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高速高分辨率多光子顯微鏡技術(shù)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-03-26

    2020年,TonmoyChakraborty等人提出了一種加快2PM軸向掃描速度的方法[2]。在光學(xué)顯微鏡中,物鏡或樣品的緩慢軸向掃描速度限制了體積成像的速度。近年來(lái),通過(guò)使用遠(yuǎn)程聚焦技術(shù)或電可調(diào)諧透鏡(ETL)已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了快速軸向掃描;但是,遠(yuǎn)程聚焦中反射鏡的機(jī)械驅(qū)動(dòng)會(huì)限制軸向掃描速度,ETL會(huì)引入球面像差和更高階像差,從而無(wú)法進(jìn)行高分辨率成像。為了克服這些局限性,該組引入了一種新穎的光學(xué)設(shè)計(jì),能將橫向掃描轉(zhuǎn)換為可用于高分辨率成像的無(wú)球差的軸向掃描。該設(shè)計(jì)有兩種實(shí)現(xiàn)方式,第一種能夠執(zhí)行離散的軸向掃描,另一種能夠進(jìn)行連續(xù)的軸向掃描。具體裝置如圖3a所示,由兩個(gè)垂直臂組成,每個(gè)臂中都有一個(gè)4F望遠(yuǎn)鏡和一個(gè)物鏡。遠(yuǎn)程聚焦臂包含一個(gè)檢流掃描鏡(GSM)和一個(gè)空氣物鏡(OBJ1),另一個(gè)臂(稱(chēng)為照明臂)由一個(gè)水浸物鏡(OBJ2)構(gòu)成。將這兩個(gè)臂對(duì)齊,以使GSM與兩個(gè)物鏡的后焦平面共軛。準(zhǔn)直的激光束被偏振分束器反射到遠(yuǎn)程聚焦臂中,GSM對(duì)其進(jìn)行掃描,進(jìn)而使得OBJ1產(chǎn)生的激光焦點(diǎn)進(jìn)行橫向掃描。 更多關(guān)于多光子顯微鏡的信息有哪些?高速高分辨率多光子顯微鏡技術(shù)

高速高分辨率多光子顯微鏡技術(shù),多光子顯微鏡

Ca2+是重要的第二信使,對(duì)于調(diào)節(jié)細(xì)胞的生理反應(yīng)具有重要的作用,開(kāi)發(fā)和利用雙光子熒光顯微成像技術(shù)對(duì)Ca2+熒光信號(hào)進(jìn)行觀(guān)測(cè),可以從某些方面對(duì)有機(jī)體或細(xì)胞的變化機(jī)制進(jìn)行分析,具有重要的意義。利用雙光子熒光顯微成像技術(shù)可以觀(guān)察細(xì)胞內(nèi)用熒光探針標(biāo)記的Ca2*的時(shí)間和空間的熒光圖像的變化,還可以觀(guān)察細(xì)胞某一層面或局部的(Ca2+)熒光圖像和變化。通過(guò)對(duì)單細(xì)胞的研究發(fā)現(xiàn),Ca2+不僅在細(xì)胞局部區(qū)域間的分布是不均勻的,而且細(xì)胞內(nèi)各局部區(qū)域的不同深度或?qū)哟伍g也存在不同程度的Ca2+梯差即所謂的空間Ca2梯差。美國(guó)全自動(dòng)多光子顯微鏡原理光子顯微鏡利用光學(xué)透鏡和光學(xué)元件將樣品中的光反射或透射到目鏡中,從而形成圖像。

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神經(jīng)科學(xué)重要的研究工具-多光子顯微鏡作為神經(jīng)科學(xué)重要的研究工具,近年來(lái)發(fā)展快速,品牌也眾多。我們通常都是在一間開(kāi)著冷氣的房間里的超大防震臺(tái)上見(jiàn)過(guò)這樣一套設(shè)備。臺(tái)面上復(fù)雜的光路也讓我們?cè)谑褂弥行⌒囊硪恚屡獕牧四睦锒鵁o(wú)從修復(fù)。你是否想象過(guò)一臺(tái)放在書(shū)桌邊上就能使用的多光子顯微鏡,一臺(tái)跟普通顯微鏡一樣操作簡(jiǎn)便的多光子顯微鏡,一臺(tái)不用擔(dān)心會(huì)碰壞的多光子顯微鏡,一臺(tái)可以在不同實(shí)驗(yàn)室之間搬來(lái)搬去的多光子顯微鏡,一臺(tái)可以從任意角度進(jìn)行觀(guān)察掃描的多光子顯微鏡?滔博生物TOP-Bright是一家集研發(fā),生產(chǎn),銷(xiāo)售于一體的專(zhuān)注于神經(jīng)科學(xué)產(chǎn)品及致力于向高校、科研機(jī)構(gòu)等領(lǐng)域提供實(shí)驗(yàn)室一體化方案的高科技企業(yè)。業(yè)務(wù)服務(wù)范圍已遍布至全國(guó)各地幾百家實(shí)驗(yàn)室。目前公司主營(yíng)產(chǎn)品是享譽(yù)全球的國(guó)際品牌和產(chǎn)品,這些儀器設(shè)備都是科學(xué)研究所必備且不可替代的基礎(chǔ)儀器

