使用熒光核酸染料標記植物中DNA含量,隨后用流式細胞儀高通量進行植物倍性分析,已經(jīng)成為植物研究中的常用分析手段[1]。相較傳統(tǒng)的根尖壓片染色體計數(shù),流式細胞法制備樣本簡單,無需制備中期染色體,通量高,結(jié)果準確,并且可以兼容幾乎所有植物的任何組織。使用Sysmex-Partec原廠倍性分析試劑和CellTrics過濾器,只需要:1、切碎2、過濾3、上機三步,2分鐘內(nèi)完成倍性分析實驗。使用Sysmex-Partec CyFlow PA對植株基因組大小進行預測,染色體倍性進行預測,對突變株進行倍性鑒定,構建植物進化樹。智能型、便攜設計CD4細胞監(jiān)測流式細胞儀適合HIV/AIDS患者CD4細胞監(jiān)測。進口倍性分析儀
植物染色體倍性鑒定在植物遺傳育種中具有十分重要的作用。在育種過程中,通過花藥(花粉小孢子)、未受精子房等途徑再生出的植株,往往是單倍體、雙單倍體及其他倍性植株的混合群體,有效的倍性鑒定是了解其遺傳背景和進一步應用的基礎。多倍體育種是植物育種的一種途徑之一,它不僅可以對性狀進行改良,還可以提高植物體內(nèi)各種有效成分的含量。利用倍性鑒定,準確地辨認多倍體并將其挑選出來,也是多倍體育種中的重要環(huán)節(jié)一環(huán)。另外,倍性鑒定也可用于分析細胞分裂活動等生理和遺傳研究。倍性鑒定特別是苗期倍性鑒定,不僅可以減少育種工作量,而且可以減少土地和資金的投入。國內(nèi)外關于各種鑒定方法報道不少,但較分散。本文綜述了各種倍性鑒定方法并對其優(yōu)缺點進行了評選。不同倍性植株在細胞學和形態(tài)解剖學上具有明顯差異,目前主要有兩大類型直接鑒定法和間接鑒定法。華南地區(qū)配備365nm光源倍性分析儀CyFlow Analyser倍性分析儀配備365nm光源,高效激發(fā)DAPI染料,避免RNA的影響和次生代謝物的影響。
CyFlow Analyser倍性分析儀的特點:1、方便快捷(倍體和基因組大小分析時間小于1分鐘、無需對中期染色體進行制備和染色、取代了耗時的顯微鏡鏡檢、Sysmex-Partec簡單快捷的樣品制備過程、可選擇96型孔板或120離心管的自動進樣系統(tǒng))2、多功能性(任何植物樣品均可被檢測分析:葉、秧苗、根莖、花、種子等)3、高精確性(絕大多數(shù)動植物倍體檢測精度可以達到±1條染色體)4、靈活便捷(結(jié)構緊湊,便于移動,適用于多種工作場所)5、獨特的儀器設計6、內(nèi)置15TFT液晶顯示屏7、提供兩種不同的波8、直觀強大的FCM軟件系統(tǒng)。
擬南芥是一種生長迅速的小型植物,可進行范圍廣的核內(nèi)復制,在不發(fā)生有絲分裂的情況下進行基因組擴增。該物種含有有花植物中較小的基因組,約157Mb,C值為0.321pg。這些特征使得擬南芥特別適合作為測定基因組大小的內(nèi)參,并且可以用于儀器線性度的質(zhì)量控制。用于流式實驗的植物樣品通常只需少量植物組織。使用標準手術刀片將植物組織切碎并浸泡于緩沖液中,過濾含植物細胞核的勻漿以去除大的碎片,用DNA特異性熒光染料進行標記,然后在流式細胞儀上采集數(shù)據(jù),根據(jù)每個細胞核的熒光強度來計算DNA含量。通過與已知標準品比較,可以用熒光強度換算出DNA含量的相對值。擬南芥通常用作內(nèi)參,只需將內(nèi)參樣品和未知樣品的細胞核同時進行分離、染色和分析即可。流式細胞術檢測對象:單細胞懸液或生物顆粒。
CyFiow Analyser倍性分析儀光源光路:可配備365nmUV LED紫外和/或 Nd-YAG 532nm綠色光源(30mW)。- 1或2個光電倍增管(PMT)光學通道。- 590nm長通濾片用于PI檢測通道,435nm長通濾片用于DAPI及SSC檢測通道。應用:1、支持樣本快速處理和檢測;2、基于PI和DAPI的熒光DNA分析;3、提供樣本快速處理試劑盒,用于 DAPI 和PI 標記的倍體分析;4、配套的儀器質(zhì)控試劑;5、所有樣本的細胞核染色(包括 ,葉、根、愈合組織、懸浮組織、雜交細胞等);6、可用于動物組織、培養(yǎng)細胞、懸浮細胞的倍體分析。免疫表型是流式細胞術中較常用的應用。它利用流式細胞術的獨特能力來同時分析混合細胞群的多個參數(shù)。國產(chǎn)CyFlow系列倍性分析儀性能參數(shù)
流式細胞術的檢測特點:單細胞水平分析。進口倍性分析儀
倍性分析儀的優(yōu)勢:1、檢測范圍廣,可檢測顆粒范圍為50nm-200um;2、型號選擇多,更多元化的選擇,可根據(jù)用戶需求量身定制3、激光干擾少,空間立體激發(fā),多個光源互不干擾4、測試結(jié)果準,參數(shù)更優(yōu),有較高效的532nm的激光器適用于PI染料,高靈敏度的激光光源,檢測CV值≤1% (CV值為DNA檢測結(jié)果評價的重要參數(shù))5、軟件操作簡,上手容易,操作簡單6、試劑種類全,有可滿足多種倍性檢測的試劑盒,結(jié)果穩(wěn)定,操作方便省時7、后期維護省,注射泵,無需管路更換進口倍性分析儀
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