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RNA全基因組病毒測序分析檢測

來源: 發(fā)布時間:2024-06-28

深度測序與個性化醫(yī)學(xué)的范式相比,P4醫(yī)學(xué)更強(qiáng)調(diào)早期預(yù)測和預(yù)防,強(qiáng)調(diào)對患者了解的系統(tǒng)性和參與性。準(zhǔn)確醫(yī)學(xué)的概念則是在基因測序普及的基礎(chǔ)上,將整個個體的各種信息如生理信息(通過可穿戴設(shè)備可以即時監(jiān)控和收集到)和腸道菌群變化、各種組學(xué)信息(深度測序測定)整合,進(jìn)行準(zhǔn)確的疾病分型、調(diào)整和預(yù)防。隨著老年化時代的到來及臨床資源的限制,基于這三種范式的健康管理和準(zhǔn)確診療將成為生物醫(yī)學(xué)研究與應(yīng)用的基本范式,走向大眾生活,正如當(dāng)年的計算機(jī)發(fā)展歷程一樣,會從原來的大型機(jī)器演變成可移動的小型工具。醫(yī)學(xué)與健康的將來也會隨著深度測序的普及和生物信息學(xué)數(shù)據(jù)處理能力的大幅度提高,而進(jìn)入個性化的大眾管理時代。病毒全基因組測序平臺,鍛煉出—批精通測序的檢測隊伍。RNA全基因組病毒測序分析檢測

高通量基因組測序中,什么是測序深度和覆蓋度?測序深度是指測序得到的總堿基數(shù)與待測基因組大小的比值。假設(shè)一個基因大小為2M,測序深度為10X,那么獲得的總數(shù)據(jù)量為20M。覆蓋度是指測序獲得的序列占整個基因組的比例。由于基因組中的高GC、重復(fù)序列等復(fù)雜結(jié)構(gòu)的存在,測序終拼接組裝獲得的序列往往無法覆蓋有所的區(qū)域,這部分沒有獲得的區(qū)域就稱為Gap。例如一個細(xì)菌基因組測序,覆蓋度是98%,那么還有2%的序列區(qū)域是沒有通過測序獲得的。病毒二代測序技術(shù)對病毒全基因組進(jìn)行測序,是利用生物信息分析手段,得到病毒的全基因組序列.

目前對我國首例輸入性裂谷熱病例病毒進(jìn)行全基因組測定,分析其進(jìn)化來源及潛在變異.方法提取樣本核酸,非特異性反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增病毒基因組RNA,使用IonTorrent二代測序儀進(jìn)行病毒全基因組測定.對獲得的基因組數(shù)據(jù)進(jìn)行序列拼接、比對、進(jìn)化樹構(gòu)建和關(guān)鍵位點分析.結(jié)果通過測定獲得了病毒全基因組11979nt,該測定病毒屬E基因分支,序列與先前南非分離株Kakamas相似度較高(>98%).病毒Gn蛋白C端信號肽區(qū)存在1個氨基酸突變.結(jié)論本研究分析測定的裂谷熱病毒全基因組與目前非洲流行株高度相似,病毒基因特征未出現(xiàn)明顯變異。

深度測序技術(shù)對科學(xué)研究范式相關(guān)影響表現(xiàn)在:個性化醫(yī)學(xué)、P4醫(yī)學(xué)和準(zhǔn)確醫(yī)學(xué)等研究范式都是在近幾年深度測序技術(shù)迅猛發(fā)展的基礎(chǔ)上提出的。個人基因組測定的可行性,使得大眾有可能測定和分析自己的基因組、尋找到個人健康相關(guān)的基因風(fēng)險因素,從而可以在生活習(xí)慣、飲食等方面提早進(jìn)行個性化預(yù)測和預(yù)防。由于互聯(lián)網(wǎng)的發(fā)展和即時檢驗技術(shù)(point-of-care-testing,POCT)的應(yīng)用,人們可以通過網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行交流和參與到整個診療過程,這便是P4醫(yī)學(xué)的概念:預(yù)測性(predictive)、預(yù)防性(preventive)、個性化(personalized)及參與性(participatory)。病毒全基因組進(jìn)行測序,"基因測序"是什么?讓我們來揭開它神秘的面紗。

一直以來,病毒基因組測序都是疾病診斷、流行病學(xué)調(diào)查和宿主-病原關(guān)系研究的重要手段。病毒的全基因組測序以及對應(yīng)的生物信息學(xué)分析方法是研究病毒進(jìn)化、毒力因子變異、疫病爆發(fā)之間的關(guān)系、疫病傳播途徑、不同遺傳變異的分布模式、疫病發(fā)生地理區(qū)域的基礎(chǔ)。與傳統(tǒng)Sanger測序相比,NGS技術(shù)的發(fā)展使得一個小的研究小組可以擁有大量病毒株的全基因組序列,測序成本也在逐步降低。由于NGS產(chǎn)生的數(shù)據(jù)量非常龐大,其序列拼接難度也隨之增加。而且對于低濃度高復(fù)雜度的樣本,研究者除了PCR外別無他法。而PCR方法往往具有偏好性,丟失的片段將為序列組裝帶來非常高的失敗率。對于完全未知的樣本,無法通過PCR進(jìn)行富集,要鑒定其種類需要調(diào)用各種方法,逐個嘗試,工作量之大,其效率之低,使得一個新的研究方法的出現(xiàn)及其必要。探普生物優(yōu)化了自有數(shù)據(jù)庫。DNA全基因組病毒測序診斷

高通量測序技術(shù)本身并不是以病毒為目標(biāo)開發(fā)的。RNA全基因組病毒測序分析檢測

RNA/DNA病毒測序?qū)Σ《净蚪M進(jìn)行測序是快速了解病毒突變、毒力變化、病毒型別的有效方法。可以根據(jù)病毒基因組大小和類型,采用PCR、RT-PCR或shotgun測序法,對病毒的部分或全長基因組測序,結(jié)果準(zhǔn)確可靠。服務(wù)標(biāo)準(zhǔn):測出的序列準(zhǔn)確性在99%以上;病毒全基因組測序測出序列在總基因組大小95%以上;數(shù)小于5個;Shotgun測序的覆蓋度在6以上;PCR和RT-PCR測序達(dá)到2。服務(wù)說明:1、提供病毒DNA或RNA作為樣品。2、PCR測序的DNA樣品總量大于5μg,濃度大于20ng/μl。DNA無降解。3、Shotgun測序法的DNA樣品總量大于20μg,濃度大于100ng/μl。DNA無降解。4、用RT-PCR和PCR測序法在提供參考序列時需同時提交樣品部分序列與參考序列的比對文件,確保同源性在95%以上。RNA全基因組病毒測序分析檢測