目前對(duì)我國(guó)首例輸入性裂谷熱病例病毒進(jìn)行全基因組測(cè)定,分析其進(jìn)化來(lái)源及潛在變異.方法提取樣本核酸,非特異性反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增病毒基因組RNA,使用IonTorrent二代測(cè)序儀進(jìn)行病毒全基因組測(cè)定.對(duì)獲得的基因組數(shù)據(jù)進(jìn)行序列拼接、比對(duì)、進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建和關(guān)鍵位點(diǎn)分析.結(jié)果通過(guò)測(cè)定獲得了病毒全基因組11979nt,該測(cè)定病毒屬E基因分支,序列與先前南非分離株Kakamas相似度較高(＞98％).病毒Gn蛋白C端信號(hào)肽區(qū)存在1個(gè)氨基酸突變.結(jié)論本研究分析測(cè)定的裂谷熱病毒全基因組與目前非洲流行株高度相似,病毒基因特征未出現(xiàn)明顯變異。

想要通過(guò)高通量測(cè)序獲得病毒全序列，需要經(jīng)歷:核酸純化-文庫(kù)構(gòu)建-生物信息學(xué)分析這三大基本流程.RNA病毒二代測(cè)序進(jìn)化分析

哪些應(yīng)用場(chǎng)景需要對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序？在探普生物長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)行過(guò)程中，我們接觸到的對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序項(xiàng)目有比較豐富的應(yīng)用場(chǎng)景。先，從事基因進(jìn)化/疫苗/藥品/抗體研制方向的研究的研究者一定會(huì)用到測(cè)序。這種場(chǎng)景一般是用密集的sanger測(cè)序監(jiān)測(cè)某幾個(gè)關(guān)鍵基因，搭載一定頻率的全基因組測(cè)序。這樣的組合省時(shí)省力省經(jīng)費(fèi)，同時(shí)能達(dá)到研究目的。此外，有的單位需要對(duì)傳染病的病原進(jìn)行流行病學(xué)監(jiān)測(cè)和研究，如疾控/疫控中心、醫(yī)院的傳染病科室以及一些高校和研究所的相應(yīng)課題組，可能需要對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序以后，結(jié)合其他上下游的研究數(shù)據(jù)，達(dá)到研究或者監(jiān)測(cè)疫病的目的。

RNA病毒全序列技術(shù)高通量測(cè)序技術(shù)正式啟用之后,研究者可以將樣品處理至標(biāo)準(zhǔn)濃度和體積后進(jìn)行測(cè)序和分析.

一直以來(lái)，病毒基因組測(cè)序都是疾病診斷、流行病學(xué)調(diào)查和宿主-病原關(guān)系研究的重要手段。病毒的全基因組測(cè)序以及對(duì)應(yīng)的生物信息學(xué)分析方法是研究病毒進(jìn)化、毒力因子變異、疫病爆發(fā)之間的關(guān)系、疫病傳播途徑、不同遺傳變異的分布模式、疫病發(fā)生地理區(qū)域的基礎(chǔ)。與傳統(tǒng)Sanger測(cè)序相比，NGS技術(shù)的發(fā)展使得一個(gè)小的研究小組可以擁有大量病毒株的全基因組序列，測(cè)序成本也在逐步降低。由于NGS產(chǎn)生的數(shù)據(jù)量非常龐大，其序列拼接難度也隨之增加。而且對(duì)于低濃度高復(fù)雜度的樣本，研究者除了PCR外別無(wú)他法。而PCR方法往往具有偏好性，丟失的片段將為序列組裝帶來(lái)非常高的失敗率。對(duì)于完全未知的樣本，無(wú)法通過(guò)PCR進(jìn)行富集，要鑒定其種類(lèi)需要調(diào)用各種方法，逐個(gè)嘗試，工作量之大，其效率之低，使得一個(gè)新的研究方法的出現(xiàn)及其必要。

