膠原的相對分子質(zhì)量大，電泳圖有3條泳帶，在100kD附近出現(xiàn)的2條泳帶分別是膠原分子的α1鏈和α2鏈，在200kD附近出現(xiàn)的1條泳帶是膠原分子的β鏈。即膠原的每條多肽鏈相對分子質(zhì)量可達(dá)100kD，1個膠原分子相對分子質(zhì)量為300kD。多肽分子量的測定方法常用SDS-PAGE，凝膠色譜法以及質(zhì)譜法。有人采用凝膠過濾色譜法測定脫鉻革屑中膠原水解產(chǎn)物分子量分布在。飛行時間質(zhì)譜法測定比目魚皮膠原寡肽分子量的分布主要集中在～。動物蛋白酶水解后的膠原多肽的分子量在2～7kD，比植物蛋白酶水解的膠原多肽分子量范圍更廣。膠原的熱穩(wěn)定性是指測定其在水系中纖維的熱收縮溫度（Ts），或溶液中分子的熱變性溫度（Td）。Ts和Td之差一般在20～25℃，而Ts值較Td值容易測定。Td還可以表示膠原螺旋被破壞的溫度，另外還與其亞氨基酸（脯氨酸和羥脯氨酸）的含量有關(guān)，尤其是羥脯氨酸含量，它們之間存在正相關(guān)，冷水性魚類的羥脯氨酸含量比較低，所以冷水性魚類膠原蛋白Td值明顯低于暖水性魚類，而又都低于陸生動物。但魚皮膠原蛋白與魚肉膠原蛋白相比，其真皮的Td要比肌肉的低1℃左右，這與肌肉膠原中脯氨酸的羥基化率較真皮膠原高有關(guān)。有人測定了多種魚皮可溶性膠原蛋白的氨基酸組成。 膠原三肽更能有效的服務(wù)于人類的健康與美麗。四川深海鱈魚膠原蛋白

    可用于膠原蛋白的純化方法包括鹽析法、透析法、離心法、電泳法和色譜法，其中鹽析法、離心法和電泳法較為常用。由于單一方法難以完全分離純化膠原蛋白，實際操作都是通過復(fù)合法來達(dá)到分離純化膠原蛋白的目的。鹽析法一般采用高濃度NaCl；離心法常選用制備型低溫超速離心機(jī)；電泳法多采用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳法（SDS-PAGE），該法既可用于膠原蛋白的分離純化，還可用來測定膠原蛋白分子的相對分子質(zhì)量。像有人用破碎、酶解、鹽析三步法提純蘇尼特羊骨骼I型膠原蛋白。先去除骨頭里的非膠原物質(zhì)，然后往沉淀中10%的胃蛋白酶，在4℃的條件下消化24h，以14000r/min離心40min。棄沉淀往上清液中加NaCL，使它終濃度達(dá)到，靜止過夜，再離心，現(xiàn)在的沉淀就是I型膠原蛋白。 重慶骨膠原蛋白廠家在這些酶的較適作用溫度下提取可能會破壞膠原蛋白的某些功能特性和生物活性。

    隨著年齡的增長，成纖維細(xì)胞的合成能力下降，若皮膚中缺乏膠原蛋白，膠原纖維就會發(fā)生聯(lián)固化，使細(xì)胞間粘多糖減少，皮膚便會失去柔軟、彈性和光澤，發(fā)生老化，同時真皮的纖維斷裂、脂肪萎縮、汗腺及皮脂腺分泌減少，使皮膚出現(xiàn)色斑、皺紋等一系列老化現(xiàn)象。將其作為活性物質(zhì)用于化妝品中時，后者可以擴(kuò)散到皮膚的深層，其含有的酪氨酸與皮膚中的酪氨酸競爭，而與酪氨酸酶的催化中心結(jié)合，從而抑制黑色素的產(chǎn)生，使皮膚中的膠原蛋白活性增強(qiáng)，保持角質(zhì)層水分以及纖維結(jié)構(gòu)的完整性，促進(jìn)皮膚組織的新陳代謝，對皮膚產(chǎn)生良好的滋潤保濕、消皺美容作用。早在20世紀(jì)70年代初，美國就率先推出注射用牛膠原，用于淡斑除皺及修復(fù)瘢痕。[172-173]不過在化妝品中，單純用作營養(yǎng)性護(hù)膚類原料通常要求分子量在2KD以下，以讓水解膠原能滲透入皮膚內(nèi)。而護(hù)發(fā)類化妝品除要求水解膠原具有保濕性以外，還應(yīng)具有一定的成膜性，因此，水解膠原的分子量要求會更高。

