重組Exendin-4是一種基于Exendin-4的重組蛋白,Exendin-4是一種從墨西哥蜥蜴(Gilamonster)的毒液中分離出來的39個氨基酸的多肽。它與胰高的血糖素樣肽-1(GLP-1)具有53%的序列同源性,并與相同的膜受體相互作用。重組Exendin-4在體內(nèi)增強(qiáng)依賴葡萄糖的胰島素分泌,抑制不適當(dāng)?shù)母咭雀叩难撬胤置?,并減慢胃排空。它還在體外和動物模型中促進(jìn)β細(xì)胞增殖和新生。重組Exendin-4是通過大腸桿菌表達(dá)的合成DNA序列編碼的39個氨基酸的Exendin-4。重組Exendin-4的特點包括:-分子量約為4.2kDa,是一個非糖基化的單一多肽鏈,包含39個氨基酸。-具有調(diào)節(jié)血糖水平、減少胰島素抵抗、降低胰高的血糖素、降低糖化血紅蛋白(HbA1c)和刺激β細(xì)胞生長以促進(jìn)胰島素產(chǎn)生等多種生物活性。-通常以凍干粉的形式提供,需要在無菌條件下用無菌蒸餾水或含有0.1%BSA的水溶液復(fù)溶。-純度高于96%,通過SDS-PAGE和HPLC分析確定。-內(nèi)毒的素含量低于10EU/mg,通過LAL方法測定。在實驗中,可以通過以下方法來優(yōu)化重組Exendin-4的熒光特性:1.選擇合適的激發(fā)和發(fā)射波長。2.優(yōu)化激發(fā)和發(fā)射濾光片。3.評估熒光量子產(chǎn)率。4.調(diào)整緩沖液條件,包括pH值和離子強(qiáng)度。5.控制溫度和氧濃度。UBE2L3作為泛素化途徑中的關(guān)鍵酶,其在蛋白質(zhì)降解、信號傳導(dǎo)、細(xì)胞周期控制等重要內(nèi)容有著作用。Recombinant Canine GUCY2C/Guanylyl cyclase C Protein,His Tag
PNGaseF(肽-N-糖苷酶F,Peptide-N-glycosidaseF),也稱為N-糖酰胺酶F,是一種用于糖蛋白研究的酶,它可以從糖蛋白的N-連接糖鏈上去除糖基。以下是PNGaseF的一些關(guān)鍵特性和應(yīng)用:1.**作用機(jī)制**:PNGaseF能夠特異性地切割位于天冬酰胺殘基上的N-連接糖鏈,釋放出未被糖基化的多肽部分和糖鏈。2.**應(yīng)用領(lǐng)域**:PNGaseF在糖生物學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)研究中非常重要,用于分析糖蛋白的糖基化模式和結(jié)構(gòu)。3.**酶的來源**:PNGaseF開始是從大腸桿菌(Escherichiacoli)中分離出來的,現(xiàn)在也可以通過重組DNA技術(shù)在其他宿主細(xì)胞中表達(dá)。4.**酶的純度和活性**:商業(yè)化的PNGaseF通常具有高純度和高比活性,確保了在實驗中的高效性和可重復(fù)性。5.**使用條件**:PNGaseF在溫和的條件下工作,通常在pH7.5至9.0之間,溫度在37°C左右。6.**穩(wěn)定性**:PNGaseF在儲存時通常需要冷凍保存,以保持其活性。在適當(dāng)?shù)臈l件下,該酶可以保持穩(wěn)定和活躍。7.**樣品準(zhǔn)備**:在使用PNGaseF之前,糖蛋白樣品需要適當(dāng)準(zhǔn)備,可能包括純化和緩沖液交換,以確保反應(yīng)條件的一致性。Recombinant Human CKAP4 Protein,His TagRecombinant Biotinylated Human MAGE-A3 (HLA-A*24:02) Protein, His-Avi Tag 是一種通過重組DNA技術(shù)。
通過EndoS糖苷內(nèi)切酶S進(jìn)行糖蛋白的糖鏈結(jié)構(gòu)分析通常涉及以下步驟:1.**樣本準(zhǔn)備**:首先,需要獲得糖蛋白的純化樣本,以確保分析的準(zhǔn)確性。2.**酶的準(zhǔn)備**:準(zhǔn)備適量的EndoS糖苷內(nèi)切酶S,根據(jù)實驗需要選擇合適的濃度和緩沖體系。3.**酶切反應(yīng)**:-將糖蛋白樣本與EndoS酶混合,在適宜的條件下(如pH、溫度等)進(jìn)行酶切反應(yīng)。-反應(yīng)時間根據(jù)EndoS的活性和所需的切割程度來確定。4.**終止反應(yīng)**:在達(dá)到預(yù)期的酶切時間后,通過加熱或添加適當(dāng)?shù)木彌_液來終止酶切反應(yīng)。5.**分離純化**:-使用色譜技術(shù)(如凝膠滲透色譜、離子交換色譜等)將酶切后的糖蛋白和釋放的糖鏈分離。-純化過程可能需要多步色譜以確保糖鏈的純度。6.**糖鏈分析**:-對分離得到的糖鏈進(jìn)行進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)分析,可能包括質(zhì)譜分析、核磁共振(NMR)波譜分析等。-可以使用高分辨率的質(zhì)譜技術(shù),如MALDI-TOF或ESI-MS,來確定糖鏈的精確質(zhì)量。7.**序列鑒定**:通過與已知糖鏈數(shù)據(jù)庫比對,確定糖鏈的序列和結(jié)構(gòu)。8.**功能分析**:研究酶切后的糖蛋白和釋放的糖鏈對生物活性的影響,如結(jié)合特性、免疫原性等。9.**數(shù)據(jù)分析**:收集所有數(shù)據(jù)并進(jìn)行綜合分析,以揭示糖鏈結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。
