鹽法提取是利用各種不同的鹽在不同的濃度條件下提取鹽溶性膠原蛋白的方法。常用來(lái)提取膠原的鹽有鹽酸-三羥甲基胺基甲烷(Tris-HCl)、氯化鈉、檸檬酸鹽等。在中性條件下,當(dāng)鹽的濃度達(dá)到一定量時(shí),膠原就會(huì)溶解在其中,但是膠原的溶解和分級(jí)受中性鹽效應(yīng)影響,有的鹽可提高膠原的穩(wěn)定性,而有的則可降低其構(gòu)象穩(wěn)定性,從而對(duì)提取天然膠原蛋白很不利。此外,可采用不同濃度的氯化鈉對(duì)提取的膠原蛋白進(jìn)行鹽析處理,可以沉淀出不同類型的膠原蛋白。結(jié)合保濕和抑制皺紋的作用,共同達(dá)到舒展粗紋,淡化細(xì)紋的功效!廣東小分子膠原蛋白飲品
堿法提取即利用一定濃度的堿在一定的外界條件下提取膠原蛋白,堿處理法中常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等,用氫氧化鈉浸提時(shí)效果較好。一般的是把樣品勻漿后,用堿溶液多次溶脹后,再離心提取。但由于易引起蛋白質(zhì)變性,如膠原肽鍵水解,含羥基、疏基的氨基酸全部被破壞;所得產(chǎn)物等電點(diǎn)pH值較低,天冬酞胺和谷氨酞胺分別轉(zhuǎn)變?yōu)樘於彼岷凸劝彼?,得到的水解產(chǎn)物分子量較在酸性溶液中比低等問(wèn)題,若比較嚴(yán)重的話,還會(huì)產(chǎn)生D、L-型氨基酸消旋混合物,若D型氨基酸含量高過(guò)L型氨基酸,則會(huì)抑制L-型氨基酸的吸收,有些D型氨基酸有毒,甚至有致ai、致畸和致突變的作用。而且堿法提取的含量較低,用氫氧化鈉從魷魚(yú)皮中提取堿溶性膠原蛋白,其得率只有3%(以濕基計(jì))。所以,若想提取結(jié)構(gòu)完整、使用安全的膠原蛋白,很少采用此方法。有關(guān)單獨(dú)采用堿法提取膠原蛋白的報(bào)道不多,一般是堿法提取和酸法提法結(jié)合使用。比如在4℃條件下,魚(yú)骨用,再用,用10%的異丙醇溶液去除脂肪,,現(xiàn)在得到無(wú)色無(wú)味的膠原蛋白,提取率為。 廣東膠原蛋白肽膠原蛋白能保持較好的組織穩(wěn)定性和機(jī)械抗張強(qiáng)度、免疫原性測(cè)試為陰性,符合臨床應(yīng)用。
膠原蛋白是一類蛋白質(zhì)家族,已至少發(fā)現(xiàn)了30余種膠原蛋白鏈的編碼基因,可以形成16種以上的膠原蛋白分子,根據(jù)其結(jié)構(gòu),可以分為纖維膠原、基膜膠原、微纖維膠原、錨定膠原、六邊網(wǎng)狀膠原、非纖維膠原、跨膜膠原等。根據(jù)它們?cè)隗w內(nèi)的分布和功能特點(diǎn),可以將膠原分成間質(zhì)膠原、基底膜膠原和細(xì)胞外周膠原。間質(zhì)型膠原蛋白分子占整個(gè)機(jī)體膠原的絕大部分,包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型膠原蛋白分子,Ⅰ型膠原蛋白主要分布于皮膚、肌腱等組織,也是水產(chǎn)品加工廢棄物(皮、骨和鱗)含量較多的蛋白質(zhì),占全部膠原蛋白含量的80%~90%左右,在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用較為比較廣。Ⅰ型膠原在魚(yú)類膠原中一個(gè)較明顯的的特點(diǎn)是熱穩(wěn)定性比較低,并呈現(xiàn)有魚(yú)種的特異性。Ⅱ型膠原蛋白由軟骨細(xì)胞產(chǎn)生;基底膜膠原蛋白通常是指Ⅳ型膠原蛋白,其主要分布于基底膜;細(xì)胞外周膠原蛋白通常中指Ⅴ型膠原蛋白,在結(jié)締組織中大量存在。按功能,可將膠原分為兩組,首先組是成纖維膠原,包括第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅺ、ⅩⅩⅣ和ⅩⅩⅦ型膠原;其余是第二組,非成纖維膠原。非成纖維膠原的α-鏈既含有三螺旋域(膠原域,COL),還含有非三螺旋域(非膠原域,NC),其中成纖維膠原約占膠原總數(shù)的90%。
