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病毒基因組測(cè)序的五條標(biāo)準(zhǔn)是:測(cè)序的完成程度,決定著基因組的下游應(yīng)用,包括設(shè)計(jì)診斷產(chǎn)品、反向遺傳系統(tǒng)以及開(kāi)發(fā)調(diào)整對(duì)策等?;蚪M是生物體內(nèi)的遺傳物質(zhì),以DNA或RNA的形式編碼。病毒基因組包括基因和一些非編碼的DNA或RNA序列,含有病毒復(fù)制和傳播所必需的信息。因此,確定這些序列可以獲得寶貴的信息,可以應(yīng)用于各種醫(yī)學(xué)和科研領(lǐng)域。高通量測(cè)序技術(shù)飛速發(fā)展,現(xiàn)在幾乎所有的病毒研究方向都涉及了測(cè)序,包括分子流行病學(xué)、藥物和疫苗開(kāi)發(fā)、病毒的監(jiān)控與診斷等等。探普生物接觸到的病毒全基因組測(cè)序項(xiàng)目有比較豐富的應(yīng)用場(chǎng)景。廣州病毒序列測(cè)序服務(wù)
目前深度測(cè)序數(shù)據(jù)是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域數(shù)量增加快、應(yīng)用廣的數(shù)據(jù),對(duì)這些數(shù)據(jù)的管理、分析和應(yīng)用給生物信息學(xué)帶來(lái)了巨大的挑戰(zhàn)。早期的測(cè)序技術(shù)是“測(cè)定沒(méi)有計(jì)算快”,下一代測(cè)序技術(shù)發(fā)展以來(lái),變?yōu)槿缃竦摹坝?jì)算沒(méi)有測(cè)定快”。深度測(cè)序數(shù)據(jù)的迅猛增長(zhǎng)使得數(shù)據(jù)科學(xué)分析方面的人才十分缺乏,深度測(cè)序和大數(shù)據(jù)處理都是新生事物,將深度測(cè)序數(shù)據(jù)應(yīng)用到臨床更需要數(shù)學(xué)統(tǒng)計(jì)、計(jì)算機(jī)和生物、臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的多學(xué)科交叉的高級(jí)人才。測(cè)序深度是測(cè)序量除以基因組長(zhǎng)度,例如測(cè)序深度10*就相當(dāng)于測(cè)了10次的全基因組。國(guó)內(nèi)病毒全序列原理高通量測(cè)序技術(shù)正式啟用之后,研究者可以將樣品處理至標(biāo)準(zhǔn)濃度和體積后進(jìn)行測(cè)序和分析.
全基因組測(cè)序需要要注意的事項(xiàng)包括:全基因組測(cè)序是對(duì)未知基因組序列的物種進(jìn)行個(gè)體的基因組測(cè)序。技術(shù)路線:提取基因組DNA,然后隨機(jī)打斷,電泳回收所需長(zhǎng)度的DNA的片段(),加上接頭,進(jìn)行DNA簇(Cluster)制備,后利用Paired-End(Solexa)或者M(jìn)ate-Pair(SOLiD)的方法對(duì)插入片段進(jìn)行測(cè)序。然后對(duì)測(cè)得的序列組裝成Contig,通過(guò)Paired-End的距離可進(jìn)一步組裝成Scaffold,進(jìn)而可組裝成染色體等。組裝效果與測(cè)序深度與覆蓋度、測(cè)序質(zhì)量等有關(guān)。常用的組裝有:SOAPdenovo、Trimity、Abyss等。測(cè)序深度(Sequencingdepth)是指測(cè)序得到的堿基總量(bp)與基因組大小的比值,它是評(píng)價(jià)測(cè)序量的指標(biāo)之一。測(cè)序深度與基因組覆蓋度之間是一個(gè)正相關(guān)的關(guān)系,測(cè)序帶來(lái)的錯(cuò)誤率或假陽(yáng)性結(jié)果會(huì)隨著測(cè)序深度的提升而下降。測(cè)序的個(gè)體,如果采用的是雙末端或Mate-Pair方案,當(dāng)測(cè)序深度在50X~100X以上時(shí),基因組覆蓋度和測(cè)序錯(cuò)誤率控制均得以保證,后續(xù)序列組裝成染色體才能變得更容易與準(zhǔn)確。
