作為時下的熱點技術(shù)，數(shù)字PCR是將核酸樣品分配到大量單獨、平行的微反應(yīng)單元（nL，納升級別）中，使得每個反應(yīng)單元中盡可能含有1個模板分子，并在此基礎(chǔ)上進行擴增、檢測和分布統(tǒng)計，從而實現(xiàn)靶標分子的比較 計數(shù)。（圖：數(shù)字PCR技術(shù)原理）根據(jù)微反應(yīng)單元的不同形式，數(shù)字PCR產(chǎn)品可分為微板式、微滴式和芯片式等。目前，市場上主要的數(shù)字PCR產(chǎn)品主要是基于微滴式和芯片式，如Bio-Rad公司的QX200微滴式系統(tǒng)和ThermoFisher公司的QuantStudio系統(tǒng)等。與一、二代PCR技術(shù)相比，數(shù)字PCR具有很多優(yōu)勢：一是特異性、靈敏性均有顯著提高；二是在不依賴內(nèi)參和標準曲線的前提下，可直接得到比較 量化指標；三是微反應(yīng)單元相互獨立、封閉，避免了PCR抑制劑及不同核酸分子擴增產(chǎn)物間的相互干擾，準確度和可重復性較高。數(shù)字以靈敏度和準確度測量突變的變異程度、檢測稀有的DNA靶拷貝以及解析拷貝數(shù)變?異狀態(tài)。美國醫(yī)療系統(tǒng)認證數(shù)字PCR性能特點

數(shù)字PCR是一種核酸分子定量技術(shù)。當前核酸分子的定量有三種方法，光度法基于核酸分子的吸光度來定量；實時熒光定量PCR（RealTimePCR）基于Ct值，Ct值就是指可以檢測到熒光值對應(yīng)的循環(huán)數(shù)；數(shù)字PCR是的定量技術(shù)，基于單分子PCR方法來進行計數(shù)的核酸定量，是一種定量的方法。主要采用當前分析化學熱門研究領(lǐng)域的微流控或微滴化方法，將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中，每個反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后，有一個核酸分子模板的反應(yīng)器就會給出熒光信號，沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應(yīng)器的體積，就可以推算出原始溶液的核酸濃度。微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)數(shù)字PCR技術(shù)min檢測下限可到2copies/ml，比qPCR靈敏度提升了100倍。

在定量PCR時，我們常常糾結(jié)一個問題，究竟是相對定量還是***定量呢？如今，你無需糾結(jié)了，因為數(shù)字PCR（digitalPCR）來了。盡管這兩種技術(shù)有些類似，都是估計起始樣品中的核酸量，但它們有一個重要的區(qū)別。定量PCR是依靠標準曲線或參照基因來測定核酸量，而數(shù)字PCR則讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個數(shù)，是對起始樣品的***定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應(yīng)用領(lǐng)域：拷貝數(shù)變異、突變檢測、基因相對表達研究（如等位基因不平衡表達）、二代測序結(jié)果驗證、miRNA表達分析、單細胞基因表達分析等。

盡管我國dPCR行業(yè)起步較晚，但在國家鼓勵醫(yī)療器械創(chuàng)新的大背景下，以及精細醫(yī)療和個性化用藥等需求推動下，dPCR成為了近年廣受關(guān)注的熱點領(lǐng)域，保持著穩(wěn)定快速的增長。近年來國內(nèi)誕生了如領(lǐng)航基因、新羿生物、銳訊生物、科維思、永諾生物、泛生子、思納福醫(yī)療等企業(yè)，開始與國外企業(yè)同臺競技。從市場角度看，北美依然是dPCR比較大的主導市場，其次是亞洲和歐洲。由于性疾病和的高發(fā)病率以及患者對這些疾病的早期診斷意識的提高，亞太地區(qū)將成為dPCR增長速度快的市場。伯樂、凱杰、賽默飛、羅氏、因美納等公司紛紛通過收購、投資等方式布局dPCR業(yè)務(wù)。在數(shù)字PCR賽道，塔歌生物將加速胎兒染色體非整倍體無創(chuàng)產(chǎn)前篩查注冊證的申報。

目前dPCR主要有兩種形式，芯片式和液滴式，但基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中，每個反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后，有一個核酸分子模板的反應(yīng)器就會給出熒光信號，沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應(yīng)器的體積，就可以推算出原始溶液的核酸濃度。可以使用幾種不同的方法來分配樣品，包括微孔板，毛細管，油乳劑和帶有核酸結(jié)合表面的小型化腔室陣列。樣品的分配使人們可以通過假設(shè)分子種群遵循泊松分布來估計不同分子的數(shù)量，根據(jù)泊松分布的原理，反應(yīng)體系中目標分子的拷貝數(shù)可以通過公式A=-ln[(N-X)/N]*N計算，從而解決了多個目標分子存在于單個液滴中的可能性。影響dPCR定量結(jié)果的因素：儀器采用的分散方式與數(shù)量、溶液稀釋方法、分散體積的準確性以及結(jié)果表達方式。法國微滴式數(shù)字PCR分析應(yīng)用

dPCR的測量結(jié)果通常表示為含量，即拷貝數(shù)轉(zhuǎn)基因質(zhì)量百分比，而QPCR結(jié)果通常表示為拷貝數(shù)的質(zhì)量分數(shù)。美國醫(yī)療系統(tǒng)認證數(shù)字PCR性能特點

國產(chǎn)品牌市場份額的不斷擴大，固然有、貿(mào)易戰(zhàn)等因素，但更關(guān)鍵在于，國產(chǎn)dPCR企業(yè)，立足本土，洞察客戶需求，不斷提供各種應(yīng)用場景下的解決方案。在儀器的自動化程度上，領(lǐng)航基因、思納福醫(yī)療、達微生物分別推出全自動一體機，領(lǐng)航基因更是領(lǐng)行業(yè)之先，推出了數(shù)字PCR工作站；在終端應(yīng)用開發(fā)上，繼科維思HER2基因擴增檢測試劑盒（數(shù)字PCR法）獲得NMPA認證后，2022年新羿生物推出較早基于數(shù)字PCR技術(shù)的NMPA獲證檢測試劑盒；領(lǐng)航基因基于dPCR推出血流檢測試劑盒和結(jié)核與非結(jié)核分枝桿菌檢測試劑盒，并全速推進試劑盒注冊臨床試驗進度；在熒光通道上，領(lǐng)航基因、思納福醫(yī)療、新羿生物大幅國外進口品牌的2-4色熒光通道，分別推出7色、6色及5色熒光通道，進一步提升樣本利用率和檢測靶標覆蓋范圍，降低試驗成本。美國醫(yī)療系統(tǒng)認證數(shù)字PCR性能特點

廣州雙螺旋科學儀器有限公司致力于精細化學品，是一家服務(wù)型公司。公司業(yè)務(wù)分為數(shù)字PCR，純水機，病理切片機，倍性分析儀等，目前不斷進行創(chuàng)新和服務(wù)改進，為客戶提供良好的產(chǎn)品和服務(wù)。公司將不斷增強企業(yè)重點競爭力，努力學習行業(yè)知識，遵守行業(yè)規(guī)范，植根于精細化學品行業(yè)的發(fā)展。雙螺旋科學儀器憑借創(chuàng)新的產(chǎn)品、專業(yè)的服務(wù)、眾多的成功案例積累起來的聲譽和口碑，讓企業(yè)發(fā)展再上新高。