LncRNA-HMG如何促進(jìn)p53泛素化?
LncRNA-HMG協(xié)助MDM2增加p53的泛素化
為了研究LncRNA-HMG如何調(diào)節(jié)p53的穩(wěn)定性。RIP實(shí)驗(yàn)證實(shí)p53與LncRNA-HMG互作(圖2a)。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(UPS)對(duì)于調(diào)節(jié)p53的穩(wěn)定性至關(guān)重要。因此,利用蛋白酶體抑制劑MG132分析LncRNA-HMG調(diào)控p53穩(wěn)定是否依賴于UPS。發(fā)現(xiàn)MG132處理能逆轉(zhuǎn)LncRNA-HMG缺失誘導(dǎo)的p53升高(圖2b),表明LncRNA-HMG以蛋白酶體依賴的方式調(diào)節(jié)p53蛋白水平。此外,Co-IP分析顯示在LncRNA-HMG缺失的細(xì)胞中,p53的泛素化水平降低(圖2c),而LncRNA-HMG過(guò)表達(dá)可促進(jìn)p53的泛素化(圖2d)。表明LncRNA-HMG促進(jìn)p53泛素化,導(dǎo)致p53降解。
另外,LncRNA-HMG對(duì)MDM2水平?jīng)]有影響(圖2h)。LncRNA-HMG的缺失減少p53和MDM2之間的相互作用(圖2i),LncRNA-HMG過(guò)表達(dá)則增加MDM2介導(dǎo)的p53泛素化(圖2j)。此外,MDM2拮抗劑Nutlin-3消除了LncRNA-HMG對(duì)p53蛋白水平的影響(圖2k)。表明LncRNA-HMG促進(jìn)MDM2與p53的相互作用,增強(qiáng)p53的泛素化。
后續(xù)的功能回復(fù)實(shí)驗(yàn)顯示,LncRNA-HMG依賴于p53調(diào)節(jié)ROS狀態(tài)(圖2l-m)。
圖2 LncRNA-HMG協(xié)助MDM2增加p53的泛素化(Ref. Fig 5/S4)