實驗儀器:Sysmex CyFlow® Ploidy Analyser 倍性分析儀(Sysmex Partec)試劑盒:CyStain® UV Precise P(Sysmex Partec)實驗步驟:1、取新鮮待測植物葉片 0.5 平方厘米,置于培養(yǎng)皿中2. 取 Partec CyStain UV Precise P 裂解液 400ul 加于植物葉片周圍,用刀片將葉片切碎,以充分提取出完整的細胞核,持續(xù) 30-60 秒3. 將培養(yǎng)皿中的液體用 30um 濾網(wǎng)過濾至樣品管中4. 向樣品管中加入 Partec CyStain UV Precise P 的 DAPI 染液 1600ul5. 上機(CyFiow Analyser倍性分析儀)檢測。流式細胞術檢測對象:單細胞懸液或生物顆粒。進口CyFlow Ploidy Analyzer倍性分析儀系統(tǒng)
流式細胞術的潛在應用有非常多,1其中包括檢測和測量:1、蛋白質(zhì)表達 - 遍及所有細胞,包括細胞核內(nèi)2、蛋白質(zhì)轉譯后修飾 - 包括剪切和磷酸化蛋白質(zhì)3、RNA - 包括IncRNA、 miRNA和mRNA轉錄物4、細胞健康狀態(tài) - 從存活率到晚期凋亡或程序化細胞死亡5、細胞周期狀態(tài) - 是評估細胞處于G0/G1期、S期、G2期或多倍體狀態(tài)的強大工具,包括分析細胞凋亡和活化6、鑒定和表征異質(zhì)樣本中的不同細胞亞群 - 包括區(qū)分中樞效應記憶細胞和耗竭T細胞或調(diào)節(jié)性T細胞。中國雙螺旋生物儀器倍性分析儀性能參數(shù)流式細胞術是一種在功能水平上對單細胞或其他生物粒子進行定量分析和分選的檢測手段。
CyFlow Analyser倍性分析儀軟件集成了儀器控制功能,并為倍性和基因組大小檢測提供了一整套數(shù)據(jù)分析解決方案。它包含一個單參數(shù)的DNA直方圖用來顯示基因組大小和倍性測定結果。另外還有一個雙參數(shù)的點圖用來顯示柵極和單獨完整且零散的細胞核。軟件系統(tǒng)設計了兩個倍體峰值自動識別算法和一個用戶手動設置峰值功能。該軟件系統(tǒng)還可以創(chuàng)建用戶自義定峰值識別程序,以便在具體實驗環(huán)境下實現(xiàn)儀器的分析功能較大化。數(shù)據(jù)分析結果將會清晰的顯示在屏幕上,同時,也可以直接和相關的DNA值方圖一起提供Ms Excel表格導出。
CyFlow Ploidy Analyser Demo倍性分析儀注意事項:1、儀器的外殼不要隨意打開;、2實驗樣品的前處理要和儀器盡量避開,比方液體飛濺損傷儀器;3、上機操作請一定要進行應用培訓,或者請參加過培訓的老師、同學進行指導,切不可單獨上機;、4制作好預約流程,盡量避免一日之內(nèi)重復開機,并做好實驗上機記錄,以更好的評估儀器的使用情況;5、如果操作過程中出現(xiàn)堵孔現(xiàn)象,啟動清洗功能,并重新用超純水沖洗2min;6、將儀器的操作手冊、光路圖及部件做好詳細表格標注,放在實驗室明顯的地方,方便使用者查閱;7、實驗數(shù)據(jù)在進行拷貝時,盡量不要使用自帶的優(yōu)盤,較好外接一個光驅(qū),將數(shù)據(jù)拷貝在光盤中,如果實驗條件有限,應在使用前將優(yōu)盤進行格式化后方可操作。Ploidy Analyser倍性分析儀采用Partec*染色技術。
細胞核DNA含量和基因組大小對于研究生物的多樣性至關重要,尤其是在基礎植物學和應用植物學等多個研究領域。這些研究的基礎是細胞的內(nèi)多倍化(即C值)。細胞的內(nèi)多倍化**了細胞核內(nèi)DNA含量倍增,指的是同一個體內(nèi)相鄰體細胞具有多種倍性的細胞核現(xiàn)象,由細胞內(nèi)復制產(chǎn)生。細胞內(nèi)多倍化在真核生物中普遍存在,尤其在植物中變化范圍較大,對研究個體的生長發(fā)育具有重要的生物學意義。盡管C值非常重要,但是目前已知C值的植物品種*占所有植物品種的一小部分。基于流式的檢測技術簡單、快速、準確、可靠,目前該技術已作為測定植物勻漿中C值的優(yōu)先方法,并且在植物學中的應用越來越范圍廣。流式細胞儀是對細胞進行自動,高通量分析和分選的裝置。國產(chǎn)雙螺旋生物儀器倍性分析儀CyFlow分選系統(tǒng)
使用倍性分析儀 ,對 4 8種培養(yǎng)多年不同基因型的柑橘愈傷組織的細胞DNA含量進行了測定。進口CyFlow Ploidy Analyzer倍性分析儀系統(tǒng)
利用流式細胞儀快速檢測棉花 DNA 倍性,為棉花的倍性鑒定和育種研究提供基礎數(shù)據(jù)。以陸地棉珂字棉 312( Gossypium hirsutumLinn.)的老葉和嫩葉為試材,用 WPB 和 LB01 解離液提取細胞核,經(jīng) PI 染色后使用流式細胞儀檢測細胞倍性。結果發(fā)現(xiàn),用 WPB 解離液提取棉花嫩葉獲得的細胞核用于倍性檢測效果更好,表現(xiàn)為主峰離子團清晰而集中、背景碎片少,可以得到明顯的主峰、雜峰更少,且收集到的細胞核數(shù)目更多。初步建立了利用流式細胞儀快速檢測棉花 DNA 倍性的方法。進口CyFlow Ploidy Analyzer倍性分析儀系統(tǒng)
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