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免疫動(dòng)物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的 過(guò)程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠,按照預(yù)先制定的免疫方案進(jìn)行免疫注射。 抗原通過(guò)血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫部位,刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細(xì)胞。細(xì)胞融合采用二氧化碳?xì)怏w處死小鼠,無(wú)菌操作取出脾臟,在平皿內(nèi)擠壓研磨,制備脾細(xì)胞懸液。 將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合,并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合,形成雜交瘤細(xì)胞。單克隆抗體可以用于調(diào)理自身免疫性疾病。四川Prestige Antibodies抗體試劑
抗體主要功能:?jiǎn)?dòng)補(bǔ)體產(chǎn)生攻膜復(fù)合物使細(xì)胞溶解破壞。人IgG1~3和IgM與相應(yīng)抗原結(jié)合后,可因構(gòu)象改變而使其CH2和CH3結(jié)構(gòu)域內(nèi)的補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)暴露,從而通過(guò)經(jīng)典途徑啟動(dòng)補(bǔ)體系統(tǒng),產(chǎn)生多種效應(yīng)功能,其中IgM、IgG1和IgG3啟動(dòng)補(bǔ)體系統(tǒng)的能力較強(qiáng),IgG2較弱。IgA、IgE和IgG4本身難以啟動(dòng)補(bǔ)體,但在形成聚合物后可通過(guò)旁路途徑啟動(dòng)補(bǔ)體系統(tǒng)。通常情況下,lgD不能啟動(dòng)補(bǔ)體。調(diào)理吞噬和ADCC:IgG可通過(guò)其Fc段與表面具有相應(yīng)受體的細(xì)胞結(jié)合,產(chǎn)生不同的生物學(xué)作用。江蘇正??贵w費(fèi)用單克隆抗體可以高度特異性地與特定抗原結(jié)合。
單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、只針對(duì)某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來(lái)制備,雜交瘤(hybridoma)抗體技術(shù)是在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上,將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細(xì)胞和具有無(wú)限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合為B細(xì)胞雜交瘤。用具備這種特性的單個(gè)雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)成細(xì)胞群,可制備針對(duì)一種抗原表位的特異性抗體,即單克隆抗體。單克隆抗體是人工制備的雜交瘤細(xì)胞生產(chǎn)的,雜交瘤細(xì)胞是由一個(gè)經(jīng)抗原啟動(dòng)后的B細(xì)胞與一個(gè)骨髓瘤細(xì)胞融合形成。單克隆抗體優(yōu)點(diǎn):純度高,靈敏度高,特異性強(qiáng),交叉反應(yīng)少,制備的成本低。缺點(diǎn):對(duì)技術(shù)有一定的要求,而且通過(guò)抗原的化學(xué)處理很容易丟失表位。
抗體獨(dú)特的生物學(xué)活性使其在疾病的診斷、免疫防治及基礎(chǔ)研究中發(fā)揮作重要作用。早在19世紀(jì)后期,人們就開始使用特異性抗原免疫動(dòng)物制備相應(yīng)的抗血清。1975年,Kohler和Milstein建立了單克隆抗體(monoclonai antibody,mAb)技術(shù),使規(guī)模化制備高特異性、均質(zhì)性抗體成為可能。然而,鼠源性mAb在人體反復(fù)免疫后出現(xiàn)的人抗鼠抗體(human anti-mouseantibody,HAMA)很大程度上限制了mAb的臨床應(yīng)用。近年來(lái),隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,人們已經(jīng)可以通過(guò)抗體工程技術(shù)制備人一鼠嵌合抗體、人源化抗體或人源抗體。多克隆抗體的制備過(guò)程可以在實(shí)驗(yàn)室中完成,并且通常具有較高成功率。
抗體IgG可通過(guò)其Fc段與表面具有相應(yīng)受體的細(xì)胞結(jié)合,產(chǎn)生不同的生物學(xué)作用。調(diào)理作用(opsonization)指IgG抗體(特別是IgG1和IgG3)的Fc段與中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞表面相應(yīng)的Fc受體結(jié)合,從而增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬作用。例如,細(xì)菌特異性的IgG抗體可通過(guò)其Fab段與相應(yīng)的細(xì)菌抗原結(jié)合后,以其Fc段與巨噬細(xì)胞或中性粒細(xì)胞表面相應(yīng)的Fc受體結(jié)合,通過(guò)IgG的Fab段和Fc段的“橋聯(lián)”作用,促進(jìn)吞噬細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的吞噬。抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)指具E有殺傷活性的細(xì)胞(如NK細(xì)胞)通過(guò)其表面的Fc受體識(shí)別包被于靶細(xì)胞表面抗原(如病毒感染細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞)上的抗體的Fc段,直接殺傷靶細(xì)胞。NK細(xì)胞是介導(dǎo)ADCC的主要細(xì)胞??贵w與靶細(xì)胞上的抗原結(jié)合是特異性的,而表達(dá)Fc受體細(xì)胞的殺傷作用是非特異性的 。單克隆抗體可以用于研究病原微生物的識(shí)別機(jī)制。江蘇正??贵w費(fèi)用
單克隆抗體可以用于篩選藥物候選物。四川Prestige Antibodies抗體試劑
抗體的分類:1、免疫球蛋白可分為兩種類型:(1)分泌性免疫球蛋白:存在于血清、體液以及分泌液中,具有抗體的各種功能。(2)膜型免疫球蛋白:位于B淋巴細(xì)胞的表面,即膜表面免疫球蛋白(mIg),是B淋巴細(xì)胞的抗原識(shí)別受體(BCR)。2、根據(jù)所對(duì)應(yīng)的抗原分:3、根據(jù)有無(wú)抗原刺激分:4、根據(jù)與抗原反應(yīng)的性質(zhì)分:5、根據(jù)抗原性分:免疫球蛋白的理化性質(zhì);免疫球蛋白是多鏈糖蛋白,具有蛋白質(zhì)的通性,對(duì)物理及化學(xué)因素敏感,不耐熱,在60~70℃時(shí)即被破壞,能被多種蛋白水解酶裂解破壞,可在乙醇、三氯醋酸或中性鹽類中沉淀。因此,通常用50%飽和硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中提取抗體。四川Prestige Antibodies抗體試劑