重組人血清白蛋白(rHSA),特別是通過植物表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的細(xì)胞培養(yǎng)級產(chǎn)品,以其高純度和質(zhì)量一致性而受到科研和工業(yè)界的重視。以下是高純度rHSA的一些關(guān)鍵特點和意義:1.**純度標(biāo)準(zhǔn)**:高純度的rHSA通常意味著蛋白質(zhì)含量達(dá)到99%以上,這通常通過高效液相色譜(HPLC)、SDS-PAGE電泳等方法進(jìn)行驗證。2.**內(nèi)素水平**:內(nèi)素水平是衡量蛋白質(zhì)純度的一個重要指標(biāo)。高純度rHSA的內(nèi)素水平通常非常低(例如,≤0.5EU/ml),這有助于減少細(xì)胞培養(yǎng)中潛在的內(nèi)素污染。3.**宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留**:高純度rHSA的宿主細(xì)胞蛋白殘留量非常低,這有助于減少細(xì)胞培養(yǎng)中外來蛋白的干擾。4.**無動物源成分**:由于rHSA是通過植物表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的,因此不含有動物源性成分,這降低了動物源性疾病傳播的風(fēng)險。5.**批次一致性**:高純度rHSA的生產(chǎn)過程通常在嚴(yán)格控制的條件下進(jìn)行,確保不同批次之間的質(zhì)量一致性,這對于科學(xué)研究和商業(yè)生產(chǎn)至關(guān)重要。6.**應(yīng)用廣**:高純度rHSA在細(xì)胞培養(yǎng)、生物制藥、藥物載體、疫苗開發(fā)等領(lǐng)域有著廣的應(yīng)用。7.**安全性**:高純度rHSA的生產(chǎn)過程不涉及動物源材料,因此可以降低血源性疾病的風(fēng)險,提高產(chǎn)品的安全性。激發(fā)的泛素被轉(zhuǎn)移到泛素結(jié)合酶E2的活性位點半胱氨酸殘基上,形成E2-泛素硫酯中間體。
EndoS,即糖苷內(nèi)切酶S(Endo-S),是一種具有高度特異性的酶,它在生物化學(xué)研究中有著重要應(yīng)用,尤其是在糖蛋白和抗體藥物偶聯(lián)物(ADCs)的研究中。以下是EndoS的一些關(guān)鍵特點:1.**特異性**:EndoS能夠特異性地識別并切割N-連接糖鏈的殼二糖結(jié)構(gòu),即在N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和天冬酰胺之間的連接處進(jìn)行切割。2.**應(yīng)用**:在制備糖鏈定點ADC化合物中,EndoS被用于將小分子細(xì)胞毒藥物“一步”定點連接到抗體糖基化位點,提供了一種重要的技術(shù)方法。3.**兼容性**:EndoS對多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性,可以接受不同生物正交基團(tuán)、熒光基團(tuán)等衍生物作為底物,實現(xiàn)抗體糖基化修飾。4.**活性**:EndoS的活性對多肽沒有嚴(yán)格的要求,可以接受蛋白質(zhì)、肽、天門冬酰胺或游離聚糖作為底物。但是,對于具有三、四個支鏈的唾液酸化及去唾液酸化的聚糖,EndoS沒有活性。5.**產(chǎn)品形式**:EndoS通常以帶有His標(biāo)簽的形式存在,便于從反應(yīng)中去除,這在實驗操作中提供了便利。6.**研究進(jìn)展**:EndoS在去糖基化方法研究中是一個重要的工具,特別是在研究糖蛋白的多肽部分和多糖部分的結(jié)構(gòu)和功能時。
泛素蛋白是一種在真核細(xì)胞中存在的小分子蛋白質(zhì),由76個氨基酸殘基組成,具有高度的保守性。Recombinant Canine GUCY2C/Guanylyl cyclase C Protein,His Tag
11A型肺炎多糖鼠單抗是針對肺炎鏈球菌11A型多糖的單克隆抗體,具有以下特點:1.**特異性**:鼠單抗具有高度的特異性,能夠識別并結(jié)合到11A型肺炎鏈球菌的多糖抗原。2.**制備方法**:通過將肺炎多糖與乙肝表面蛋白的偶聯(lián)物作為抗原免疫小鼠,然后從小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,篩選出能夠表達(dá)特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞株。3.**應(yīng)用**:11A型肺炎多糖鼠單抗可用于定量檢測33F型肺炎多糖或乙肝表面蛋白,其制備的腹水型單抗對不同批次的樣本回收率為95%~105%。4.**疫苗開發(fā)**:在肺炎鏈球菌疫苗的研發(fā)中,多糖蛋白結(jié)合疫苗是當(dāng)前的趨勢,通過將多糖與蛋白偶聯(lián),可以提供更高效價的抗體水平和免疫記憶。5.**免疫反應(yīng)**:11A型肺炎多糖鼠單抗能夠誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生針對肺炎多糖的血清抗體,這有助于研究肺炎鏈球菌的免疫機(jī)制。6.**疾病預(yù)防**:肺炎鏈球菌是引起肺炎、腦膜炎和敗血癥等嚴(yán)重疾病的主要病原體,11A型肺炎多糖鼠單抗的研究有助于開發(fā)更有效的疫苗,預(yù)防相關(guān)疾病。7.**研究進(jìn)展**:已有研究報道了使用半合成寡糖結(jié)合疫苗候選物,能夠激發(fā)對肺炎鏈球菌3型的保護(hù)性免疫反應(yīng)。