傳統(tǒng)的血清學(xué)與分子生物學(xué)方法如ELISA與PCR,由于病原微生物的特異性差異,有時只能用于病原微生物特定種甚至特定種特定株系分離物的檢測;而電鏡與生物學(xué)接種鑒定方法又難以將病原微生物鑒定至物種水平。相比之下,高通量測序技術(shù)可以提供一條新的病原微生物鑒定途徑。病原微生物檢測的不可知性使得高通量測序成為研究這類病原微生物的有用工具。目前,該技術(shù)在人類與動植物病原微生物的鑒定中已經(jīng)有較多的應(yīng)用。高通量測序在臨床virology領(lǐng)域的應(yīng)用病毒作為一種古老的物種存在于自然界,幾乎能夠在任何物種寄生,與人類健康息息相關(guān)。雖然大部分病毒沒有出現(xiàn)明顯的臨床癥狀,少數(shù)病毒能夠引起人類多種疾病,表現(xiàn)出包括發(fā)熱、腹瀉、出血、出疹、呼吸道癥狀、神經(jīng)系統(tǒng)癥狀等。傳統(tǒng)病原微生物檢測方法:生化方法。隨機(jī)PCR未知病毒篩查服務(wù)
微生物鑒定方法:1.從觀察顯微鏡下甚至光鏡下的微生物的的那個細(xì)胞的形態(tài),比如說,是球菌,還是桿菌,還是弧菌,還是螺旋菌,這都是可以從微生物的單個細(xì)胞形態(tài)上區(qū)分的。還有就是細(xì)胞的形態(tài),比如說是否有鞭毛、芽孢之類的東西,都是微生物鑒別的特征性特征。2.就是觀察細(xì)菌的菌落形態(tài),因?yàn)榧?xì)菌生長繁殖到一定階段大多都是以菌群的形態(tài)存在的,不同的細(xì)菌菌落在不同的培養(yǎng)基上的生長情況不同,部分細(xì)菌對培養(yǎng)基要求較高,部分培養(yǎng)基能在特定的培養(yǎng)基上生存,通過微生物對不同類型培養(yǎng)基的適應(yīng)性,可以起到對菌種的有效區(qū)分。杭州病原鑒定檢測每種病毒都有相應(yīng)的病毒試劑和測定方法。
高通量測序應(yīng)用于臨床感鑒定高通量測序臨床應(yīng)用的劣勢有:1)測序成本,尤其是海量數(shù)據(jù)的計(jì)算機(jī)輔助分析速度及成本;2)人體標(biāo)本及標(biāo)本處理過程均不是無菌狀態(tài),難以區(qū)分健康攜帶和污染信號,尤其是條件病原體;3)難以確定高通量測序鎖定的可能病原體和目前疾病狀態(tài)的因果關(guān)系。隨著高通量測序成本的下降和云計(jì)算在線分析軟件的使用,高通量測序正在逐步進(jìn)入臨床應(yīng)用,而臨床指導(dǎo)下的高通量測序和高通量測序指導(dǎo)下的病原體致病性判斷是有效的臨床應(yīng)用路徑。
微生物鑒定的傳統(tǒng)的鑒定方法雖然仍被普遍使用,但存在兩大缺點(diǎn)。它們只適用于可以體外培養(yǎng)的生物體,而且一些菌株表現(xiàn)出不符合已知種屬模式的獨(dú)特的生化特性。許多現(xiàn)代方法并不依賴于活的培養(yǎng)物,它們常常能揭示通過傳統(tǒng)方法檢測不到的有機(jī)體之間的細(xì)微差別。PCR,包括實(shí)時熒光定量PCR,可能是普遍應(yīng)用于微生物鑒定的分子技術(shù)。利用PCR技術(shù),可以快速檢測和鑒定臨床標(biāo)本的微生物種類,從而加快診斷程序。大多數(shù)基于PCR的方法涉及一組通用的PCR引物,通過測序PCR擴(kuò)增的序列來鑒定細(xì)菌/樣品。16SrRNA基因是PCR細(xì)菌鑒定的金標(biāo)準(zhǔn)序列,而內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)區(qū)域是種類的主要條碼標(biāo)記。未知病毒是指未被證實(shí)的某種病毒。
微生物鑒定可以采用不同微生物對周圍環(huán)境的資源的利用度有所不同的特性來區(qū)別。比如說微生物能否以二氧化碳作為微生物自身生長的碳源以及對糖類等物質(zhì)的需求程度來區(qū)分。亦或者說對不同類型生長因子的需求也是重點(diǎn)。其實(shí)我們還可以通過控制微生物的生長環(huán)境來判斷微生物的種屬類型。比如說該微生物生長需氧,以及適合在什么溫度進(jìn)行生長繁殖,什么溫度微生物會轉(zhuǎn)入芽孢形態(tài)進(jìn)行休眠,根據(jù)這些表現(xiàn)的不同,都可進(jìn)行微生物的的鑒別。傳統(tǒng)的微生物檢測方法:直接顯微鏡觀察。杭州病原鑒定檢測
高通量測序技術(shù)對核酸進(jìn)行測序是非特異的。隨機(jī)PCR未知病毒篩查服務(wù)
除了利用病毒的致病性定量檢測病毒外,還可應(yīng)用物理方法,如在電子顯微鏡下計(jì)數(shù)病毒顆粒,或用紫外分光光度計(jì)測定提純病毒的蛋白和核酸量,這些方法所測得的數(shù)據(jù)包括了的病毒粒。植物病毒的培養(yǎng)和檢測大都是在整株植物上進(jìn)行的醫(yī)學(xué)教育|網(wǎng)搜集整理。從搗碎的病葉汁中制備病毒,常用枯斑法檢測。用手指蘸上混有金剛砂的稀釋病毒在植物葉片上軒輕摩擦,經(jīng)一定時間后出現(xiàn)單個分開的圓形壞死或退綠斑點(diǎn),稱為枯斑。病原微生物檢測方法-高通量測序技術(shù)。隨著技術(shù)飛速發(fā)展高通量測序技術(shù),又稱為新一代測序技術(shù),相對應(yīng)于以Sanger測序法為一代測序技術(shù)而得名。隨機(jī)PCR未知病毒篩查服務(wù)
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