一直以來，病毒基因組測(cè)序都是疾病診斷、流行病學(xué)調(diào)查和宿主-病原關(guān)系研究的重要手段。病毒的全基因組測(cè)序以及對(duì)應(yīng)的生物信息學(xué)分析方法是研究病毒進(jìn)化、毒力因子變異、疫病爆發(fā)之間的關(guān)系、疫病傳播途徑、不同遺傳變異的分布模式、疫病發(fā)生地理區(qū)域的基礎(chǔ)。與傳統(tǒng)Sanger測(cè)序相比，NGS技術(shù)的發(fā)展使得一個(gè)小的研究小組可以擁有大量病毒株的全基因組序列，測(cè)序成本也在逐步降低。由于NGS產(chǎn)生的數(shù)據(jù)量非常龐大，其序列拼接難度也隨之增加。而且對(duì)于低濃度高復(fù)雜度的樣本，研究者除了PCR外別無(wú)他法。而PCR方法往往具有偏好性，丟失的片段將為序列組裝帶來非常高的失敗率。對(duì)于完全未知的樣本，無(wú)法通過PCR進(jìn)行富集，要鑒定其種類需要調(diào)用各種方法，逐個(gè)嘗試工作量之大，其效率之低，使得一個(gè)新的研究方法的出現(xiàn)及其必要。測(cè)序的完成程度，決定著基因組的下游應(yīng)用。病毒全序列測(cè)序突變分析診斷
病毒全基因組測(cè)序，高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展在生物信息學(xué)分析方面，通過新的分析軟件的研發(fā)和原有分析軟件的升級(jí)，對(duì)測(cè)序所得數(shù)據(jù)的分析也變得更加可靠；除此之外，伴隨著BasSpace等服務(wù)的出現(xiàn)，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析工作所需的設(shè)備成本也在逐步降低。將來，伴隨著高通量測(cè)序技術(shù)與數(shù)據(jù)分析技術(shù)的不斷進(jìn)步，測(cè)序精度與可靠性的上升，測(cè)序與數(shù)據(jù)分析成本的下降，高通量測(cè)序技術(shù)會(huì)在各個(gè)領(lǐng)域得到應(yīng)用。在病原微生物檢測(cè)和鑒定應(yīng)用中，高通量測(cè)序技術(shù)勢(shì)必會(huì)成為不可或缺的技術(shù)并發(fā)揮越來越重要的作用。高通量測(cè)序?qū)嶒?yàn)足夠靈敏和完善，方能獲得準(zhǔn)確、可信任的結(jié)果。山東病毒二代測(cè)序突變分析排行傳統(tǒng)Sanger測(cè)序相比，NGS技術(shù)的發(fā)展使得一個(gè)小的研究小組可以擁有大量病毒株的全基因組序列。
高通量測(cè)序技術(shù)又稱“下一代“測(cè)序技術(shù)或深度測(cè)序技術(shù)，可以一次性對(duì)幾十萬(wàn)至幾百萬(wàn)條DNA分子進(jìn)行序列測(cè)定?，F(xiàn)已普遍應(yīng)用在基因組測(cè)序、基因表達(dá)分析、非編碼小分子RNA鑒定、轉(zhuǎn)錄因子靶基因篩選及DNA甲基化等相關(guān)的研究領(lǐng)域。高通量測(cè)序技術(shù)是對(duì)傳統(tǒng)測(cè)序一次性的改變，一次對(duì)幾十萬(wàn)到幾百萬(wàn)條DNA分子進(jìn)行序列測(cè)定，因此在有些文獻(xiàn)中稱其為下一代測(cè)序技術(shù)(nextgenerationsequencing)足見其劃時(shí)代的改變，同時(shí)高通量測(cè)序使得對(duì)一個(gè)物種的轉(zhuǎn)錄組和基因組進(jìn)行細(xì)致全貌的分析成為可能，所以又被稱為深度測(cè)序(deepsequencing)。
