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胰酶細(xì)胞消化液(Trypsin-EDTASolution)含0.25%胰酶(Trypsin)、0.02%EDTA和酚紅,不含Ca2+和Mg2+。該消化液已用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些組織的消化。本胰酶細(xì)胞消化液具有方便快速的特點(diǎn),通常室溫消化1分鐘左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞。使用說(shuō)明:貼壁細(xì)胞的消化:1、吸去培養(yǎng)液,用無(wú)菌的PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。2、加入少量胰酶細(xì)胞消化液(含酚紅),略蓋過(guò)細(xì)胞即可,室溫放置30秒至2分鐘。不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。3、顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化,或者用***吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái);此時(shí)吸除胰酶細(xì)胞消化液;加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。4、如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰酶細(xì)胞消化液重新消化。5、如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000-2000g離心1分鐘,沉淀細(xì)胞,盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后,加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差。北京進(jìn)口胰酶市場(chǎng)報(bào)價(jià)
6.磷酸酶EDTA相對(duì)不溶??梢杂么帕嚢杵鲾嚢?,或?qū)⑵渲糜?度的冰箱中,溶解后過(guò)濾并**。7.可配備2-3倍血漿酶,節(jié)省時(shí)間和過(guò)濾器。使用時(shí),請(qǐng)對(duì)PBS消毒。8.將儲(chǔ)存溶液儲(chǔ)存在-20°C的冰箱中,然后將溶液儲(chǔ)存在4°C。使用時(shí),請(qǐng)勿將其放在27°C的水浴中,因?yàn)檫@會(huì)使自由基酶迅速無(wú)法使用。使用前放置一次。是的,因?yàn)樘砑拥臄?shù)量很少,因此通常不會(huì)凍結(jié)細(xì)胞。9.在消化過(guò)程中,向培養(yǎng)瓶中加入適量的胰酶。個(gè)人經(jīng)驗(yàn),一般在10cm培養(yǎng)皿中加。加入后,立即搖動(dòng)培養(yǎng)皿蓋住胰酶。一旦充滿,用負(fù)壓吸引多余的胰酶排出,將其加入37度培養(yǎng)箱中進(jìn)行消化。10.請(qǐng)注意,過(guò)量的胰酶對(duì)細(xì)胞有害,而過(guò)量的EDTA也會(huì)影響粘附,因此無(wú)需將細(xì)胞浸入血漿酶中進(jìn)行消化。11.磷酸酶37具有**佳的消化作用,并具有在37度以下消化的能力。在消化過(guò)程中,甚至不需要將一些易于消化的細(xì)胞放入培養(yǎng)箱中。請(qǐng)注意,它不能消化太長(zhǎng)時(shí)間。四、實(shí)驗(yàn)所需試劑清單:序列產(chǎn)品名貨號(hào)CAS備注11000ul藍(lán)吸頭FT-10002氫氧化鈉JT86501310-73-23PBSHC14884EDTABSH-59-55螯合樹(shù)脂chelex100SS6072以上為EDTA-胰蛋白酶的配制,實(shí)驗(yàn)請(qǐng)選用高質(zhì)量試劑。新疆國(guó)產(chǎn)胰酶聯(lián)系方式如果消化液中含有胰酶和EDTA,好去除。
使**或細(xì)胞片分散成單個(gè)細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液用于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。影響消化速度的因素較多,主要有胰酶溶液的活性(配制條件、凍存或4℃保存時(shí)間長(zhǎng)短、是否反復(fù)凍融、化凍后存放時(shí)間及溫度等)、消化時(shí)的溫度(氣溫、細(xì)胞培養(yǎng)瓶及胰酶溶液的溫度)以及所加胰酶溶液的多少等。加入胰蛋白酶-EDTA溶液,視細(xì)胞瓶的大小加入體積為2ml或更多(依培養(yǎng)器皿的大小而定),以使充分浸潤(rùn);一般消化時(shí)間約為1至3分鐘,肉眼觀察瓶底由半透明(細(xì)胞單層連接成片)轉(zhuǎn)為透明、點(diǎn)狀(出現(xiàn)細(xì)小空隙)時(shí),棄去細(xì)胞消化液,或看見(jiàn)培養(yǎng)瓶壁呈白茫狀即可。并加入適量的完全培養(yǎng)液終止消化,吹打分散;如見(jiàn)大量細(xì)胞片狀脫落,已消化過(guò)頭,則不能頃倒消化液而直接進(jìn)行下一步操作。(消化過(guò)頭,可造成大量細(xì)胞從瓶壁上脫下,甚至造成細(xì)胞破碎。由于血清含有非特異性胰蛋白酶抑制劑,所以加入完全培養(yǎng)基可以終止反應(yīng)。胰酶配置方法:1、培養(yǎng)液配制,方便好用,對(duì)細(xì)胞影響小,并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解2、生理鹽水配制,要先調(diào)ph值(①胰酶(1:250)克②EDTA-Na③NaCl④KCl⑤Glucose⑥PhenolRed⑦Water1000mL磁力攪拌2-3小時(shí),調(diào)pH,過(guò)濾**。)3、pbs(:稱取胰酶粉末。
