨髓瘤細(xì)胞融合形成。單克隆抗體優(yōu)點(diǎn):純度高,靈敏度高,特異性強(qiáng),交叉反應(yīng)少,制備的成本低。缺點(diǎn):對技術(shù)有一定的要求,而且通過抗原的化學(xué)處理很容易丟失表位。
19世紀(jì)后期,Von Behring及其同事Kitasato研究發(fā)現(xiàn),用白喉或破傷風(fēng)免疫動(dòng)物后可產(chǎn)生具有中和有害素作用的物質(zhì),稱之為antitoxin,隨后引入“抗體”一詞來泛指抗有害素類物質(zhì)。抗體(antibody,Ab)是B細(xì)胞接受抗原刺激后增殖分化為漿細(xì)胞所產(chǎn)生的糖蛋白,主要存在于血清等體液中,是介導(dǎo)體液免疫的重要效應(yīng)分子,能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合,發(fā)揮免疫功能。1937年,Tiselius和Kabat用電泳方法將血清蛋白分為白蛋白、α1、α2、β及γ球蛋白等組分,并發(fā)現(xiàn)抗體主要存在于γ區(qū),因此抗體又被稱為γ球蛋白。單克隆抗體的研究有助于了解免疫系統(tǒng)的功能。
抗體重鏈和輕鏈:輕鏈分子量約為25 000,由214個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成。輕鏈可分為兩種,分別為kappa(κ)鏈和lambda(λ)鏈。據(jù)此,可將Ig分為兩型(type),即κ型和λ型。一個(gè)Ig分子上兩條輕鏈的型別總是相同的。不同類Ig既存在κ型,也存在λ型。同一個(gè)體內(nèi)可同時(shí)存在κ型和λ型的Ig分子,不同種屬生物體內(nèi)兩型輕鏈的比例不同。正常人血清Ig的κ:λ約為2:1,而在小鼠則為20:1。Ig的κ與λ的比例異??梢苑从趁庖呦到y(tǒng)的異常。根據(jù)λ鏈恒定區(qū)個(gè)別氨基酸的差異,又可將λ鏈分為λ1、λ2、λ3和λ4四個(gè)亞型(subtype)。單克隆抗體的研究有助于發(fā)展更有效的藥物調(diào)理方案。廣東IgM抗體生產(chǎn)廠家
單克隆抗體可以用于調(diào)理心血管疾病。廣東IgM抗體生產(chǎn)廠家
按抗體產(chǎn)生的來源分為正??贵w(天然抗體),如血型ABO型中的抗A和抗B的抗體,和免疫抗體如抗微生物的抗體。按反應(yīng)抗原的來源分為異種抗體,異嗜性抗體,同種抗體和自身抗體。按抗原反應(yīng)的凝集狀態(tài)分為完全抗體IgM和不完全抗體IgG等??贵w在醫(yī)療實(shí)踐中應(yīng)用甚為普遍。如用于疾病的預(yù)防、診斷和調(diào)理方面都有一定的作用。臨床上用丙種球蛋白預(yù)防病毒性肝炎、麻疹、風(fēng)疹等,國際上用抗Rh免疫球蛋白預(yù)防因Rh血型不合引起的溶血癥。診斷上如類風(fēng)濕因子用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,抗核抗體(ANA)、抗DNA抗體用于系統(tǒng)性紅斑狼瘡,抗精子抗體用于原發(fā)性不孕癥的診斷等;調(diào)理上如中毒用抗毒調(diào)理以及免疫缺陷性疾病的調(diào)理等。廣東IgM抗體生產(chǎn)廠家