對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序時(shí),生物信息學(xué)分析是如何進(jìn)行的?生存環(huán)境和狀態(tài)決定了對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序的下機(jī)數(shù)據(jù)一般都伴隨大量的宿主和其他微生物的數(shù)據(jù)。探普生物基于該特點(diǎn),優(yōu)化了自有數(shù)據(jù)庫(kù),搭載了的生物信息學(xué)分析流程,可處理復(fù)雜背景下的目標(biāo)物種序列。探普生物基于該特點(diǎn),優(yōu)化了自有數(shù)據(jù)庫(kù),專(zhuān)門(mén)搭載了生物信息學(xué)分析流程,可處理復(fù)雜背景下的目標(biāo)物種序列。生物信息學(xué)流程主要包括對(duì)非目標(biāo)數(shù)據(jù)進(jìn)行去除以及對(duì)目標(biāo)序列進(jìn)行篩選,高質(zhì)量高完整度的序列拼接以及后續(xù)的高級(jí)分析,如SNP分析,進(jìn)化分析,耐藥位點(diǎn)分析等。在探普的流程下,可以獲得完整性很高的基因組序列。對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序主要是通過(guò)非特異性擴(kuò)增+克隆結(jié)合sanger測(cè)序來(lái)完成。
一直以來(lái),病毒基因組測(cè)序都是疾病診斷、流行病學(xué)調(diào)查和宿主-病原關(guān)系研究的重要手段。病毒的全基因組測(cè)序以及對(duì)應(yīng)的生物信息學(xué)分析方法是研究病毒進(jìn)化、毒力因子變異、疫病爆發(fā)之間的關(guān)系、疫病傳播途徑、不同遺傳變異的分布模式、疫病發(fā)生地理區(qū)域的基礎(chǔ)。與傳統(tǒng)Sanger測(cè)序相比,NGS技術(shù)的發(fā)展使得一個(gè)小的研究小組可以擁有大量病毒株的全基因組序列,測(cè)序成本也在逐步降低。由于NGS產(chǎn)生的數(shù)據(jù)量非常龐大,其序列拼接難度也隨之增加。而且對(duì)于低濃度高復(fù)雜度的樣本,研究者除了PCR外別無(wú)他法。而PCR方法往往具有偏好性,丟失的片段將為序列組裝帶來(lái)非常高的失敗率。對(duì)于完全未知的樣本,無(wú)法通過(guò)PCR進(jìn)行富集,要鑒定其種類(lèi)需要調(diào)用各種方法,逐個(gè)嘗試工作量之大,其效率之低,使得一個(gè)新的研究方法的出現(xiàn)及其必要。全基因組測(cè)序注意事項(xiàng):要找正規(guī)的機(jī)構(gòu)。RNA高通量測(cè)序公司
病毒全基因組測(cè)序基于PCR技術(shù)和抗原抗體技術(shù)的售后驗(yàn)證平臺(tái),致力于解決臨床的每一個(gè)疑問(wèn)。廣州病毒序列測(cè)序服務(wù)
病毒(Virus)由一種核酸分子(DNA或RNA)與蛋白質(zhì)(Protein)構(gòu)成或由蛋白質(zhì)構(gòu)成(如朊病毒)。根據(jù)遺傳物質(zhì)的組成,可分為單鏈DNA病毒(ssDNA)、雙鏈DNA病毒(dsDNA)、單鏈RNA病毒(ssRNA)、雙鏈RNA病毒(dsRNA)和蛋白質(zhì)病毒(如朊病毒)。根據(jù)宿主類(lèi)型的不同,可以分為噬菌體(細(xì)菌病毒)、植物病毒(煙花葉病毒)和動(dòng)物病毒(如禽流感病毒、天花病毒和HIV等)。病毒全基因組測(cè)序(VirusWholeGenomeSequencing,VWGS),是指基于第二代高通量測(cè)序技術(shù),對(duì)病毒全基因組進(jìn)行測(cè)序,利用生物信息分析手段,得到病毒的全基因組序列,解析編碼信息,并獲得相應(yīng)的變異信息。廣州病毒序列測(cè)序服務(wù)