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核酸內(nèi)切酶VIII(EndonucleaseVIII)是一種來(lái)自大腸桿菌的DNA損傷修復(fù)酶,具有以下特點(diǎn):1.**雙功能活性**:核酸內(nèi)切酶VIII具有N-糖基化酶(N-glycosylase)活性和AP裂解酶(AP-lyase)活性。2.**釋放受損嘧啶堿基**:N-糖基化酶活性可以釋放雙鏈DNA上受損的嘧啶堿基,如胸腺嘧啶乙二醇和尿嘧啶乙二醇,生成一個(gè)脫嘌呤(apurinic,AP)位點(diǎn)。3.**切割A(yù)P位點(diǎn)**:AP裂解酶活性可以切割A(yù)P位點(diǎn)的3'和5'端,產(chǎn)生一個(gè)具有3'和5'磷酸的堿基缺口(Gap)。4.**識(shí)別并切除受損堿基**:核酸內(nèi)切酶VIII可以識(shí)別并切除多種受損堿基,包括尿素、5,6-二羥基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇、5-羥基-5-甲內(nèi)酰脲、尿嘧啶乙二醇、6-羥基-5,6-二氫胸腺嘧啶和甲基羥丙二酰脲。5.**與EndonucleaseIII的區(qū)別**:雖然核酸內(nèi)切酶VIII與核酸內(nèi)切酶III相似,但核酸內(nèi)切酶VIII具有β和δ裂解酶活性,而核酸內(nèi)切酶III具有β裂解酶活性。6.**應(yīng)用領(lǐng)域**:核酸內(nèi)切酶VIII可以應(yīng)用于單細(xì)胞凝膠電泳、NGS建庫(kù)中DNA損傷修復(fù)、酶法合成DNA中釋放DNA鏈、堿洗脫,搭配尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)進(jìn)行含U片段的克隆等。
磁珠法在基因克隆中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:1.**質(zhì)粒DNA的提取**:磁珠法可以用于從細(xì)菌細(xì)胞中提取質(zhì)粒DNA,這對(duì)于質(zhì)粒的克隆和表達(dá)至關(guān)重要。通過(guò)磁珠法提取的質(zhì)粒DNA純度高,適合用于后續(xù)的酶切、連接、轉(zhuǎn)化等分子克隆步驟。2.**基因組DNA的提取**:磁珠法可以用于從各種生物樣本中提取基因組DNA,這對(duì)于基因組的克隆和分析非常重要。提取的基因組DNA可以用于PCR擴(kuò)增、基因表達(dá)分析、基因突變檢測(cè)等。3.**mRNA的提取和純化**:在mRNA克隆中,磁珠法可以用于提取和純化mRNA,這對(duì)于cDNA的合成和基因表達(dá)分析非常關(guān)鍵。磁珠法提取的mRNA純度高,可以用于后續(xù)的cDNA合成和RT-PCR等實(shí)驗(yàn)。4.**PCR產(chǎn)物的純化**:磁珠法可以用于純化PCR產(chǎn)物,去除反應(yīng)中的酶、dNTPs和其他雜質(zhì),為克隆PCR產(chǎn)物提供高純度的DNA模板。5.**DNA片段的篩選和回收**:在基因克隆過(guò)程中,可能需要從多個(gè)DNA片段中篩選出特定大小或序列的片段。磁珠法可以用于DNA片段的篩選和回收,提高克隆效率。6.**自動(dòng)化和高通量操作**:磁珠法易于與自動(dòng)化設(shè)備結(jié)合,適合高通量樣本處理,這對(duì)于大規(guī)?;蚩寺№?xiàng)目尤為重要。自動(dòng)化操作減少了人為操作誤差,提高了實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和可靠性。Recombinant Cynomolgus CD69/CLEC2C Protein,His TagProbe qPCR Mix (2×) 支持多重qPCR,即在單個(gè)反應(yīng)中同時(shí)檢測(cè)多個(gè)靶標(biāo)基因 。
