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鹽法提取是利用各種不同的鹽在不同的濃度條件下提取鹽溶性膠原蛋白的方法。常用來提取膠原的鹽有鹽酸-三羥甲基胺基甲烷(Tris-HCl)、氯化鈉、檸檬酸鹽等。在中性條件下,當(dāng)鹽的濃度達(dá)到一定量時(shí),膠原就會(huì)溶解在其中,但是膠原的溶解和分級(jí)受中性鹽效應(yīng)影響,有的鹽可提高膠原的穩(wěn)定性,而有的則可降低其構(gòu)象穩(wěn)定性,從而對(duì)提取天然膠原蛋白很不利。此外,可采用不同濃度的氯化鈉對(duì)提取的膠原蛋白進(jìn)行鹽析處理,可以沉淀出不同類型的膠原蛋白。愛美的人士都知道,豬蹄、鳳爪等這樣的食物中含有豐富的膠原蛋白。黑龍江小分子膠原蛋白口服液
膠原蛋白是生物高分子,動(dòng)物結(jié)締組織中的主要成分,也是哺乳動(dòng)物體內(nèi)含量較多、分布較廣的功能性蛋白,占蛋白質(zhì)總量的25%~30%,某些生物體甚至高達(dá)80%以上。 畜禽源動(dòng)物組織是人們獲取天然膠原蛋白及其膠原肽的主要途徑,但由于相關(guān)畜類疾病和某些宗教信仰限制了人們對(duì)陸生哺乳動(dòng)物膠原蛋白及其制品的使用,現(xiàn)今正在逐步轉(zhuǎn)向海洋生物中開發(fā)。歐洲食品安全局(EFSA)已證實(shí)了即使是動(dòng)物骨骼來源的膠原蛋白也不存在傳染瘋牛病和其它相關(guān)疾病的可能。骨膠原蛋白固體飲料膠原蛋白分子經(jīng)水解后主要形成相對(duì)分子量較小的膠原多肽。
有人對(duì)海參膠原研究發(fā)現(xiàn),刺參體壁含蛋白,其中70%為膠原蛋白。氨基酸分析,膠原富含丙氨酸和羥脯氨酸,但羥賴氨酸含量較少,SDS電泳及SP凝膠柱分析發(fā)現(xiàn)其膠原組成為(α1)2α2。還有人從仿刺參()提取膠原蛋白,利用EDTA和Tris-HCl浸泡溶漲,用氫氧化鈉除去雜質(zhì)和非膠原蛋白,采用胃蛋白酶促溶提取粗制膠原,通過鹽析和透析獲取精致膠原蛋白,并進(jìn)一步利用SephacrylS-300HR凝膠過濾和DEAE-52陰離子交換除去多糖,獲取膠原蛋白純品。SDS-PAGE電泳表明膠原分子的組成為(α1)3,且α鏈類似于脊椎動(dòng)物Ⅰ型膠原的α1鏈,熱收縮溫度為57℃,低于牛皮膠原5℃。還有人對(duì)采自日本Senzaki海灣的Stomolopusmeleagri水母的外傘組織進(jìn)行了分析。整個(gè)中膠層被分成三部分,利用醋酸首先將凍干的水母中膠層分為酸溶性蛋白和酸不溶性物質(zhì),利用NaCl溶液將酸溶性蛋白分為酸溶性膠原蛋白和酸溶性非膠原蛋白,而不溶入醋酸的中膠層經(jīng)胃蛋白酶處理后大多變?yōu)榭扇苄缘哪z原質(zhì)。然后利用氨基酸分析儀對(duì)分離得到的三部分的組成分別進(jìn)行分析。發(fā)現(xiàn)該水母外傘中膠原蛋白含量很高,大約占干重的。經(jīng)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析其膠原蛋白是由三個(gè)獨(dú)特α鏈組成。
膠原蛋白由動(dòng)物皮提取,皮中除膠原蛋白外還含有透明質(zhì)酸、硫酸軟骨素等蛋白多糖,它們含有大量極性基團(tuán),是保濕因子,且有阻止皮膚中的酪氨酸轉(zhuǎn)化為黑色素的作用,故膠原蛋白有天然保濕、美白、防皺、淡斑等作用,可廣泛應(yīng)用于美容用品中。膠原蛋白的化學(xué)組成、結(jié)構(gòu)賦予了它是美容的基礎(chǔ)。膠原蛋白與人體皮膚膠原的結(jié)構(gòu)相似,為非水溶性纖維狀含糖蛋白質(zhì),分子中富含大量氨基酸和親水基,具有一定的表面活性和很好的相容性,同時(shí)由于其分子中含有大量的羥基,因此它有著相當(dāng)好的保濕作用。在相對(duì)濕度70%時(shí),仍可保持其自身重量45%的水分。試驗(yàn)證明:0.01%的膠原蛋白純?nèi)芤壕湍苄纬珊芎玫谋K畬?,供給皮膚所需要的全部水分。采用酶法提取膠原蛋白時(shí),必須嚴(yán)格控制提取條件。