在組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)中的組織細(xì)胞分散(將組織塊制備成單個(gè)細(xì)胞懸液)以及傳代細(xì)胞培養(yǎng)中,貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞的消化分散均要使用組織細(xì)胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶(Trypsin),EDTA等。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶,它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切段,水解細(xì)胞間的蛋白質(zhì),破壞細(xì)胞間的連接,從而使組織或貼壁細(xì)胞離散成單個(gè)細(xì)胞。胰酶分散細(xì)胞的活性與組織或細(xì)胞的特性、胰酶濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān),在℃時(shí),胰酶的作用能力**強(qiáng),因此使用胰酶時(shí),應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間,以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。一般常用胰酶的工作濃度為,而半貼壁細(xì)胞或?qū)σ让该舾械募?xì)胞常采用低濃度()的胰酶進(jìn)行細(xì)胞消化。由于EDTA能夠螯合Ca2+和Mg2+,從而破壞細(xì)胞連接促進(jìn)細(xì)胞的解離,因此在胰酶溶液中常常會(huì)加入一定量的EDTA混合使用,以增強(qiáng)解離效果。但是對(duì)于EDTA可能會(huì)干擾后續(xù)的測(cè)試分析時(shí),推薦選擇不含EDTA的消化液。本產(chǎn)品含有(Trypsin),溶于無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液中,經(jīng)過(guò)濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞和組織的消化。為改良型,除了具有方便快速、穩(wěn)定安全、細(xì)胞狀態(tài)好等特點(diǎn)之外,消化時(shí)間更短,消化效果媲美進(jìn)口產(chǎn)品,特別適用于難消化的細(xì)胞。 胰酶細(xì)胞消化液含 0.25%胰酶和 0.02%EDTA。
胰蛋白酶:(Trypsin)為蛋白酶的一種,是從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。由223個(gè)氨基酸殘基組成的單鏈多肽,主要切割賴氨酸和精氨酸羧基端。按干燥品計(jì)算,每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500單位。作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān),在pH為、溫度為37℃時(shí),胰酶溶液的作用能力**強(qiáng)。使用胰酶時(shí),應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間,以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。終止消化時(shí),可用含有血清培養(yǎng)液終止胰酶對(duì)細(xì)胞的作用。有些細(xì)胞容易消化(如雞胚原代成纖維細(xì)胞)可用胰酶進(jìn)行消化,可以不加EDTA。 EDTA是一種化學(xué)螯合劑,主要作用在于能螯合Ca、Mg離子,使細(xì)胞分離。新疆EDTA胰酶哪個(gè)好
胰蛋白酶屬于其中一種活性成分,主要用于促進(jìn)消化吸收。北京進(jìn)口胰酶市場(chǎng)報(bào)價(jià)
細(xì)胞傳代消化時(shí)所用胰酶濃度?常見(jiàn)濃度為0.25%的胰酶(含有螯合劑),半貼壁細(xì)胞或者對(duì)胰酶敏感的細(xì)胞,可采用0.05%濃度的胰酶(含有或者不含有螯合劑)進(jìn)行細(xì)胞消化。由于細(xì)胞膜上的粘附蛋白需要金屬離子維持其活性,常見(jiàn)的胰酶中含有EDTA等整合劑,如果細(xì)胞貼壁不是非常緊密,也可用不含有螯合劑的胰酶進(jìn)行細(xì)胞消化。胰酶對(duì)細(xì)胞膜上粘附蛋白的損害比較大,如果進(jìn)行細(xì)胞膜上蛋白的研究,建議選擇溫和的細(xì)胞消化試劑,盡量減少對(duì)細(xì)胞膜上蛋白的損傷。此外,由于胰酶自身也是一種蛋白,胰酶也會(huì)自己剪切自己,建議胰酶不要反復(fù)凍融,拿到手中的大瓶胰酶進(jìn)行分裝使用。除了常見(jiàn)的胰酶(含有或者不含有EDTA)。北京進(jìn)口胰酶市場(chǎng)報(bào)價(jià)