摘要: 本發(fā)明提供了一種磁性微球分離純化納豆激酶的方法。將表面偶聯(lián)有親和配基的磁性微球加入到納豆激酶的發(fā)酵液中，在室溫下緩慢攪拌充分混合，使納豆激酶特異性地吸附在磁性微球表面；采用磁鐵將吸附有納豆激酶的磁性微球從發(fā)酵液中分離出來(lái)，用緩沖溶液清洗一次去除雜質(zhì)，再用解析液進(jìn)行解析，收集到納豆激酶的洗脫液；***經(jīng)過(guò)冷凍干燥得到納豆激酶產(chǎn)品。分離后納豆激酶的活力為８５％，純化因子為６．０。本發(fā)明具有周期短、操作簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本低且易于規(guī)?；a(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。 利要求: 一種磁性微球分離純化納豆激酶的方法，其特征在于，所述的納豆激酶分離純化方法包括以下幾個(gè)步驟：（１）納豆激酶發(fā)酵液的制備從固體培養(yǎng)基上挑取納豆激酶的單菌落接入２０－１００ｍＬ的種子培養(yǎng)基中，搖床中培養(yǎng)１２－２４ｈ，按２％－６％ 接種量接入發(fā)酵液體培養(yǎng)基中，在２５－３７℃下發(fā)酵罐培養(yǎng)２４－４８ｈ，液體發(fā)酵結(jié)束后，通過(guò)離心除去菌體，得到納豆激酶發(fā)酵液；（２）親和配基在磁性微球上的固定化將自制的磁性高分子微球進(jìn)行表面功能化修飾得到表面含有環(huán)氧功能基團(tuán)的磁 性微球，在５０－８０℃條件下，以氫氧化鈉為催化劑，進(jìn)行親和配基的固定化反應(yīng)，獲得表面含有親和長(zhǎng)沙分離純化微球

如何精確控制和大規(guī)?；a(chǎn)裸眼看不到的納米微球并賦予這些材料的功能， 以滿(mǎn)足現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)的需求是當(dāng)今納米材料科學(xué)家**重要的研究方向。納米微球 的關(guān)鍵技術(shù)問(wèn)題和研究方向如下： 1） 納米微球粒徑大小徑及粒徑分布精確控制關(guān)鍵技術(shù): 納米微球的應(yīng)用非常***,不同的應(yīng)用需要不同性能的微球,很多**應(yīng)用都 對(duì)微球的粒徑大小和均一性都有極高的要求，如液晶間隔物微球和導(dǎo)電金 球都要求能精確控制粒徑大?。ㄆ骄骄瓤刂圃?0納米以下），粒徑分 布滿(mǎn)足變異系數(shù)小于3%,. 因此不同材料組成的納米微球的精確粒徑大小和分 布本領(lǐng)域首要解決的關(guān)鍵技術(shù)問(wèn)題 2） 納米微球的孔徑大小,孔徑分布和比表面精確調(diào)控關(guān)鍵技術(shù): 在很多應(yīng)用領(lǐng)域，不僅要嚴(yán)格控制微球材料、粒徑大小、分布和機(jī)械強(qiáng)度， 還要調(diào)控微球的比表面積、孔道結(jié)構(gòu)等,如用于生物分離和分析的微球介質(zhì)和 色譜填料，微球粒徑大小、均一性、納米孔道結(jié)構(gòu)都會(huì)影響生物分子分離和 分析效果，因此如何調(diào)控微球孔道結(jié)構(gòu)，比表面積也是關(guān)鍵技術(shù)之一。長(zhǎng)沙分離純化微球

2.3.2懸浮聚合
懸浮聚合法是單體小液滴懸浮在水中的聚合方法，在磁性粒子、穩(wěn)定劑和表面活性劑存在下、靠油溶性引發(fā)劑的作用使一種或幾種單體在磁性粒子表面聚合可將磁性粒子包裹在聚合物中。與乳液聚合相比，懸浮聚合單體液滴粒徑通常是微米級(jí)別的。Li等[17]合成一種新型的核殼式P(DVB-MAA)/Fe3O4納米復(fù)合微球，可作為分散模式的磁介導(dǎo)微觀粒子的固相萃取吸附劑。Fe3O4納米粒子通過(guò)溶劑熱法制備，P(DVB-MAA)通過(guò)懸浮聚合合成，微球的平均粒徑在300~700nm，微球殼層的P(DVB-MAA)厚度在10nm左右。該微球可用于水中微量的有機(jī)污染物的快速、高靈敏檢測(cè)。
2.3分散聚合
分散聚合是懸浮聚合的一種，也是一種特殊的沉淀聚合，反應(yīng)之前單體、溶劑、穩(wěn)定劑、引發(fā)劑等是均一的混合體系，當(dāng)反應(yīng)開(kāi)始，聚合物達(dá)到一定分子量之后，聚合物逐漸從反應(yīng)體系中沉淀出來(lái)。Zhang等合成了Fe3O4含量高達(dá)70wt%、且分布比較均一的P(St–GMA)/Fe3O4的納米復(fù)合微球。由于只有當(dāng)磁性粒子在反應(yīng)初期成核過(guò)程中捕獲，并聚合增長(zhǎng)才能得到復(fù)合微球，因此此方法的磁含量往往不高，且該法需使用的溶劑多為有機(jī)溶劑，聚合物與有機(jī)溶劑的親和性導(dǎo)致聚合物沉淀出時(shí)鏈長(zhǎng)較長(zhǎng)，粒徑較大，限制了其應(yīng)用。

