摘要: 本發(fā)明提供了一種磁性微球分離純化納豆激酶的方法。將表面偶聯(lián)有親和配基的磁性微球加入到納豆激酶的發(fā)酵液中，在室溫下緩慢攪拌充分混合，使納豆激酶特異性地吸附在磁性微球表面；采用磁鐵將吸附有納豆激酶的磁性微球從發(fā)酵液中分離出來，用緩沖溶液清洗一次去除雜質(zhì)，再用解析液進(jìn)行解析，收集到納豆激酶的洗脫液；***經(jīng)過冷凍干燥得到納豆激酶產(chǎn)品。分離后納豆激酶的活力為８５％，純化因子為６．０。本發(fā)明具有周期短、操作簡單、生產(chǎn)成本低且易于規(guī)?；a(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。 利要求: 一種磁性微球分離純化納豆激酶的方法，其特征在于，所述的納豆激酶分離純化方法包括以下幾個(gè)步驟：（１）納豆激酶發(fā)酵液的制備從固體培養(yǎng)基上挑取納豆激酶的單菌落接入２０－１００ｍＬ的種子培養(yǎng)基中，搖床中培養(yǎng)１２－２４ｈ，按２％－６％ 接種量接入發(fā)酵液體培養(yǎng)基中，在２５－３７℃下發(fā)酵罐培養(yǎng)２４－４８ｈ，液體發(fā)酵結(jié)束后，通過離心除去菌體，得到納豆激酶發(fā)酵液；（２）親和配基在磁性微球上的固定化將自制的磁性高分子微球進(jìn)行表面功能化修飾得到表面含有環(huán)氧功能基團(tuán)的磁 性微球，在５０－８０℃條件下，以氫氧化鈉為催化劑，進(jìn)行親和配基的固定化反應(yīng)，獲得表面含有親和南京分離純化微球哪家強(qiáng)

磁性高分子微球的制備
目前制備磁性高分子納米微球的方法主要分為五類，其主要包括：包埋法、原位法、單體聚合法、界面沉積法及自組裝法。
2.1包埋法
包埋法是將聚合物溶解在含有磁性超微粒子的溶液中，然后加入大量的沉淀劑，通過交聯(lián)、絮凝、霧化、沉積、蒸發(fā)等手段使高分子物質(zhì)沉析在磁性粒子表面形成具有核殼結(jié)構(gòu)的復(fù)合微球。高分子物質(zhì)與磁性粒子主要通過范德華力、氫鍵、螯合作用或共價(jià)鍵等作用力結(jié)合。Li等通過化學(xué)共沉淀法合成納米粒子Fe3O4磁核，以殼聚糖為包裹材料包被自制的磁核，采用乳化交聯(lián)法制備了具有核-殼結(jié)構(gòu)的磁性高分子微球-殼聚糖磁性微球，并偶聯(lián)肝素配基得到了一種新型親和磁性微球。所得親和磁性微球具有較窄的粒徑分布、形狀規(guī)整，粒徑在50nm左右。將磁分離技術(shù)應(yīng)用于凝血酶的分離純化，得到了較好的效果（酶比活達(dá)1879.71U/mg，得率85%，純化倍數(shù)11.057，為傳統(tǒng)柱層析法的兩倍）。Chi?riuc等將含F(xiàn)e2+和Fe3+溶液逐滴加入殼聚糖的NaOH溶液中制的可用于負(fù)載頭孢霉素的磁性殼聚糖微球。
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常用的純化方法冷凍結(jié)晶法 　　冷凍結(jié)晶法是在低溫的條件下，依據(jù)混合脂肪酸各組分的凝固點(diǎn)差異進(jìn)行純化，進(jìn)而達(dá)到純化多不飽和脂肪酸的目的。將混合脂肪酸溶解在**或乙醇中，置于低溫下，在溶液中短鏈脂肪酸較長鏈脂肪酸的溶解度低，飽和脂肪酸較不飽和脂肪酸的溶解度低，這種溶解度差異隨溫度降低表現(xiàn)更為。 　　冷凍結(jié)晶法工藝原理簡單，操作方便，有效成分不易發(fā)生變性反應(yīng)。但其操作過程中溫度要求苛刻，需要回收大量的有機(jī)溶劑，純化效率不高，這限制了大規(guī)模的生產(chǎn)，但可以用于生產(chǎn)低成本的保健品類，從而滿足中低層消費(fèi)者的需求。

