離子通道的近代觀念源于Hodgkin、Huxley、Katz等人在20世紀30—50年代的開創(chuàng)性研究。在1902年,Bernstein創(chuàng)造性地將Nernst的理論應(yīng)用到生物膜上,提出了“膜學(xué)說”。他認為在靜息狀態(tài)下,細胞膜只對鉀離子具有通透性;而當(dāng)細胞興奮的瞬間,膜的破裂使其喪失了選擇通透性,所有的離子都可以自由通過。Cole等人在1939年進行的高頻交變電流測量實驗表明,當(dāng)動作電位被觸發(fā)時,雖然細胞的膜電導(dǎo)大為增加,但膜電容卻只略有下降,這個事實表明膜學(xué)說所宣稱的膜破裂的觀點是不可靠的。1949年Cole在玻璃微電極技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)明了電壓鉗位(voltageclamptechnique)技術(shù)膜片鉗80%的工夫在于刺備細胞。德國可升級膜片鉗電生理工具
電壓鉗的原理∶用兩根前列直徑0.5um的電極插入細胞內(nèi),一根電極用作記錄電極以記錄跨膜電位,用另一根電極作為電流注入電極,以固定膜電位。從而實現(xiàn)固定膜電位的同時記錄膜電流。電位記錄電極引導(dǎo)的膜電位(Vm)輸入電壓鉗放大器的負輸入端,而人為控制的指令電位(Vc)輸入正輸入端,放大器的正負輸入端子等電位,向正輸入端子施加指令電位(Vc)時,經(jīng)過短路負端子可使膜片等電較,即Vm=Vc,從而達到電位鉗制的目的,并可維持一定的時間。Vc的不同變化將導(dǎo)致Vm的變化,從而引起細胞膜上電壓依賴性離子通道的開放,通道開放引起的離子流反過來又引起Vm的變化,致使Vm≠Vc,Vc與Vm的任何差值都會導(dǎo)致放大器有電壓輸出,將相反極性的電流注入細胞,以使Vc=Vm,注入電流的大小與跨膜離子流相等,但方向相反。因而注入的電流被認為是標本興奮時的跨膜電流值(通道電流)。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結(jié)果,專業(yè)團隊,7*25小時隨時人工在線咨詢.德國可升級膜片鉗電生理工具全自動膜片鉗技術(shù)采用的標本必須是懸浮細胞,像腦片這類標本無法采用。
膜片鉗技術(shù)是由諾貝爾獎獲得者Neher和Sakmann于1976年發(fā)展起來的一種記錄細胞膜離子通道電生理活動的技術(shù)。該技術(shù)的應(yīng)用連接了細胞水平和分子水平的生理學(xué)研究,已成為現(xiàn)代細胞電生理學(xué)研究的常規(guī)方法。它廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、生理學(xué)、病理學(xué)、藥理學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、植物和微生物學(xué),并取得了豐碩的研究成果。膜片鉗技術(shù)點燃了細胞和分子水平生理學(xué)研究的**之火,并與基因克隆技術(shù)并駕齊驅(qū),給生命科學(xué)研究帶來了巨大的推動力。鈣成像技術(shù)***用于實時監(jiān)測神經(jīng)元、心肌和各種細胞內(nèi)鈣離子的變化,從而檢測神經(jīng)元和心肌的活動。這些技術(shù)是人們觀察神經(jīng)和各種細胞活動的直接手段,現(xiàn)已發(fā)展成為生命科學(xué)研究的熱點,也是國家自然科學(xué)基金鼓勵申報的重要領(lǐng)域。
1937年,Hodgkin和Huxley在烏賊巨大神經(jīng)軸突細胞內(nèi)實現(xiàn)細胞內(nèi)電記錄,獲1963年Nobel獎1946年,凌寧和Gerard創(chuàng)造拉制出前列直徑小于1μm的玻璃微電極,并記錄了骨骼肌的電活動。玻璃微電極的應(yīng)用使的電生理研究進行了重命性的變化。Voltageclamp(電壓鉗技術(shù))由Cole和Marmont發(fā)明,并很快由Hodgkin和Huxley完善,真正開始了定量研究,建立了H一H模型(膜離子學(xué)說),是近代興奮學(xué)說的基石。1948年,Katz利用細胞內(nèi)微電極技術(shù)記錄到了終板電位;1969年,又證實N—M接觸后的Ach以"量子式"釋放,獲1976年Nobel獎。1976年,德國的Neher和Sakmann發(fā)明PatchClamp(膜片鉗)。并在蛙橫紋肌終板部位記錄到乙酰膽堿引起的通道電流。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結(jié)果,專業(yè)團隊,7*42小時隨時人工在線咨詢.膜片鉗是一種用于夾持薄膜或其他薄片材料的工具。
膜片鉗技術(shù)原理:膜片鉗技術(shù)是用玻璃微電極吸管把只含1-3個離子通道、面積為幾個平方微米的細胞膜通過負壓吸引封接起來(見右圖),由于電極前列與細胞膜的高阻封接,在電極前列籠罩下的那片膜事實上與膜的其他部分從電學(xué)上隔離,因此,此片膜內(nèi)開放所產(chǎn)生的電流流進玻璃吸管,用一個極為敏感的電流監(jiān)視器(膜片鉗放大器)測量此電流強度,就單一離子通道電流膜片鉗技術(shù)的建立,對生物學(xué)科學(xué)特別是神經(jīng)科學(xué)是一資有重大意義的變革。這是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜單一的(或多個的離子通道分子活動的技術(shù)。了解離子通道的功能以及結(jié)構(gòu)的關(guān)系對于從分子水平深入探討某些疾病措施等均具有十分重要的理論和實際意義。進口雙電極膜片鉗多少錢
對離子通道功能的研究,主要采用記錄離子通道電流來間接反映離子通道功能。德國可升級膜片鉗電生理工具
膜片鉗放大器的工作模式;(1)電壓鉗模式∶在鉗制細胞膜電位的基礎(chǔ)上改變膜電位,記錄離子通道電流的變化,記錄的是諸如通道電流;EPSC;IPSC等電流信號。是膜片鉗的基本工作模式.(2)屯流鉗素向細胞內(nèi)注入刺激電流,記錄膜電位對刺激電流的反應(yīng)。記錄的是諸如動作電位,EPSP;IPSP等電壓信號。膜片鉗技術(shù)實現(xiàn)膜電位固定的關(guān)鍵是在玻璃微電極前列邊緣與細胞膜之間形成高阻(10GΩ)密封,使電極前列開口處相接的細胞膜片與周圍環(huán)境在電學(xué)上隔離,并通過外加命令電壓鉗制膜電位。德國可升級膜片鉗電生理工具