熒光微球分析技術(shù)屬于化學(xué)材料發(fā)展結(jié)果，可用于細(xì)胞表面抗原的檢測(cè)、退行性神經(jīng)病變示蹤物、吞噬功能的檢測(cè)、血流分析、敏感性診斷試劑等，本文介紹了熒光微球分析技術(shù)以及熒光微球吞噬實(shí)驗(yàn)的操作步驟。 熒光微球分析 技術(shù)簡(jiǎn)介 熒光微球分析技術(shù)是近年來(lái)化學(xué)材料科學(xué)活躍發(fā)展 的產(chǎn)物，各種大小(0.2～10μm)可產(chǎn)生熒光和色彩的人工微球應(yīng)運(yùn)而生，目前各種材料人工合成、多種顏色和規(guī)格的熒光微球有2大類(lèi)，一種是表面不帶修飾基團(tuán)的微球，另一種是攜帶各種化學(xué)修飾基團(tuán)，包括羧基化修飾、氨基修飾、巰基或醛巰基修飾等的微球。

磁性高分子微球是近年發(fā)展起來(lái)的一種新型磁性材料，是通過(guò)適當(dāng)方法將磁性無(wú)機(jī)粒子與有機(jī)高分子結(jié)合形成的具有一定磁性及特殊結(jié)構(gòu)的復(fù)合微球。磁性復(fù)合微球不僅具有普通高分子微球的眾多特性還具有磁響應(yīng)性，所以不僅能夠通過(guò)共聚及表面改性等方法賦予其表面功能基 (如－OH、－COOH、－CHO、－NH2,等)，還能在外加磁場(chǎng)作用下具有導(dǎo)向功能。 結(jié)合方式 ①與高分子先結(jié)合成微球，磁粉再吸附其表面； ②磁粉和高分子先結(jié)合成微球再吸附； ③磁粉、、高分子一起混合經(jīng)均勻化后再微球化． Devineni等人合成 magnetic microsphers methotrexate (MM-MTX) 載體用以**，MTA通過(guò)2—二甲胺甲基—1—乙基鏈接在磁性粒子的表面，通過(guò)水解可以釋放．但是實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在45min內(nèi)又重新分配，導(dǎo)致小鼠的死亡．此類(lèi)問(wèn)題有待進(jìn)一步研究解決．專(zhuān)業(yè)分離純化微球

長(zhǎng)沙分離純化微球

2.3單體法
單體聚合法是目前研究**多、被***采用的制備方法。單體聚合法是在有機(jī)單體和磁性粒子共同存在的情況下，根據(jù)不同的聚合方式加入表面活性劑、穩(wěn)定劑、引發(fā)劑等聚合制備磁性高分子微球的方法。常用的方法主要包括乳液聚合、（微）懸浮聚合、分散聚合以及活性聚合等。其中乳液聚合又分為無(wú)皂乳液聚合、Pickering乳液聚合法、種子乳液聚合、細(xì)乳液聚合法、反相乳液聚合、原位乳液聚合等。
2.3.1乳液聚合
無(wú)皂乳液聚合是指在反應(yīng)過(guò)程中完全不加乳化劑或者**加入微量乳化劑(其濃度小于臨界膠束濃度(CMC))的乳液聚合過(guò)程Wu采用將通過(guò)油酸改性后的Fe3O4納米粒子與溫敏性N-異丙基丙稀醜胺在交聯(lián)劑DVB作用下，通過(guò)無(wú)培乳液聚合方法制備了具有磁場(chǎng)和溫度雙重相應(yīng)的復(fù)合微球，該復(fù)合微球具有核殼結(jié)構(gòu)，尺寸約為100nm，其比較低臨界溶解溫度(LCST)在40-45℃。Yamauchi等利用無(wú)皂乳液聚合法制備出平均粒徑達(dá)到515nm、比飽和磁化強(qiáng)度達(dá)到7.3A·m2/kg的磁性高分子復(fù)合微球。
長(zhǎng)沙分離純化微球

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