磁性高分子微球是近年發(fā)展起來的一種新型磁性材料，是通過適當(dāng)方法將磁性無機(jī)粒子與有機(jī)高分子結(jié)合形成的具有一定磁性及特殊結(jié)構(gòu)的復(fù)合微球。磁性復(fù)合微球不僅具有普通高分子微球的眾多特性還具有磁響應(yīng)性，所以不僅能夠通過共聚及表面改性等方法賦予其表面功能基 (如－OH、－COOH、－CHO、－NH2,等)，還能在外加磁場作用下具有導(dǎo)向功能。 結(jié)合方式 ①與高分子先結(jié)合成微球，磁粉再吸附其表面； ②磁粉和高分子先結(jié)合成微球再吸附； ③磁粉、、高分子一起混合經(jīng)均勻化后再微球化． Devineni等人合成 magnetic microsphers methotrexate (MM-MTX) 載體用以**，MTA通過2—二甲胺甲基—1—乙基鏈接在磁性粒子的表面，通過水解可以釋放．但是實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在45min內(nèi)又重新分配，導(dǎo)致小鼠的死亡．此類問題有待進(jìn)一步研究解決．

在酶催化領(lǐng)域：微球作為酶固定的載體可以保持酶的高度專一性和催化效率；提高酶的穩(wěn) 定性和壽命；減小酶對產(chǎn)品的污染；實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)連續(xù)化和酶的循環(huán)使用。微球也可以用于催 化劑的載體使得催化劑易于回收使用。 在化工領(lǐng)域：微球已***地添加到油漆、涂料、造紙、塑料以改善產(chǎn)品的抗刮性，提高產(chǎn) 品的耐磨性，及光學(xué)性能。 總之納米微球材料應(yīng)用非常***，幾乎滲透到所有的領(lǐng)域，納米材料科學(xué)家不斷地開發(fā)出 新技術(shù)來賦予納米微球新的光,電,磁,等各種功能, 使它為人類創(chuàng)造無限可能，以滿足現(xiàn)代產(chǎn) 業(yè)關(guān)鍵材料和技術(shù)的需求。 上海分離純化微球制造廠家

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如何制作納米微球呢？
離子交聯(lián)法是制作納米微球的基本方法之一，適用于以殼聚糖、海藻酸鈉等
為材料的納米微球。其主要原理是作為***載體的材料通過離子交聯(lián)法從乳
液中析出，同時(shí)通過氫鍵相互作用和疏水相互作用將***包埋在載體中，從
而制備成載藥微球。該方法制備條件溫和，整個(gè)過程不使用對人體有害的試
劑，也成為載藥微球的理想制備方法之一。
納米微球的典型制備方法還有“乳化-溶劑揮發(fā)法”和“微流控法”?！叭?br/> 化-溶劑揮發(fā)法”是將模型***先溶解于有機(jī)溶劑中,然后滴加到含有表面活
性劑的水相中,在均質(zhì)機(jī)的高速剪切下形成油相/水相型乳液,再通過常壓或減
壓方式除去乳液分散相中的揮發(fā)性有機(jī)溶劑,使納米粒硬化,***通過冷凍干
燥從水性混懸液中收集納米粒?！拔⒘骺胤ā笔且环N在微米尺度的通道中操
控兩種或幾種互不相溶的微小體積液體,連續(xù)、可控地生產(chǎn)具有高度單分散尺
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