PCR常使用目標(biāo)序列的拷貝數(shù)或某一給定樣品中轉(zhuǎn)基因的百分比來體現(xiàn)方法靈敏度。由于qPCR和dPCR實(shí)驗(yàn)過程所用試劑的兼容性較好，在使用dPCR進(jìn)行轉(zhuǎn)基因檢測(cè)時(shí)，通常直接參照qPCR的方法。使用不同技術(shù)對(duì)相同樣品檢測(cè)時(shí)，兩種方法的靈敏度是否具有可比性成為關(guān)注的問題。Burns等21]使用Fluidigm公司的12.765（12板，每板765個(gè)微單元）芯片數(shù)字PCR分析儀測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)ERM-AD413檢測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米MON810。該小組應(yīng)用dPCR技術(shù)評(píng)估在qPCR定義下的靈敏度數(shù)值，在拷貝數(shù)200-700之間，dPCR與qPCR的測(cè)量結(jié)果具有一致性。但與qPCR的靈敏度相比，dPCR在低于拷貝數(shù)200時(shí)有被低估的風(fēng)險(xiǎn)，在高于拷貝數(shù)1000時(shí)有被高估的風(fēng)險(xiǎn)。dPCR在同一陣列上同時(shí)測(cè)量轉(zhuǎn)基因和內(nèi)源性靶點(diǎn)時(shí)，需要稀釋內(nèi)源性靶點(diǎn)和轉(zhuǎn)基因靶點(diǎn)在合理拷貝數(shù)范圍內(nèi)以保證dPCR測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性。數(shù)字PCR的兩大應(yīng)用場(chǎng)景在于基因檢測(cè)、無創(chuàng)出生缺陷篩查。廣州數(shù)字PCR市場(chǎng)前景

數(shù)字PCR技術(shù)流分類目前，dPCR的基本方法都已經(jīng)建立，根據(jù)反應(yīng)單元的不同形式，主要可分為微板式、微腔式和和微滴式三大類系統(tǒng)。微液滴制備的方法，目前主流的有四種：1）芯片微孔物理分割法，俗稱物理分隔法，公司有Fluidgm，Qiagen，Roche，ThermoFisher，;2）液滴分割法，俗稱油包水，代替公司有Bio-Rad;3）雜交式芯片液滴法，公司有Stilla;4）注射振動(dòng)制滴法。PS：芯片式物理分割技術(shù)所有已經(jīng)過期，目前有不少公司在這個(gè)技術(shù)的基礎(chǔ)上進(jìn)行開發(fā)，例如羅氏。蘇州一體化數(shù)字PCR分析應(yīng)用dPCR的結(jié)果統(tǒng)計(jì)方式有2種，一種是采用標(biāo)記多種顏色，另一種采用概率統(tǒng)計(jì)的數(shù)據(jù)處理方法。

由于現(xiàn)有的商業(yè)化數(shù)字PCR設(shè)備在物理上只設(shè)置了2個(gè)檢測(cè)通道，所以存在一個(gè)明顯的短板：不能同時(shí)進(jìn)行多個(gè)位點(diǎn)的檢測(cè)。在樣品多位點(diǎn)的檢測(cè)中，就需要更多的起始樣品，但臨床上組織的樣品非常有限。相比之下熒光定量PCR儀上就很容易實(shí)現(xiàn)多重檢測(cè)。為了考察利用數(shù)字PCR實(shí)現(xiàn)多重檢測(cè)的可能性，英國(guó)TheInstituteofCancerResearch的研究人員以非小細(xì)胞肺相關(guān)的KRAS基因?yàn)闄z測(cè)對(duì)象，在Bio-Rad的數(shù)字PCR系統(tǒng)上通過3個(gè)三重ddPCR檢測(cè)體系來實(shí)現(xiàn)9個(gè)KRAS突變位點(diǎn)的檢測(cè)。

在PCR進(jìn)行的過程中，首先是引物和探針分別結(jié)合，然后開始擴(kuò)增。如果一個(gè)微滴當(dāng)中有目標(biāo)基因的片段，Taqman探針就會(huì)被酶切碎，熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)分離。在后面的檢測(cè)過程中，熒光基團(tuán)被激發(fā)光路激發(fā)之后就會(huì)發(fā)熒光。如果沒有，Taqman探針就不會(huì)被切碎，在后面的檢測(cè)過程中，熒光基團(tuán)吸收到激發(fā)光的能量，就會(huì)被淬滅基團(tuán)給淬滅，那么儀器就檢測(cè)不到這個(gè)微滴的信號(hào)。檢測(cè)的過程中，并不是說一個(gè)樣本中檢測(cè)到了幾個(gè)亮點(diǎn)，這個(gè)反應(yīng)當(dāng)中就有幾個(gè)目標(biāo)基因的拷貝。因?yàn)槟繕?biāo)基因的片段，在微滴當(dāng)中的分布，是符合泊松分布的（也就是說進(jìn)不進(jìn)的概率相等，并且相互獨(dú)立）。所以，一個(gè)發(fā)光的微滴中，可能有一個(gè)或者三個(gè)四個(gè)，甚至更多個(gè)目標(biāo)基因的拷貝。因此，發(fā)光的微滴數(shù)與原始的基因拷貝數(shù)并不是一對(duì)一的對(duì)應(yīng)關(guān)系。全自動(dòng)數(shù)字PCR平臺(tái)，讓數(shù)字PCR真正邁入新時(shí)代，助推數(shù)字PCR普及應(yīng)用。