酸法提取是利用一定濃度的酸溶液在一定的條件下提取膠原蛋白,主要采用低離子濃度酸性條件破壞分子間鹽鍵和希夫堿,而引起纖維膨脹、溶解,采用酸法提取的膠原蛋白通常成為酸溶性膠原蛋白。酸溶解法可將沒有交聯(lián)的膠原分子溶解出來,也可溶解含有醛胺類交聯(lián)鍵的膠原纖維,然后釋放到溶劑中。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法,用低溫酸法提取的膠原很大程度的保持了其三螺旋結(jié)構(gòu),適用于醫(yī)用生物材料及原料的制備。通常的做法是將適當(dāng)濃度的酸液按一定料液比加入到經(jīng)過預(yù)處理的骨粉中,于0~25℃攪拌提取一定時(shí)間。在采用酸法進(jìn)行膠原蛋白的提取時(shí),注意提取溫度不宜過高,以免膠原蛋白的生物活性發(fā)生破壞。取樣經(jīng)前處理后,勻漿在低溫下用酸浸提,離心即可得酸溶性膠原蛋白(acid-solublecollagen,ASC)。作為溶劑使用的酸,主要有鹽酸、磷酸、甲酸、乙酸、蘋果酸、檸檬酸等,但大多數(shù)研究集中于乙酸抽提,像MariaSadowska等用,其提取率略低于乙酸提取。檸檬酸因不產(chǎn)生顏色和異味得以比較廣使用于食品工業(yè)的膠原蛋白的提取。 海南省華上生物科技有限公司生產(chǎn)鱈魚小分子膠原蛋白肽產(chǎn)品、羅非魚膠原蛋白肽產(chǎn)品。浙江復(fù)合膠原蛋白
膠原蛋白能保持較好的組織穩(wěn)定性和機(jī)械抗張強(qiáng)度、免疫原性測試為陰性,符合臨床應(yīng)用。黑龍江小分子膠原蛋白口服液
膠原單獨(dú)使用,物理機(jī)械性能差(這幾乎是天然材料共有的弱點(diǎn)),性能單一,且因有親水性強(qiáng),在體內(nèi)易被膠原酶降解等不可避免的弱點(diǎn)限制了它的應(yīng)用。但如將膠原與其它物理、化學(xué)性質(zhì)不同的合成或天然高分子共混,組成一種多相固體材料,在性能上膠原與其它高分子互相補(bǔ)充,膠原基“復(fù)合材料”的概念由此產(chǎn)生。已見報(bào)道的與膠原共混的合成高分子有不可生物降解的聚甲基烯酸酯及丁烯酸酯、聚氨酯、聚酰胺和可生物降解的聚乙烯醇、聚乳酸、聚谷氨酸、聚乙醇酸等,20世紀(jì)80~90年代初較有代表性的是聚甲基丙烯酸羥乙酯(PHEMA)和聚乙烯醇與膠原共混,其報(bào)道集中于復(fù)合方法、復(fù)合機(jī)理、理化及生物學(xué)性能、材料表面和整體結(jié)構(gòu)、表面修飾的方法和機(jī)理以及水凝膠的溶脹擴(kuò)散等,尤其是水凝膠制備、作軟組織替代、藥物緩釋等。后來利用可生物降解的聚乳酸、聚乙醇酸、聚酸酐、聚谷氨酸、聚亞乙基四乙酸等與膠原共混改性制備可吸收外科縫線、組織工程支架材料(如組織引導(dǎo)再生材料)的相關(guān)研究相對(duì)增多。不過合成高分子與膠原蛋白共混復(fù)合一些問題,如尼龍等不降解高分子材料不能進(jìn)行生理代謝,與膠原蛋白復(fù)合后只能用做皮膚的外層敷料不能長久代替皮膚,而聚谷氨酸等可生物降解材料。 黑龍江小分子膠原蛋白口服液
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