PCR常使用目標序列的拷貝數(shù)或某一給定樣品中轉(zhuǎn)基因的百分比來體現(xiàn)方法靈敏度。由于qPCR和dPCR實驗過程所用試劑的兼容性較好，在使用dPCR進行轉(zhuǎn)基因檢測時，通常直接參照qPCR的方法。使用不同技術對相同樣品檢測時，兩種方法的靈敏度是否具有可比性成為關注的問題。Burns等21]使用Fluidigm公司的12.765（12板，每板765個微單元）芯片數(shù)字PCR分析儀測定標準物質(zhì)ERM-AD413檢測轉(zhuǎn)基因玉米MON810。該小組應用dPCR技術評估在qPCR定義下的靈敏度數(shù)值，在拷貝數(shù)200-700之間，dPCR與qPCR的測量結(jié)果具有一致性。但與qPCR的靈敏度相比，dPCR在低于拷貝數(shù)200時有被低估的風險，在高于拷貝數(shù)1000時有被高估的風險。dPCR在同一陣列上同時測量轉(zhuǎn)基因和內(nèi)源性靶點時，需要稀釋內(nèi)源性靶點和轉(zhuǎn)基因靶點在合理拷貝數(shù)范圍內(nèi)以保證dPCR測量結(jié)果的準確性。數(shù)字以靈敏度和準確度測量突變的變異程度、檢測稀有的DNA靶拷貝以及解析拷貝數(shù)變?異狀態(tài)。法國一體化數(shù)字PCR
在熒光定量PCR應用已經(jīng)如此的情況下，緣何數(shù)字PCR仍然能橫空出世？中心點在于熒光定量PCR盡管為科研和臨床市場應用提供了非常重要的檢測工具支撐，但仍然有尚未被滿足的客戶需求。熒光定量PCR需要基于標準品制作的標準曲線進行定量，屬于相對定量，操作較為復雜，且終端用戶對其結(jié)果的重復性、靈敏性、精密度、分辨率、對PCR反應抑制劑的耐受性等方面有更高的期待。數(shù)字PCR通過將反應體系進行有限稀釋至成千上萬的反應單元中，實現(xiàn)了核酸靶標的單分子擴增。PCR擴增結(jié)束后，基于終點法對陽性液滴數(shù)和總液滴數(shù)進行計數(shù)，結(jié)合泊松分布原理，從而實現(xiàn)對起始樣本的定量。其極大地簡化了操作步驟，并且大幅提高了檢測性能，尤其在低豐度或較低豐度的核酸檢測上（靈敏性可達0.001-0.0001%），其優(yōu)異的性能得到了終端用戶的認可。廣東進口數(shù)字PCR價格數(shù)字PCR技術min檢測下限可到2copies/ml，比qPCR靈敏度提升了100倍。
ThermoFisherQuantStudio3D是另一個經(jīng)典的芯片式數(shù)字PCR平臺，其基本的檢測流程是：將反應液加入到涂布器中，通過涂布器將反應液均勻涂布在有20000個微孔的芯片上，將芯片放在PCR儀上擴增，將芯片放入讀取儀中采取拍照的方式讀取熒光信號。操作較為復雜，整個過程在封閉的芯片中進行，污染的風險較低。STILLANaica是一個較新的數(shù)字PCR平臺，基本的檢測流程是：將反應液加入芯片，將芯片放入微滴生成擴增系統(tǒng)，生成30,000個微滴單層平鋪于芯片中，PCR擴增在芯片上完成。然后將擴增后的芯片轉(zhuǎn)移至微滴閱讀分析系統(tǒng)，采取拍照的方式讀取熒光信號。由于整個過程在封閉的芯片中進行，污染的風險較低。
盡管我國dPCR行業(yè)起步較晚，但在國家鼓勵醫(yī)療器械創(chuàng)新的大背景下，以及精細醫(yī)療和個性化用藥等需求推動下，dPCR成為了近年廣受關注的熱點領域，保持著穩(wěn)定快速的增長。近年來國內(nèi)誕生了如領航基因、新羿生物、銳訊生物、科維思、永諾生物、泛生子、思納福醫(yī)療等企業(yè)，開始與國外企業(yè)同臺競技。從市場角度看，北美依然是dPCR比較大的主導市場，其次是亞洲和歐洲。由于性疾病和的高發(fā)病率以及患者對這些疾病的早期診斷意識的提高，亞太地區(qū)將成為dPCR增長速度快的市場。伯樂、凱杰、賽默飛、羅氏、因美納等公司紛紛通過收購、投資等方式布局dPCR業(yè)務。楊雁峰博士堅信數(shù)字PCR是可以應用于無創(chuàng)產(chǎn)前篩查的理想技術之一，這也是他2016年創(chuàng)立塔歌生物的初衷。
dPCR在使用過程中需要特別注意體積誤差造成的結(jié)果偏差。體積誤差對于測量拷貝數(shù)濃度會產(chǎn)生偏差。目前dPCR中體積優(yōu)化方法以光學顯微鏡觀測為主。分散體積的差異會增加拷貝數(shù)結(jié)果的不確定性，Emslie等使用光學顯微鏡縱向拍照比較圖片邊緣的微小差異，考察了數(shù)字PCR系統(tǒng)中每個微孔內(nèi)和孔與孔間的體積差異對實驗結(jié)果的影響程度。Corbisier等使用微滴數(shù)字PCR對6種不同質(zhì)量分數(shù)棉籽粉質(zhì)粒DNA標準物質(zhì)[ERM-AD623a-f，濃度范圍（10~10）copies/ul]進行分析，優(yōu)化了液滴體積得到相應校正因子，并使用該校正因子發(fā)現(xiàn)并校準了運行軟件中液滴體積不變的假設而引起的數(shù)據(jù)偏離，數(shù)據(jù)結(jié)果的一致性有明顯提高。通過不同cluster的位置進行突變位點的判斷時存在誤判的現(xiàn)象。廣州全自動多重數(shù)字PCR系統(tǒng)
數(shù)字PCR通常采用大量分區(qū)。法國一體化數(shù)字PCR
在定量PCR時，我們常常糾結(jié)一個問題，究竟是相對定量還是***定量呢？如今，你無需糾結(jié)了，因為數(shù)字PCR（digitalPCR）來了。盡管這兩種技術有些類似，都是估計起始樣品中的核酸量，但它們有一個重要的區(qū)別。定量PCR是依靠標準曲線或參照基因來測定核酸量，而數(shù)字PCR則讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個數(shù)，是對起始樣品的***定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應用領域：拷貝數(shù)變異、突變檢測、基因相對表達研究（如等位基因不平衡表達）、二代測序結(jié)果驗證、miRNA表達分析、單細胞基因表達分析等。法國一體化數(shù)字PCR
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