    酸法處理時，反應(yīng)強(qiáng)烈，水解徹底，多生成氨基酸混合物，而且使用酸提取時，根據(jù)酸濃度、水解溫度、水解時間等條件的不同，可以得到分子量不均的膠原水解物。但是在即使中等濃度酸徹底水解過程中色氨酸也會全部被破壞，絲氨酸和酪氨酸也會部分被破壞，且設(shè)備腐蝕嚴(yán)重。因此，酸法溶出生物醫(yī)用膠原要準(zhǔn)確控制酸度、溫度、時間等影響因素。由于各種不足，酸法很少單獨(dú)使用，一般和酶法配合。比如以豬皮為原料，在檸檬酸（）和胃蛋白酶協(xié)同下提取膠原蛋白。在處理后的豬皮中加（）處理一段時間，然后再用NaCL鹽析，現(xiàn)在提取率為，提取物保持了完整三股螺旋結(jié)構(gòu)的I型膠原蛋白。還有人以雛雞胸軟骨為原材料，在，在4℃，20000r條件下離心20min，現(xiàn)在應(yīng)用DEAE-SephadexA-50進(jìn)行離子交換層析，之后透析，再用NaCL鹽析，現(xiàn)在得到純化的膠原蛋白Ⅱ型。 鹽法提取是利用各種不同的鹽在不同的濃度條件下提取鹽溶性膠原蛋白的方法。

    堿法提取即利用一定濃度的堿在一定的外界條件下提取膠原蛋白，堿處理法中常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等，用氫氧化鈉浸提時效果較好。一般的是把樣品勻漿后，用堿溶液多次溶脹后，再離心提取。但由于易引起蛋白質(zhì)變性，如膠原肽鍵水解，含羥基、疏基的氨基酸全部被破壞；所得產(chǎn)物等電點(diǎn)pH值較低，天冬酞胺和谷氨酞胺分別轉(zhuǎn)變?yōu)樘於彼岷凸劝彼?，得到的水解產(chǎn)物分子量較在酸性溶液中比低等問題，若比較嚴(yán)重的話，還會產(chǎn)生D、L-型氨基酸消旋混合物，若D型氨基酸含量高過L型氨基酸，則會抑制L-型氨基酸的吸收，有些D型氨基酸有毒，甚至有致ai、致畸和致突變的作用。而且堿法提取的含量較低，用氫氧化鈉從魷魚皮中提取堿溶性膠原蛋白，其得率只有3%（以濕基計）。所以，若想提取結(jié)構(gòu)完整、使用安全的膠原蛋白，很少采用此方法。有關(guān)單獨(dú)采用堿法提取膠原蛋白的報道不多，一般是堿法提取和酸法提法結(jié)合使用。比如在4℃條件下，魚骨用，再用，用10%的異丙醇溶液去除脂肪，，現(xiàn)在得到無色無味的膠原蛋白，提取率為。 羥脯氨酸殘基可通過形成分子內(nèi)氫鍵穩(wěn)定膠原蛋白分子。浙江海參膠原蛋白廠家

膠原蛋白保持角質(zhì)層水分及纖維結(jié)構(gòu)的完整性，改善皮膚細(xì)胞生存環(huán)境和促進(jìn)皮膚組織的新陳代謝。四川深海鱈魚膠原蛋白

免疫學(xué)分析和研究結(jié)果表明，使用膠原加完全弗氏佐劑，能對膠原產(chǎn)生多克隆和單克隆抗體。由T細(xì)胞啟動的對膠原蛋白免疫反應(yīng)的證據(jù)是，位于重要組織相容性（H-2）部位上ⅠA或ⅠB亞區(qū)的免疫反應(yīng)基因已被鑒定。膠原蛋白免疫原性的臨床評價通常是皮膚過敏性測試（細(xì)胞免疫指數(shù)，遲發(fā)性Ⅳ型反應(yīng)）和由反應(yīng)型抗體的存在（體液免疫指數(shù)）來確定的。實踐證明，在患者身上進(jìn)行這兩種評價是合理的。在治好前，用過敏劑量的植入性膠原對患者進(jìn)行皮試，大約3%有潛在的反應(yīng)，反復(fù)多次處理的患者，大約1%～2%會產(chǎn)生遲發(fā)性過敏性的臨床病狀。典型的癥狀包括局部水腫和紅斑反應(yīng)，有的還伴有硬化和瘙癢，持續(xù)時間4～6個月，個別甚至可達(dá)1年以上。四川深海鱈魚膠原蛋白

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