膠原蛋白亦可用于食品,早在十二世紀(jì)Bingen的,在相當(dāng)長(zhǎng)的一段時(shí)間里,含膠原的一些產(chǎn)品被人們認(rèn)為對(duì)關(guān)節(jié)是很有益處的。因?yàn)樗哂羞m用于食品的一些屬性:食用級(jí)通常外觀為白色,口感柔和,味道清淡,易消化??梢越档脱视腿ズ湍懝檀?,并可以增高體內(nèi)某些缺乏的必需微量元素使之維持在一個(gè)相對(duì)的正常范圍之內(nèi),它是一種理想的降血脂食品。此外,有研究表明,膠原蛋白可以協(xié)助排除體內(nèi)的鋁,減少鋁在體內(nèi)的聚集,降低鋁質(zhì)對(duì)人體的危害,并一定程度上促進(jìn)指甲和頭發(fā)的生長(zhǎng)。Ⅱ型膠原是關(guān)節(jié)軟骨中的主要蛋白,因而是潛在的自身抗原。口服后能誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生免疫耐受,從而抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病。膠原多肽是膠原或明膠經(jīng)蛋白酶等降解處理后制得的具有較高消化吸收性、分子量約為2000~30000的產(chǎn)物,不具有明膠的凝膠性能,市場(chǎng)上銷售的膠原多為膠原多肽。 海南省華上生物科技有限公司生產(chǎn)鱈魚(yú)小分子膠原蛋白肽產(chǎn)品、羅非魚(yú)膠原蛋白肽產(chǎn)品。
在水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)膠原蛋白含量高于陸生動(dòng)物,如鰱魚(yú)、鳙魚(yú)和草魚(yú)魚(yú)皮的蛋白質(zhì)含量分別為、,均高于各自相應(yīng)魚(yú)肉的蛋白質(zhì)含量:、。而魚(yú)皮中的膠原含量比較高可超過(guò)其蛋白質(zhì)總量的80%,較魚(yú)體的其它部位要高許多,有研究報(bào)道真鯛魚(yú)皮中膠原蛋白占粗蛋白的,鰻鱺則高達(dá)。如此高的含量意味著得率也高,如小鮪鰹;日本海鱸;香魚(yú);黃海鯛;竹莢魚(yú)(均以干重計(jì))。但膠原蛋白的種類要少得多,已從魚(yú)類中分離鑒定出的膠原類型有:比較廣分布在真皮、骨、鱗、鰾、肌肉等處的I型、軟骨和脊索的Ⅱ型和Ⅺ型以及肌肉的V型。而魚(yú)皮和魚(yú)骨所含的Ⅰ型膠原蛋白是其主要膠原蛋白。此外,還發(fā)現(xiàn)ⅩⅧ型膠原,然而哺乳動(dòng)物中含量比較豐富的Ⅲ型膠原,在水產(chǎn)動(dòng)物中尚未發(fā)現(xiàn)。其中只有Ⅰ型膠原蛋白的價(jià)格人們才可以接受;其它類型的膠原如Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ等只在研究中制備,由于價(jià)格昂貴都不宜于大量生產(chǎn)。 酶解膠原蛋白的工藝主要分為單酶水解法和多酶水解法。河北復(fù)合膠原蛋白肽廠家
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可用于膠原蛋白的純化方法包括鹽析法、透析法、離心法、電泳法和色譜法,其中鹽析法、離心法和電泳法較為常用。由于單一方法難以完全分離純化膠原蛋白,實(shí)際操作都是通過(guò)復(fù)合法來(lái)達(dá)到分離純化膠原蛋白的目的。鹽析法一般采用高濃度NaCl;離心法常選用制備型低溫超速離心機(jī);電泳法多采用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳法(SDS-PAGE),該法既可用于膠原蛋白的分離純化,還可用來(lái)測(cè)定膠原蛋白分子的相對(duì)分子質(zhì)量。像有人用破碎、酶解、鹽析三步法提純蘇尼特羊骨骼I型膠原蛋白。先去除骨頭里的非膠原物質(zhì),然后往沉淀中10%的胃蛋白酶,在4℃的條件下消化24h,以14000r/min離心40min。棄沉淀往上清液中加NaCL,使它終濃度達(dá)到,靜止過(guò)夜,再離心,現(xiàn)在的沉淀就是I型膠原蛋白。 廣東小分子膠原蛋白飲品
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