病毒宏基因組學(xué)的研究過(guò)程包括以下幾個(gè)步驟：樣品的處理、病毒宏基因組學(xué)文庫(kù)構(gòu)建和數(shù)據(jù)分析與處理。樣品的制備較關(guān)鍵的是樣品的處理、遺傳物質(zhì)的分離和富集。樣品的制備關(guān)鍵應(yīng)做到提取能夠表示該環(huán)境的高純度樣本，并除去非病毒核酸細(xì)胞和遺傳物質(zhì)的干擾。富集微生物及去除非目的性的細(xì)胞和遺傳物質(zhì)是分離高質(zhì)量的遺傳物質(zhì)的前提，提取高純度的表示特定環(huán)境中的遺傳物質(zhì)是宏基因組學(xué)研究過(guò)程中的難題。正切流過(guò)濾系統(tǒng)、差異過(guò)濾、梯度離心、空心纖維過(guò)濾、DNA酶和RNA酶處理、序列非依賴的單引物擴(kuò)增（Sequence-independentsingleprimeramplification，SISPA）等技術(shù)可用于樣品的制備，而SYBR金染色法可用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)處理樣品中病毒顆粒的數(shù)量。宏基因組測(cè)序以特定環(huán)境中的整個(gè)微生物群落作為研究的對(duì)象，不需對(duì)微生物進(jìn)行分離培養(yǎng).四川口腔微生物分析

病毒宏基因組學(xué)中包含兆級(jí)的短序列片段（Reads）。通過(guò)不同的序列拼接軟件將Reads拼接較長(zhǎng)的DNA序列片斷（Contigs）。數(shù)據(jù)組裝可通過(guò)K-mer分析評(píng)估各個(gè)樣品的測(cè)序深度，通過(guò)對(duì)SOAPdenovo設(shè)置不同K值，篩選較好組裝結(jié)果，對(duì)較好組裝結(jié)果進(jìn)行校正，并統(tǒng)計(jì)Reads利用率。接著利用已測(cè)序生物體的DNA序列構(gòu)建數(shù)據(jù)庫(kù)，將拼接后的Contigs通過(guò)不同的鑒定方案，與數(shù)據(jù)庫(kù)里的DNA序列信息進(jìn)行比對(duì)，確定該序列來(lái)自的生物群落，篩選有用的基因信息。此外，還可以用一些工具對(duì)序列進(jìn)行基因預(yù)測(cè)（如Metagene、GeneMark、FragGeneScan等）。鄭州宏基因組測(cè)序檢測(cè)微生物鑒定可以用微生物對(duì)噬菌體的敏感性零作為指標(biāo)來(lái)鑒定微生物的種屬。

狀病毒的發(fā)現(xiàn)，病原宏基因組測(cè)序功不可沒(méi)。對(duì)一種新病毒進(jìn)行鑒定和檢測(cè)，其中非常關(guān)鍵的步驟就是獲得病毒的全基因組信息。在此次病情監(jiān)測(cè)和防控中，病原宏基因組測(cè)序發(fā)揮了至關(guān)重要的作用，利用其技術(shù)優(yōu)勢(shì)，研究人員在五天內(nèi)就鑒定并分析出冠狀病毒的基因組，而2003年SARS的鑒定耗時(shí)5月余、2013年H7N9的鑒定耗時(shí)1月余。冠狀病毒2019-nCoV為線性單鏈RNA（ssRNA）病毒，基因組全長(zhǎng)包含29903個(gè)核苷酸，10個(gè)基因。病毒基因組序列為進(jìn)一步分析其傳染機(jī)理，傳播途徑，藥物靶點(diǎn)等提供了有利的支持。

病毒宏基因組學(xué)應(yīng)用：病毒宏基因組學(xué)已經(jīng)應(yīng)用到人類、動(dòng)物和環(huán)境中，涉及到農(nóng)業(yè)、工業(yè)及畜牧業(yè)等各個(gè)領(lǐng)域，其應(yīng)用范圍已延伸到海洋、湖水、熱泉、下水道等無(wú)機(jī)環(huán)境，以及組織病料、血液、呼吸道、動(dòng)物排泄物等有機(jī)環(huán)境。應(yīng)用病毒宏基因組學(xué)的方法研究佛羅里達(dá)綠海龜?shù)睦w維狀瘤組織中發(fā)現(xiàn)了單鏈DNA病毒（Seaturtletornovirus1，STTV1）。分析了來(lái)自馬里蘭淡水湖中的RNA病毒宏基因組，結(jié)果獲得淡水湖中30多個(gè)RNA病毒家族序列，其中包含小RNA病毒、小雙股病毒及正黏病毒等。高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)核酸進(jìn)行測(cè)序是非特異的,因此,對(duì)一無(wú)所知的核酸也可以實(shí)現(xiàn)鑒別。

宏基因組學(xué)或元基因組（metagenomics），其定義為“Thecollectivegenomesofsoilmicroflora”。該學(xué)科可追溯到第1次提出環(huán)境基因組學(xué)的概念，在對(duì)太平洋浮游生物進(jìn)行系統(tǒng)分類時(shí)構(gòu)建了第1個(gè)噬菌體文庫(kù)，并發(fā)現(xiàn)了15種全新的細(xì)菌序列。宏基因組學(xué)概念是“土壤中所有微生物基因組的總和”命名為土壤宏基因組，系統(tǒng)給出了宏基因組的概念，提出針對(duì)特定環(huán)境樣品中遺傳物質(zhì)總和進(jìn)行非培養(yǎng)研究。對(duì)宏基因組進(jìn)一步概括為“應(yīng)用現(xiàn)代的分子生物學(xué)技術(shù)直接從環(huán)境中獲取的目的微生物群落基因組，叫宏基因組”。未知病原微生物樣本需要經(jīng)歷：核酸純化-文庫(kù)構(gòu)建-以及生物信息學(xué)分析這三大基本流程才能完成鑒定。長(zhǎng)沙土壤微生物多樣性測(cè)序找哪家

高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)核酸進(jìn)行測(cè)序是非特異的，因此，對(duì)一無(wú)所知的核酸也可以實(shí)現(xiàn)鑒別。四川口腔微生物分析

宏基因組測(cè)序技術(shù)注意事項(xiàng)：傳統(tǒng)微生物檢測(cè)由于時(shí)間長(zhǎng)、陽(yáng)性率低、檢測(cè)目標(biāo)單一，限制了傳染疾病的診治。宏基因組測(cè)序技術(shù)不依賴于微生物的分離培養(yǎng)，克服了傳統(tǒng)的純培養(yǎng)方法的技術(shù)限制，為研究和開發(fā)利用占微生物種類99%以上的未可培養(yǎng)的微生物提供了一種新的途徑和良好的策略。宏基因組測(cè)序以無(wú)需純化培養(yǎng)、能夠快速全方面的展示序列信息的優(yōu)勢(shì)，逐步在臨床上得到了普遍應(yīng)用。病原宏基因組測(cè)序檢測(cè)出病原體并報(bào)告相應(yīng)被檢測(cè)出的序列數(shù)，再依據(jù)大數(shù)據(jù)庫(kù)判定是否為致病病原體。然而不同的測(cè)序平臺(tái)采用不同的數(shù)據(jù)庫(kù)，再由不同的研發(fā)、臨床和檢驗(yàn)**解讀，缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果也會(huì)出現(xiàn)差異。因此仍需將病原宏基因組測(cè)序檢測(cè)數(shù)據(jù)和臨床更好的結(jié)合，從而更準(zhǔn)確鑒定致病病原體。四川口腔微生物分析