哪些應(yīng)用場景需要對病毒的全基因組進行測序？在探普生物長時間運行過程中，我們接觸到的對病毒的全基因組進行測序項目有比較豐富的應(yīng)用場景。先，從事基因進化/疫苗/藥品/抗體研制方向的研究的研究者一定會用到測序。這種場景一般是用密集的sanger測序監(jiān)測某幾個關(guān)鍵基因，搭載一定頻率的全基因組測序。這樣的組合省時省力省經(jīng)費，同時能達到研究目的。此外，有的單位需要對傳染病的病原進行流行病學(xué)監(jiān)測和研究，如疾控/疫控中心、醫(yī)院的傳染病科室以及一些高校和研究所的相應(yīng)課題組，可能需要對病毒的全基因組進行測序以后，結(jié)合其他上下游的研究數(shù)據(jù)，達到研究或者監(jiān)測疫病的目的。

二代測序單次運行可以獲得海量的數(shù)據(jù)量，因此也稱為高通量測序。重慶全基因組病毒測序方法

二代測序應(yīng)用的患者類型的推薦：共識明確指出了二代測序應(yīng)用的患者類型及使用的時機的意見:對于神經(jīng)系統(tǒng)急性傳染/血流傳染/呼吸道傳染患者，3天是二代測序使用的時機，在傳統(tǒng)方法(常規(guī)的生化檢查和培養(yǎng))3天未報陽性且經(jīng)驗性調(diào)整無效時，強烈推薦二代測序檢測；對疑似病毒傳染患者，包括：疑似神經(jīng)系統(tǒng)病毒傳染和病毒性肺炎且病情持續(xù)進展的患者，若完善傳統(tǒng)PCR檢測后依然未獲得明確的病原學(xué)證據(jù)時，強烈推薦二代測序檢測。對于疑似局灶性傳染患者完成常規(guī)的生物化學(xué)、培養(yǎng)或PCR檢測后，若未能獲取病原學(xué)診斷結(jié)果，推薦將二代測序作為檢測方法。而對于懷疑繼發(fā)性血流傳染患者：在原發(fā)傳染灶的病原學(xué)檢測為陰性或因各種因素?zé)o法送檢合適標本的情況下，可考慮將血標本的二代測序檢測作為二線檢測。國內(nèi)病毒序列測序檢測病毒全基因組測序產(chǎn)品特點：病原診斷更準確。

病毒全基因組測序注意事項：病毒全基因組測序，測序覆蓋度，基因組被測序得到的堿基覆蓋的比例；測序覆蓋度是反映測序隨機性的指標之一；測序序深度與覆蓋度之間的關(guān)系可以過Lander-WatermanModel（1988）來確定。當深度達到5X時，則可覆蓋基因組的約99.4%以上。通過生物信息手段，分析不同個體基因組間的結(jié)構(gòu)差異，同時完成SNP及基因組結(jié)構(gòu)注釋。DNA突變可誘發(fā)病癥。吸煙過程中所釋放的>60種致病化學(xué)物質(zhì)可與DNA結(jié)合并對DNA鏈上的鳥嘌呤和腺嘌呤進行化學(xué)修飾從而產(chǎn)生大的加合物，該加合物改變了DNA雙螺旋的結(jié)構(gòu)，如果不被核苷酸剪切修復(fù)或其他的途徑進行糾正，那么DNA在復(fù)制時就會按照non-Watson-Crick方式進行復(fù)制并阻止RNA聚合酶進行轉(zhuǎn)錄。

病毒基因組測序包括完成圖測序、掃描圖測序和重測序三個層面，通過二代/三代測序平臺，獲得病毒的基因組的序列信息，并在結(jié)構(gòu)基因組學(xué)、比較基因組學(xué)層面通過差異分析、同源基因分析、共線性分析、物種進化分析等手段探究病毒的毒力系統(tǒng)、基因組的進化與演變歷程等。對疑似傳染標本采集提取后直接進行高通量測序，通過病原微生物數(shù)據(jù)庫比對和智能化算法分析，獲得疑似致病微生物種屬信息，并提供全方面深入的報告，為疑難危重傳染提供快速準確診斷依據(jù)，促進藥物的合理應(yīng)用。

病毒的全基因組測序以及對應(yīng)的生物信息學(xué)分析方法是研究病毒進化、毒力因子變異、疫病爆發(fā)之間的關(guān)系。

能實現(xiàn)對病毒的全基因組進行測序的技術(shù)手段：早期在高通量測序技術(shù)普及之前，對病毒的全基因組進行測序是通過非特異性擴增+克隆結(jié)合sanger測序來完成的。當物種有了參考的序列之后，可以通過特異性擴增+sanger測序獲得全基因組序列。Sanger測序準確度高，讀長很長，但與此同時，擴增和克隆工作費時費力，由于流程繁瑣，加上快速變異導(dǎo)致引物無法通用，該方法對于大量基因組的測序工作而言，可操作性不強，這對于研究者一直是一個困擾。高通量測序技術(shù)正式啟用之后，研究者可以將樣品處理至標準濃度和體積后進行測序和分析，減少了工作量，增加了成功率。探普生物進行了大量有針對性的研發(fā)和測試，開發(fā)了全套的實驗和分析流程用于對病毒的全基因組進行測序，該流程自運行以來廣受研究者們好評。

病毒全基因組測序具有的特點:獨有的一定定量技術(shù),實現(xiàn)病原定量分析。國內(nèi)病毒測序分析

想要通過高通量測序獲得病毒全序列，需要經(jīng)歷：核酸純化-文庫構(gòu)建-生物信息學(xué)分析這三大基本流程.重慶全基因組病毒測序方法

需要對病毒的全基因組進行測序的應(yīng)用場景：在探普生物長時間運行過程中，我們接觸到的對病毒的全基因組進行測序項目有比較豐富的應(yīng)用場景。先，從事基因進化/疫苗/藥品/抗體研制方向的研究的研究者一定會用到測序。這種場景一般是用密集的sanger測序監(jiān)測某幾個關(guān)鍵基因，搭載一定頻率的全基因組測序。這樣的組合省時省力省經(jīng)費，同時能達到研究目的。此外，有的單位需要對傳染病的病原進行流行病學(xué)監(jiān)測和研究，如疾控/疫控中心、醫(yī)院的傳染病科室以及一些高校和研究所的相應(yīng)課題組，可能需要對病毒的全基因組進行測序以后，結(jié)合其他上下游的研究數(shù)據(jù)，達到研究或者監(jiān)測疫病的目的。

重慶全基因組病毒測序方法