全基因組測(cè)序要注意的事項(xiàng)：全基因組測(cè)序是對(duì)未知基因組序列的物種進(jìn)行個(gè)體的基因組測(cè)序。技術(shù)路線：提取基因組DNA，然后隨機(jī)打斷，電泳回收所需長(zhǎng)度的DNA的片段（0.2~5Kb），加上接頭,進(jìn)行DNA簇（Cluster）制備，后利用Paired-End（Solexa）或者M(jìn)ate-Pair（SOLiD）的方法對(duì)插入片段進(jìn)行測(cè)序。然后對(duì)測(cè)得的序列組裝成Contig，通過(guò)Paired-End的距離可進(jìn)一步組裝成Scaffold，進(jìn)而可組裝成染色體等。組裝效果與測(cè)序深度與覆蓋度、測(cè)序質(zhì)量等有關(guān)。常用的組裝有：SOAPdenovo、Trimity、Abyss等。測(cè)序深度（Sequencingdepth）是指測(cè)序得到的堿基總量（bp）與基因組大小的比值，它是評(píng)價(jià)測(cè)序量的指標(biāo)之一。測(cè)序深度與基因組覆蓋度之間是一個(gè)正相關(guān)的關(guān)系，測(cè)序帶來(lái)的錯(cuò)誤率或假陽(yáng)性結(jié)果會(huì)隨著測(cè)序深度的提升而下降。測(cè)序的個(gè)體，如果采用的是雙末端或Mate-Pair方案，當(dāng)測(cè)序深度在50X~100X以上時(shí)，基因組覆蓋度和測(cè)序錯(cuò)誤率控制均得以保證，后續(xù)序列組裝成染色體才能變得更容易與準(zhǔn)確。

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病毒全基因組測(cè)序注意事項(xiàng)：病毒全基因組測(cè)序，測(cè)序覆蓋度，基因組被測(cè)序得到的堿基覆蓋的比例；測(cè)序覆蓋度是反映測(cè)序隨機(jī)性的指標(biāo)之一；測(cè)序序深度與覆蓋度之間的關(guān)系可以過(guò)Lander-WatermanModel（1988）來(lái)確定。當(dāng)深度達(dá)到5X時(shí)，則可覆蓋基因組的約99.4%以上。通過(guò)生物信息手段，分析不同個(gè)體基因組間的結(jié)構(gòu)差異，同時(shí)完成SNP及基因組結(jié)構(gòu)注釋。DNA突變可誘發(fā)病癥。吸煙過(guò)程中所釋放的>60種致病化學(xué)物質(zhì)可與DNA結(jié)合并對(duì)DNA鏈上的鳥(niǎo)嘌呤和腺嘌呤進(jìn)行化學(xué)修飾從而產(chǎn)生大的加合物，該加合物改變了DNA雙螺旋的結(jié)構(gòu)，如果不被核苷酸剪切修復(fù)或其他的途徑進(jìn)行糾正，那么DNA在復(fù)制時(shí)就會(huì)按照non-Watson-Crick方式進(jìn)行復(fù)制并阻止RNA聚合酶進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。

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二代測(cè)序可以用于對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序有哪些挑戰(zhàn)？二代測(cè)序相較sanger測(cè)序，差異主要就是單次運(yùn)行可以獲得海量的數(shù)據(jù)量，因此也稱為高通量測(cè)序。想要通過(guò)高通量測(cè)序獲得病毒全序列，需要經(jīng)歷：核酸純化-文庫(kù)構(gòu)建-生物信息學(xué)分析這三大基本流程。而高通量測(cè)序技術(shù)本身并不是以病毒為目標(biāo)開(kāi)發(fā)的，因此每個(gè)環(huán)節(jié)都是挑戰(zhàn)。核酸純化步驟決定了Input核酸的起始濃度和總量，從而決定了文庫(kù)構(gòu)建的成敗、質(zhì)量和產(chǎn)量；文庫(kù)的好壞決定了數(shù)據(jù)的質(zhì)量和產(chǎn)出；而數(shù)據(jù)的質(zhì)量產(chǎn)出直接影響分析結(jié)果。樣品一般核酸濃度很低，且?guī)в写罅克拗魑廴?，因此?shí)驗(yàn)部分和分析部分都比較困難。探普生物基于這些困難點(diǎn)，進(jìn)行了大量有針對(duì)性的研發(fā)和測(cè)試，開(kāi)發(fā)了全套的實(shí)驗(yàn)和分析流程用于對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序，該流程自運(yùn)行以來(lái)廣受研究者們好評(píng)。