根據(jù)泊松分布的定義和適用條件可知，如果我們?cè)O(shè)微液滴總數(shù)為N，投入的靶序列拷貝數(shù)為M，那么“每個(gè)微液滴中的靶序列拷貝數(shù)”的概率分布是近似滿足泊松分布的。理解之前，首先要明確一點(diǎn)，在檢測(cè)的過程中，并不是說一個(gè)樣本中檢測(cè)到了幾個(gè)亮點(diǎn)，這個(gè)反應(yīng)當(dāng)中就有幾個(gè)目標(biāo)基因的拷貝。因?yàn)槟繕?biāo)基因的片段，在微滴當(dāng)中的分布，是符合泊松分布的（也就是說進(jìn)不進(jìn)的概率相等，并且相互獨(dú)立）。所以，一個(gè)發(fā)光的微滴中，可能有一個(gè)或者三個(gè)四個(gè)，甚至更多個(gè)目標(biāo)基因的拷貝。因此，發(fā)光的微滴數(shù)與原始的基因拷貝數(shù)并不是一對(duì)一的對(duì)應(yīng)關(guān)系。在數(shù)字PCR賽道，塔歌生物將加速胎兒染色體非整倍體無創(chuàng)產(chǎn)前篩查注冊(cè)證的申報(bào)。珠三角賽默飛數(shù)字PCR解決方案

拷貝數(shù)變異、突變檢測(cè)、基因相對(duì)表達(dá)研究、二代測(cè)序結(jié)果驗(yàn)證、miRNA表達(dá)分析、單細(xì)胞基因表達(dá)分析等。廣州數(shù)字PCR市場(chǎng)前景

PCR已成為分子診斷領(lǐng)域重要的技術(shù)手段之一，占據(jù)分子診斷市場(chǎng)的半壁江山。數(shù)字PCR是一代PCR技術(shù)，也是當(dāng)前靈敏度和定量精度比較高的分子檢測(cè)技術(shù)。但數(shù)字PCR使用成本仍然相對(duì)較高，檢測(cè)靶點(diǎn)數(shù)少（一般≤6靶點(diǎn)/反應(yīng)），阻礙了其在臨床中的大規(guī)模應(yīng)用，提高數(shù)字PCR的多重檢測(cè)能力迫在眉睫?；跓晒馔ǖ罃?shù)的增加和基于探針濃度梯度增加，均可以在一定程度上提高數(shù)字PCR檢測(cè)重?cái)?shù)，然而只能達(dá)到"線性"增加的目的?；谔结槤舛忍荻鹊亩嘀貦z測(cè)技術(shù)雖然光'f明顯增加多重能力，但由于無法避免交叉反應(yīng)現(xiàn)象，不能確保獲得位點(diǎn)特異性的分簇，因此穩(wěn)定性不足、靈敏度較差，難以滿足臨床級(jí)別的數(shù)據(jù)要求。而基于創(chuàng)新的且數(shù)字PCR獨(dú)特適用的熒光編碼技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)“指數(shù)”級(jí)的多重檢測(cè)，顛覆性的提高數(shù)字PCR檢測(cè)重?cái)?shù)，覆蓋臨床應(yīng)用多場(chǎng)景需求。廣州數(shù)字PCR市場(chǎng)前景

廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司是一家從事數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀研發(fā)、生產(chǎn)、銷售及售后的服務(wù)型企業(yè)。公司坐落在廣州市黃埔區(qū)銳豐三街4號(hào)617房，成立于2015-04-17。公司通過創(chuàng)新型可持續(xù)發(fā)展為重心理念，以客戶滿意為重要標(biāo)準(zhǔn)。公司主要經(jīng)營(yíng)數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀等產(chǎn)品，產(chǎn)品質(zhì)量可靠，均通過精細(xì)化學(xué)品行業(yè)檢測(cè)，嚴(yán)格按照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。目前產(chǎn)品已經(jīng)應(yīng)用與全國(guó)30多個(gè)省、市、自治區(qū)。廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司研發(fā)團(tuán)隊(duì)不斷緊跟數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀行業(yè)發(fā)展趨勢(shì)，研發(fā)與改進(jìn)新的產(chǎn)品，從而保證公司在新技術(shù)研發(fā)方面不斷提升，確保公司產(chǎn)品符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和要求。廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司注重以人為本、團(tuán)隊(duì)合作的企業(yè)文化，通過保證數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀產(chǎn)品質(zhì)量合格，以誠(chéng)信經(jīng)營(yíng)、用戶至上、價(jià)格合理來服務(wù)客戶。建立一切以客戶需求為前提的工作目標(biāo)，真誠(chéng)歡迎新老客戶前來洽談業(yè)務(wù)。