磁珠法病毒RNA/DNA抽提試劑盒是一種高效、便捷的工具,適用于從各種生物樣本中提取病毒核酸。以下是一些相關(guān)產(chǎn)品的信息和特點(diǎn):1.**德諾優(yōu)品病毒DNA/RNA提取試劑盒**:-采用自主磁珠純化技術(shù),適合從血漿、血清等樣本中分離純化病毒的DNA或RNA。-操作簡(jiǎn)單,整個(gè)過(guò)程可在12-25分鐘內(nèi)完成,提取的核酸可直接用于下游應(yīng)用,如PCR和NGS等。-提取的核酸純度高,質(zhì)量穩(wěn)定可靠,適合低拷貝數(shù)的病毒檢測(cè)。2.**MolPure®磁珠法病毒DNA/RNA提取試劑盒**:-適用于從全血、血清、腦脊液等樣本中提取病毒核酸。-無(wú)需使用有毒的酚氯仿,安全快捷,提取過(guò)程可在40分鐘內(nèi)完成。-提取的產(chǎn)物可直接用于PCR、qPCR等實(shí)驗(yàn)。3.**FineMag快速磁珠法病毒DNA/RNA提取試劑盒**:-適合從全血、唾液、拭子等樣本中純化高質(zhì)量病毒核酸,提取過(guò)程只需13分鐘。-無(wú)需使用有毒的化學(xué)試劑,操作安全便捷。4.**MagMAX病毒RNA/DNA提取試劑盒**:-適用于從全血、血清、口腔液等樣本中提取病毒核酸。-該試劑盒支持高通量提取,適合自動(dòng)化操作,提取效率高,適合直接用于PCR和RT-PCR。
在PCR實(shí)驗(yàn)中,防止非特異性擴(kuò)增的關(guān)鍵在于優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件和采取一些特定的策略。以下是一些有效的方法:1.**優(yōu)化引物設(shè)計(jì)**:引物設(shè)計(jì)是PCR成功的關(guān)鍵。應(yīng)確保引物序列具有高度特異性,避免與非目標(biāo)序列互補(bǔ)。使用在線工具進(jìn)行引物設(shè)計(jì),并進(jìn)行BLAST搜索以確認(rèn)特異性。2.**使用熱啟動(dòng)PCR**:熱啟動(dòng)PCR技術(shù)可以抑制室溫下的DNA聚合酶活性,減少非特異性擴(kuò)增。這種方法通過(guò)在高溫下激起酶的活性,從而在PCR體系配制階段降低引物與模板或引物與引物之間的非特異性結(jié)合。3.**調(diào)整Mg2+濃度**:Mg2+濃度對(duì)PCR擴(kuò)增的特異性和產(chǎn)量有重要影響。過(guò)高的Mg2+濃度可能導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增,因此需要優(yōu)化Mg2+濃度以獲得比較好的結(jié)果。4.**退火溫度優(yōu)化**:退火溫度對(duì)PCR特異性至關(guān)重要。較高的退火溫度有助于減少非特異性結(jié)合,但過(guò)高的退火溫度可能會(huì)降低引物與模板的結(jié)合效率。通常,退火溫度設(shè)置比引物的Tm值低5°C左右。5.**使用降落PCR**:降落PCR(TouchdownPCR)通過(guò)在初始循環(huán)中使用較高的退火溫度,然后逐漸降低退火溫度,從而在PCR開始時(shí)減少非特異性擴(kuò)增,同時(shí)在后續(xù)循環(huán)中保持特異性擴(kuò)增。去泛素化酶可以去除泛素化標(biāo)記,這一步驟是泛素化過(guò)程的逆轉(zhuǎn)過(guò)程,它允許細(xì)胞對(duì)泛素化事件進(jìn)行精細(xì)調(diào)控。
Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL) 是一種從嗜熱脂肪芽孢桿菌(Thermophilic Geobacillus sp)DNA聚合酶I衍生的酶,缺乏5'-3'外切核酸酶活性。以下是關(guān)于Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)的一些關(guān)鍵信息:來(lái)源和特性:Bst Plus DNA Polymerase 具有更強(qiáng)的5'-3' DNA聚合酶活性、鏈置換活性和dUTP耐受性,適合用于抗污染的等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng),如LAMP和CPA等。