目前對(duì)我國(guó)首例輸入性裂谷熱病例病毒進(jìn)行全基因組測(cè)定,分析其進(jìn)化來(lái)源及潛在變異.方法提取樣本核酸,非特異性反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增病毒基因組RNA,使用IonTorrent二代測(cè)序儀進(jìn)行病毒全基因組測(cè)定.對(duì)獲得的基因組數(shù)據(jù)進(jìn)行序列拼接、比對(duì)、進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建和關(guān)鍵位點(diǎn)分析.結(jié)果通過(guò)測(cè)定獲得了病毒全基因組11979nt,該測(cè)定病毒屬E基因分支,序列與先前南非分離株Kakamas相似度較高(＞98％)。病毒Gn蛋白C端信號(hào)肽區(qū)存在1個(gè)氨基酸突變.結(jié)論本研究分析測(cè)定的裂谷熱病毒全基因組與目前非洲流行株高度相似,病毒基因特征未出現(xiàn)明顯變異。

二代測(cè)序單次運(yùn)行可以獲得海量的數(shù)據(jù)量，因此也稱(chēng)為高通量測(cè)序。

病毒是由一種核酸分子（DNA或RNA）與蛋白質(zhì)（Protein）構(gòu)成或只由蛋白質(zhì)構(gòu)成（如朊病毒）。根據(jù)遺傳物質(zhì)的組成，可分為單鏈DNA病毒（ssDNA）、雙鏈DNA病毒（dsDNA）、單鏈RNA病毒（ssRNA）、雙鏈RNA病毒（dsRNA）和蛋白質(zhì)病毒（如朊病毒）。根據(jù)宿主類(lèi)型的不同，可以分為噬菌體（細(xì)菌病毒）、植物病毒（煙花葉病毒）和動(dòng)物病毒（如禽流感病毒、天花病毒和HIV等）。病毒全基因組測(cè)序（VirusWholeGenomeSequencing，VWGS），是指基于第二代高通量測(cè)序技術(shù)，對(duì)病毒全基因組進(jìn)行測(cè)序，利用生物信息分析手段，得到病毒的全基因組序列，解析編碼信息，并獲得相應(yīng)的變異信息。探普生物的分析流程，可處理復(fù)雜背景下的目標(biāo)病毒序列。上海病毒基因測(cè)序診斷

探普生物專(zhuān)門(mén)針對(duì)病毒數(shù)據(jù)搭載了生物信息學(xué)分析流程。RNA病毒二代測(cè)序進(jìn)化分析

病毒基因組測(cè)序的標(biāo)準(zhǔn)有：測(cè)序的完成程度，決定著基因組的下游應(yīng)用，包括設(shè)計(jì)診斷產(chǎn)品、反向遺傳系統(tǒng)以及開(kāi)發(fā)調(diào)整對(duì)策等。研究團(tuán)隊(duì)希望能夠通過(guò)五條標(biāo)準(zhǔn)來(lái)填補(bǔ)這樣的空白，這些標(biāo)準(zhǔn)涵蓋了完成病毒基因組的整個(gè)階段，使用不依賴(lài)測(cè)序技術(shù)的簡(jiǎn)單條件規(guī)定了五個(gè)類(lèi)別。不同的測(cè)序技術(shù)可能會(huì)很快淘汰更新，因此我們這些標(biāo)準(zhǔn)沒(méi)有關(guān)聯(lián)任何特定的測(cè)序平臺(tái)，可以長(zhǎng)時(shí)間的使用下去。一種基于二代測(cè)序的pedv病毒基因組分析方法。目前現(xiàn)有的pedv分析方法兩方面的局限，第1，pedv病毒二代測(cè)序數(shù)據(jù)中存在部分甚至大量的宿主豬的基因組序列，宿主基因組的污染會(huì)影響pedv病毒基因組的拼接。第二，拼接預(yù)測(cè)病毒基因結(jié)構(gòu)的方法主要是genemarks等預(yù)測(cè)軟件，但由于pdev病毒基因組中基因相互重疊，其中基因內(nèi)部還存在ribosomalframeshift現(xiàn)象，現(xiàn)有的基因預(yù)測(cè)軟件并不能準(zhǔn)確識(shí)別出正確的基因結(jié)構(gòu)。

RNA病毒二代測(cè)序進(jìn)化分析