目前對(duì)我國(guó)首例輸入性裂谷熱病例病毒進(jìn)行全基因組測(cè)定,分析其進(jìn)化來(lái)源及潛在變異.方法提取樣本核酸,非特異性反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增病毒基因組RNA,使用IonTorrent二代測(cè)序儀進(jìn)行病毒全基因組測(cè)定.對(duì)獲得的基因組數(shù)據(jù)進(jìn)行序列拼接、比對(duì)、進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建和關(guān)鍵位點(diǎn)分析.結(jié)果通過(guò)測(cè)定獲得了病毒全基因組11979nt,該測(cè)定病毒屬E基因分支,序列與先前南非分離株Kakamas相似度較高(＞98％)。病毒Gn蛋白C端信號(hào)肽區(qū)存在1個(gè)氨基酸突變.結(jié)論本研究分析測(cè)定的裂谷熱病毒全基因組與目前非洲流行株高度相似,病毒基因特征未出現(xiàn)明顯變異。

病毒株往往都需要獲得盡量完整的基因組序列來(lái)指導(dǎo)下一步的研究。

深度測(cè)序技術(shù)對(duì)社會(huì)具有的影響：深度測(cè)序技術(shù)促進(jìn)了基因檢測(cè)的普及，對(duì)社會(huì)的影響第1個(gè)方面反映在商業(yè)模式的變化，即醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)和健康管理方面的平民化、個(gè)性化趨勢(shì)的形成。社會(huì)生活受到深度測(cè)序技術(shù)影響的第二個(gè)方面是基因測(cè)序的普遍應(yīng)用。例如，基因關(guān)聯(lián)將人與人通過(guò)遺傳學(xué)關(guān)聯(lián)起來(lái)，人們可以對(duì)基因進(jìn)行分析判定親緣關(guān)系，基因測(cè)定甚至可以幫助判定婚姻（包括遺傳病等方面的）匹配度。公安機(jī)關(guān)可以通過(guò)基因比對(duì)，鎖定犯罪嫌疑人、尋找丟散的兒童和親人。甚至有報(bào)道表明，測(cè)定20多個(gè)基因就可以將人臉重構(gòu)?；驒z測(cè)的應(yīng)用將隨著基因-表型的關(guān)聯(lián)得到更普遍的應(yīng)用，對(duì)社會(huì)生活的方方面面起到重要作用。

病毒全基因組測(cè)序產(chǎn)品特點(diǎn)：對(duì)采集臨床樣本直接檢測(cè)。安徽病毒全基因組二代測(cè)序技術(shù)

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新一代測(cè)序中基因從頭測(cè)序和重測(cè)序有什么區(qū)別？從頭測(cè)序的原理是生成互相分離的若干組帶放射性標(biāo)記的寡核苷酸，每組寡核苷酸都有固定的起點(diǎn)，但卻隨機(jī)終止于特定的一種或者多種殘基上。可以區(qū)分長(zhǎng)度只差一個(gè)核苷酸的不同DNA分子的條件下，對(duì)各組寡核苷酸進(jìn)行電泳分析，只要把幾組寡核苷酸加樣于測(cè)序凝膠中若干個(gè)相鄰的泳道上。全基因組重測(cè)序是對(duì)已知基因組序列的物種進(jìn)行不同個(gè)體的基因組測(cè)序，并在此基礎(chǔ)上對(duì)個(gè)體或群體進(jìn)行差異性分析。SBC將不同梯度插入片段的測(cè)序文庫(kù)結(jié)合短序列、雙末端進(jìn)行測(cè)序，幫助客戶在全基因組水平上掃描并檢測(cè)與重要性狀相關(guān)的基因序列差異和結(jié)構(gòu)變異，實(shí)現(xiàn)遺傳進(jìn)化分析及重要性狀候選基因預(yù)測(cè)。

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