有哪些病毒學(xué)研究常用方法？細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect，CPE）：由病毒增殖引起的細(xì)胞改變稱細(xì)胞病變效應(yīng)。不同種類病毒可引起不同細(xì)胞病變效應(yīng)。如：①細(xì)胞圓縮、分散、溶解，如腸道病毒、鼻病毒、披膜病毒、痘病毒等；②細(xì)胞融合成多核巨細(xì)胞，如皰疹病毒、副粘病毒、呼吸道合胞病毒；③細(xì)胞腫脹、顆粒增多、病變細(xì)胞聚集成葡萄狀，如腺病毒；④胞質(zhì)出現(xiàn)空泡，如SV40細(xì)胞；⑤細(xì)胞漿或核內(nèi)出現(xiàn)嗜酸性或嗜堿性包涵體，一至數(shù)個(gè)不等；⑥輕微病變，如正粘病毒、狂犬病毒、冠狀病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒等；⑦培養(yǎng)液pH的變化。高通量測(cè)序技術(shù)是對(duì)傳統(tǒng)測(cè)序一次性的改變。
高通量基因組測(cè)序中，什么是測(cè)序深度和覆蓋度？測(cè)序深度是指測(cè)序得到的總堿基數(shù)與待測(cè)基因組大小的比值。假設(shè)一個(gè)基因大小為2M，測(cè)序深度為10X，那么獲得的總數(shù)據(jù)量為20M。覆蓋度是指測(cè)序獲得的序列占整個(gè)基因組的比例。由于基因組中的高GC、重復(fù)序列等復(fù)雜結(jié)構(gòu)的存在，測(cè)序終拼接組裝獲得的序列往往無(wú)法覆蓋有所的區(qū)域，這部分沒有獲得的區(qū)域就稱為Gap。例如一個(gè)細(xì)菌基因組測(cè)序，覆蓋度是98%，那么還有2%的序列區(qū)域是沒有通過測(cè)序獲得的。想要通過高通量測(cè)序獲得病毒全序列，需要經(jīng)歷:核酸純化-文庫(kù)構(gòu)建-生物信息學(xué)分析這三大基本流程.山東病毒二代測(cè)序突變分析排行
通過對(duì)病毒全基因組高通量測(cè)序可以在較短時(shí)間內(nèi)獲取病毒的全部基因信息，解釋病毒的來源。病毒全序列測(cè)序突變分析診斷
病毒全基因組測(cè)序鑒定：探普生物對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序的實(shí)驗(yàn)基于二代測(cè)序技術(shù)。樣本經(jīng)過核酸純化-文庫(kù)構(gòu)建-生物信息學(xué)分析這3大基本流程后轉(zhuǎn)換成了序列數(shù)據(jù)。首先，在核酸純化環(huán)節(jié)，探普提供專門針對(duì)性的核酸純化樣本指南，以提高目的物種的核酸純度和得率，與此同時(shí)探普生物也提供核酸純化服務(wù)。第二，文庫(kù)構(gòu)建環(huán)節(jié)，樣本的核酸具備濃度低，總量少的特點(diǎn)。探普生物專門針對(duì)這一點(diǎn)開發(fā)了超微量核酸文庫(kù)構(gòu)建，可以將0.01ng/μl甚至更低濃度的核酸構(gòu)建成測(cè)序文庫(kù)。第三，生物信息學(xué)分析環(huán)節(jié)。生存環(huán)境和狀態(tài)決定了對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序的下機(jī)數(shù)據(jù)一般都伴隨大量的宿主和其他微生物的數(shù)據(jù)。探普生物基于該特點(diǎn)，優(yōu)化了自有數(shù)據(jù)庫(kù)，搭載了專門用的的生物信息學(xué)分析流程，可處理復(fù)雜背景下的目標(biāo)物種序列。病毒全序列測(cè)序突變分析診斷