應(yīng)用:主要應(yīng)用于等溫DNA擴(kuò)增,包括環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)和其他等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)。規(guī)格:活性定義:1 U指的是在65°C下30分鐘內(nèi)將10 nmol的dNTP整合到酸不溶物質(zhì)中的酶的量。溶液成分:包含10 mmol/L Tris-HCl、50 mmol/L KCl、0.1 mmol/L EDTA、1 mmol/L DTT、0.1% Triton X-100、50% 甘油,pH 7.5 @ 25℃。產(chǎn)品形式:提供的產(chǎn)品包括Hieff® Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL),貨號(hào)14402ES,以及凍干粉形式的產(chǎn)品,貨號(hào)14405ES,不含甘油。靈敏度和穩(wěn)定性:Bst Plus DNA Polymerase 具有高靈敏度,低至5copies目的基因可測(cè),且在飛克(fg)級(jí)別的模板量下也能快速達(dá)到閾值。在37°C下,該酶可以保持相對(duì)穩(wěn)定的效應(yīng)長(zhǎng)達(dá)5天,并且在-20℃下可以穩(wěn)定保存2年。儲(chǔ)存條件:建議在-25℃至-15℃下儲(chǔ)存,以保持產(chǎn)品活性,并避免反復(fù)凍融。Ultra-Long Master Mix 是一種用于長(zhǎng)片段PCR擴(kuò)增的預(yù)混液,它含有經(jīng)過(guò)特殊修飾的熱穩(wěn)定Taq DNA聚合酶。Recombinant Human Nectin-2/CD112 Protein
泛素激起酶E1(Ubiquitin-activating enzyme E1)在ATP的存在下激發(fā)泛素分子,形成E1-泛素硫酯中間體。Recombinant Human S100B
Lambda核酸外切酶(LambdaExonuclease,簡(jiǎn)稱λExonuclease)是一種具有特定特性和應(yīng)用的酶,以下是其主要特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**特異性作用**:λExonuclease是一種5'→3'核酸外切酶,能選擇性地沿5'→3'方向消化5'端磷酸化的雙鏈DNA。2.**酶切活性**:對(duì)單鏈DNA和5'端未磷酸化修飾的DNA的酶切活性較低,不能從DNA的切刻或缺口處起始消化。3.**嗜磷酸性**:該酶具有非常強(qiáng)的嗜磷酸性,磷酸化的核酸鏈與非磷酸化的核酸鏈的切割效率相差達(dá)200倍以上。4.**切割效率**:Lambda核酸外切酶是一種具有高度持續(xù)性的堿性核酸外切酶,可以連續(xù)地將核酸切割成為單個(gè)堿基,切割比較高速率可以達(dá)到1000nt/S。5.**應(yīng)用領(lǐng)域**:-生成單鏈PCR產(chǎn)物用于DNA測(cè)序。-DNA單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)分析。-滾環(huán)擴(kuò)增。-從雙鏈DNA片段生成單鏈DNA。-PCR產(chǎn)物的克隆。-質(zhì)粒制備凈化。6.**酶活性定義**:Oneunitisdefinedastheamountofenzymerequiredtoproduce10nmolofacid-solubledeoxyribonucleotidefromdouble-strandedsubstrateinatotalreactionvolumeof50μlin30minutesat37oCin1XLambdaExonucleaseReactionBufferwith1μgsonicatedduplex[3H]-DNA。Recombinant Human S100B