多克隆抗體免疫動物:抗體的效價鑒定 不管是用于診斷還是用于調(diào)理,制備抗體的目的都是要求較高效價。不同的抗原制備的抗體,要求的效價不一。鑒定效價的方法很多,包括有試管凝集反應(yīng)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價,一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)來鑒定。抗體的特異性鑒定 抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識別能力??贵w的特異性高,它的識別能力就強(qiáng)。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來表示。交叉反應(yīng)率可用競爭抑制試驗(yàn)測定。抗體的生產(chǎn)通常需要利用動物模型或體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。北京多克隆抗體哪家好
多克隆抗體免疫動物:免疫劑量與注射途徑有關(guān),一般而言,靜脈注射劑量大于皮下注射,而皮下注射又比掌內(nèi)和跖內(nèi)皮下注射劑量大,也可采用淋巴結(jié)內(nèi)注射法。加佐劑比不加佐劑的注射劑量要小,對家兔而言,采用弗氏完全佐劑,則需注射 0.5mg~1mg/kg./次,如采用弗氏不完全佐劑則注射劑量應(yīng)大10 倍以上。如要制備高度特異性的抗血清,可選用低劑量抗原短程免疫法。如需要獲得高效價的抗血清,宜采用大劑量長程免疫法。免疫周期長者,可少量多次。免疫周期短者,應(yīng)大量少次。 兩次注射的間隔時間應(yīng)長短適宜,太短起不到再次反應(yīng)的效果太長則失去了前一次激發(fā)的敏感作用。一般間隔時間應(yīng)為 5~7 天,加佐劑者應(yīng)為 2 周左右。 注射的 Ig 純度高,則一般不易引起過敏反應(yīng),如注射血清,即使是少量,在再次免疫時,極易引起過敏反應(yīng),所以一定要采取措施。河南兔抗富含脯氨酸蛋白11多克隆抗體供應(yīng)商抗體的中和作用是通過阻止病原體與宿主細(xì)胞結(jié)合而抑制傳染的擴(kuò)散。
抗體的多樣性:人血清中的抗體多種多樣,B淋巴細(xì)胞可產(chǎn)生的抗體種類在108以上,可與眾多不同抗原發(fā)生特異性結(jié)合。每種基因片段是以多拷貝的形式存在,其中編碼重鏈V區(qū)的VH、DH和JH的基因片段數(shù)分別為50、23和6個;編碼K輕鏈V區(qū)的Vx和JK基因片段數(shù)分別為60和5個,編碼入輕鏈V區(qū)的VX和J入基因片段數(shù)分別為30和7個。這些基因在胚系階段以分隔的形式存在。在B細(xì)胞的分化發(fā)育過程中,這些基因片段發(fā)生重排和組合,從而產(chǎn)生數(shù)量巨大、能識別特異性抗原的BCR。每種具有特異性BCR的B細(xì)胞克隆可識別相應(yīng)的抗原,產(chǎn)生一種特異性抗體。Ig基因重組是B細(xì)胞合成無數(shù)特異性抗體的主要原因。
抗體木瓜蛋白酶水解片段:木瓜蛋白酶水解Ig的部位是在鉸鏈區(qū)二硫鍵連接的兩條重鏈的近N端,可將Ig裂解為兩個完全相同的Fab段和一個Fc段。Fab段即抗原結(jié)合片段(fragment antigenbinding,F(xiàn)ab),由一條完整的輕鏈與重鏈的VH和CHl結(jié)構(gòu)域組成。一個Fab片段為單價,可與抗原結(jié)合但不產(chǎn)生凝集反應(yīng)或沉淀反應(yīng);Fc段即可結(jié)晶片段(fragment crystallizable,F(xiàn)c),由Ig的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域組成。Fc段無抗原結(jié)合活性,是Ig與效應(yīng)分子或細(xì)胞相互作用的部位??贵w的結(jié)構(gòu)多樣性使得它們能夠識別和結(jié)合各種形狀和性質(zhì)的分子。
單克隆抗體技術(shù)在臨床應(yīng)用中為疾病的診斷、調(diào)理提供了新手段,作為調(diào)理用藥物,單克隆抗體主要應(yīng)用于瘤細(xì)胞、自身免疫疾病、部位移植排斥及病毒傳染等領(lǐng)域。單克隆抗體也可用于瘤細(xì)胞的導(dǎo)向調(diào)理,將針對某一瘤細(xì)胞抗原的單克隆抗體與化療或放療藥物連接,利用單克隆抗體的專一性識別結(jié)合特點(diǎn),將藥物攜帶至靶細(xì)胞并直接將其殺傷。由于單克隆抗體具有特異性強(qiáng)、純度高、均一性好等優(yōu)點(diǎn),極大促進(jìn)了單克隆抗體檢測試劑盒的發(fā)展,在病原微生物、瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子的檢測診斷中廣泛應(yīng)用。若將放射性標(biāo)記物與單克隆抗體連接,注入患者體內(nèi)后可進(jìn)行放射免疫顯像,協(xié)助瘤細(xì)胞的診斷。重組抗體技術(shù)使得科學(xué)家能夠定制和改良抗體,以應(yīng)對不同的疾病挑戰(zhàn)。河南兔抗富含脯氨酸蛋白11多克隆抗體供應(yīng)商
抗體對于病毒傳染的控制尤為重要,如針對HIV的中和抗體研究具有重要意義。北京多克隆抗體哪家好
1975年,Kohler和Milstein建立了單克隆抗體(monoclonai antibody,mAb)技術(shù),使規(guī)?;苽涓咛禺愋?、均質(zhì)性抗體成為可能。然而,鼠源性mAb在人體反復(fù)免疫后出現(xiàn)的人抗鼠抗體(human anti-mouseantibody,HAMA)很大程度上限制了mAb的臨床應(yīng)用。近年來,隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,人們已經(jīng)可以通過抗體工程技術(shù)制備人一鼠嵌合抗體、人源化抗體或人源抗體。天然的抗原分子中常含有多種不同的抗原表位,以該抗原刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)可同時啟動多種B細(xì)胞克隆,產(chǎn)生的抗體中會含有多種針對不同抗原表位的抗體,因此稱之為多克隆抗體。北京多克隆抗體哪家好