    對(duì)于雙光子(2P)成像而言,離焦和近表面熒光激發(fā)是兩個(gè)比較大的深度限制因素,而對(duì)于三光子(3P)成像這兩個(gè)問(wèn)題大大減小,但是三光子成像由于熒光團(tuán)的吸收截面比2P要小得多,所以需要更高數(shù)量級(jí)的脈沖能量才能獲得與2P激發(fā)的相同強(qiáng)度的熒光信號(hào)。功能性3P顯微鏡比結(jié)構(gòu)性3P顯微鏡的要求更高,它需要更快速的掃描,以便及時(shí)采樣神經(jīng)元活動(dòng);需要更高的脈沖能量,以便在每個(gè)像素停留時(shí)間內(nèi)收集足夠的信號(hào)。復(fù)雜的行為通常涉及到大型的大腦神經(jīng)網(wǎng)絡(luò),該網(wǎng)絡(luò)既具有局部的連接又具有遠(yuǎn)程的連接。要想將神經(jīng)元活動(dòng)與行為聯(lián)系起來(lái),需要同時(shí)監(jiān)控非常龐大且分布普遍的神經(jīng)元的活動(dòng),大腦中的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)會(huì)在幾十毫秒內(nèi)處理傳入的刺激,要想了解這種快速的神經(jīng)元?jiǎng)恿W(xué),就需要MPM具備對(duì)神經(jīng)元進(jìn)行快速成像的能力??焖費(fèi)PM方法可分為單束掃描技術(shù)和多束掃描技術(shù)。 精確觀(guān)測(cè)生物分子相互作用,多光子顯微鏡推動(dòng)生命科學(xué)研究發(fā)展。

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作為一個(gè)多學(xué)科、知識(shí)密集型和資金密集型的高科技產(chǎn)業(yè),多光子顯微鏡涉及醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、化學(xué)、物理學(xué)、電子學(xué)、工程學(xué)等多個(gè)學(xué)科。其生產(chǎn)工藝相對(duì)復(fù)雜,進(jìn)入門(mén)檻較高。它是衡量一個(gè)國(guó)家制造業(yè)和高科技發(fā)展水平的重要標(biāo)準(zhǔn)之一。在過(guò)去的五年里,多光子顯微鏡的市場(chǎng)是集中的。由于投產(chǎn)成本高,技術(shù)難度大,目前涌現(xiàn)的新企業(yè)并不多。顯微鏡作為傳統(tǒng)的高科技產(chǎn)業(yè),并沒(méi)有被其他技術(shù)顛覆,而是一直在不斷融合發(fā)展相關(guān)技術(shù),在醫(yī)療等精密檢測(cè)領(lǐng)域發(fā)揮更大的作用。顯微鏡的商業(yè)化發(fā)展已進(jìn)入成熟階段,主要需求來(lái)自教學(xué)、生命科學(xué)研究和精密測(cè)試等。全球市場(chǎng)呈現(xiàn)溫和增長(zhǎng)趨勢(shì)。而顯微鏡產(chǎn)品(如多光子顯微鏡、電子顯微鏡)正在刺激市場(chǎng)需求,多光子顯微鏡市場(chǎng)發(fā)展?jié)摿薮?。滔博生物多光子顯微鏡是一種高級(jí)的顯微鏡技術(shù).bruker多光子顯微鏡供應(yīng)商

多光子顯微鏡使用高能量鎖模脈沖激光器。高速高分辨率多光子顯微鏡技術(shù)

我們要指出的是,單光子激發(fā)熒光和雙光子激發(fā)熒光,是從熒光產(chǎn)生的機(jī)理上來(lái)區(qū)分的。而共焦則是熒光顯微鏡的一種結(jié)構(gòu),其目的是為了,通過(guò)共焦結(jié)構(gòu),提高整個(gè)熒光顯微鏡的空間分辨率。所以共焦熒光顯微鏡可以根據(jù)激發(fā)光源的不同,實(shí)現(xiàn)單光子共焦熒光成像或者雙光子共焦熒光成像。往往一個(gè)普通的雙光子熒光顯微鏡(沒(méi)有共焦結(jié)構(gòu))其空間分辨率也可以達(dá)到單光子共焦熒光顯微鏡的水平。這樣就可以簡(jiǎn)化整個(gè)系統(tǒng),相對(duì)來(lái)說(shuō),就提高了激發(fā)光源的利用率,以及熒光的探測(cè)效率,這個(gè)也是我們提倡雙光子熒光成像的原因之一。雙光子熒光共焦顯微鏡由于雙光子效應(yīng)和共焦結(jié)構(gòu),分辨率則會(huì)更高,而我們通常說(shuō)的共焦顯微鏡都是指單光子激發(fā)熒光的。高速高分辨率多光子顯微鏡技術(shù)