對(duì)于銅綠假單胞菌的檢測(cè),前處理直接混勻制成待測(cè)樣品或者采用濾膜過(guò)濾法進(jìn)行處理。直接混勻測(cè)試揭開(kāi)檢測(cè)板上層膜,在檢測(cè)板紙片上加1毫升直接混勻制成的待測(cè)樣品,迅速貼好上層膜井水平晃動(dòng)檢測(cè)板,靜置2分鐘.濾膜過(guò)濾法處理揭開(kāi)檢測(cè)板上層膜,在檢測(cè)板紙片,上加1毫升無(wú)菌水濕潤(rùn)后,迅速用無(wú)菌鑷子將過(guò)濾水樣的濾膜移放在檢測(cè)板紙片上(濾膜截留細(xì)菌面向上),濾膜與紙片之間不要夾留著氣泡,貼好上層膜。前處理25g(或25毫升)樣品放入裝有225毫升生理鹽水的均質(zhì)袋中,以8000r/分鐘均質(zhì)1~2分鐘,制成1:10樣品均液,根據(jù)樣品污染程度及檢驗(yàn)需要,可進(jìn)一步制成10倍遞增的樣品稀釋液。如果大腸桿菌離開(kāi)腸道或者發(fā)生變異,會(huì)導(dǎo)致疾病,尤其是對(duì)孩子及老人。日本裂殖酵母
銅綠假單胞菌經(jīng)過(guò)多重檢驗(yàn)(菌落形態(tài)、鏡檢及生化試驗(yàn)),保證菌種的純度及活性,防碎標(biāo)準(zhǔn)包裝,避免運(yùn)輸過(guò)程中雜菌污染。屬于標(biāo)準(zhǔn)菌種、標(biāo)準(zhǔn)菌株、質(zhì)控菌種、質(zhì)控菌株,用于實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控、檢測(cè)。規(guī)格型號(hào)通常為封閉凍干粉、斜面種、菌液。保質(zhì)期一般為8-10年,應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時(shí)轉(zhuǎn)接。菌種傳代場(chǎng)所為萬(wàn)級(jí)潔凈室內(nèi)100級(jí)進(jìn)口生物安全柜。每傳代一次均會(huì)做菌株純度及生化試驗(yàn),保證菌種的活性與純度。購(gòu)買(mǎi)銅綠假單胞菌后應(yīng)及時(shí)使用,銅綠假單胞菌菌株適用于科研、教學(xué)及微生物檢測(cè)質(zhì)量控制,禁止用于人體。銅綠假單胞菌菌種活化前,如要長(zhǎng)期保藏,請(qǐng)將安瓿管保存在4-10度的環(huán)境下。甲型副傷寒沙門(mén)氏菌銅綠假單胞菌菌體的一端有單鞭毛。
目前有很多保藏方法可以適用于真類(lèi)菌的保藏,但大體來(lái)可以分為讓真類(lèi)菌連續(xù)生長(zhǎng)的保藏工藝。這一類(lèi)的保藏工藝的特點(diǎn)是不斷的將菌株移植在新鮮的培養(yǎng)基上,并在合適的條件下生長(zhǎng),隨后置于一個(gè)低溫的環(huán)境中,一般是4-10攝氏度,這類(lèi)保藏工藝主要包括斜面移植、油管保藏和蒸餾水保藏法等。二是利用干燥環(huán)境保藏菌株的休眠體,如分生孢子、厚垣孢子等,干燥選用的基質(zhì)可以是空氣、硅膠、土壤、沙子等。三是利用抑制菌株代謝活性的辦法達(dá)到長(zhǎng)期保藏,一般是通過(guò)脫水降低細(xì)胞內(nèi)水分或低溫冷凍,在此過(guò)程中關(guān)鍵環(huán)節(jié)是避免和降低冰晶對(duì)細(xì)胞造成的傷害,這類(lèi)保藏工藝包括冷凍干燥法、低溫凍結(jié)和液氮保藏法等。
處理用枯草芽孢桿菌處理過(guò)的土壤對(duì)土壤脲酶均表現(xiàn)出刺激效應(yīng)。其中較高質(zhì)量分?jǐn)?shù)處理(3200mg/kg干土)在第28天脲酶活性上升到較高,刺激率達(dá)到101.07%??莶菅挎邨U菌對(duì)脲酶刺激的機(jī)理,可能是由于微生物農(nóng)藥的加人為微生物的生長(zhǎng)提供了碳源和營(yíng)養(yǎng),從而使產(chǎn)生該種酶的微生物數(shù)量增長(zhǎng),活性增強(qiáng),因而土壤中脲酶的活性也相應(yīng)增強(qiáng)??莶菅挎邨U菌是我國(guó)允許使用的飼料微生物菌種,因其無(wú)毒、無(wú)害,經(jīng)常被制成微生物添加劑,用于改善動(dòng)物腸道功能、促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)和預(yù)防疾病。枯草芽孢桿菌能使水體中氨基氮(NH3-N)、亞硝基氮(NO2-N)和硫化物濃度降低,從而有效地改善水質(zhì)。枯草芽孢桿菌無(wú)莢膜,周生鞭毛,能運(yùn)動(dòng)。
葡萄球菌屬因其聚成葡萄串一樣而得名。是常見(jiàn)的化膿性球菌。醫(yī)務(wù)人員帶菌率高達(dá)70%以上。而且可能是耐藥性菌株,可成為院內(nèi)傳染的重要傳染源。葡萄球菌呈球形或橢圓形。直徑約0.5--1μm。經(jīng)常以葡萄串狀排列,有時(shí)可能散在、成雙、短鏈狀存在。沒(méi)有鞭毛、沒(méi)有芽孢,體外培養(yǎng)一般不形成莢膜,在體內(nèi)卻可形成莢膜。革蘭染色呈陽(yáng)性。衰老、死亡、被吞噬細(xì)胞吞噬、青霉素等藥物作用下,菌體可革蘭染色陰性。葡萄球菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高,普通培養(yǎng)基生長(zhǎng)良好。需氧或兼性厭氧。在18--40℃均可生長(zhǎng)。耐鹽性強(qiáng)。在含有10%氯化鈉培養(yǎng)基中能生長(zhǎng),可用高鹽培養(yǎng)基分離菌種。普通瓊脂平板上形成圓形,表面光滑濕潤(rùn),不透明菌落。典型菌株產(chǎn)生脂溶性的金黃色的色素而使菌落呈金黃色。在血瓊脂平板上,因金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生溶素,在菌落周?chē)纬擅黠@的透明溶血環(huán)。銅綠假單胞菌菌體的一端有單鞭毛,無(wú)芽胞,無(wú)莢膜。Hyphomonas johnsonii菌株
銅綠假單胞菌較適生長(zhǎng)溫度為25~30攝氏度。日本裂殖酵母
銅綠假單胞桿菌離心的目的是兩個(gè),去除DMSO,去除死細(xì)胞,這個(gè)是標(biāo)準(zhǔn)流程,但對(duì)一般人來(lái)說(shuō),把握不好離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間,轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少,細(xì)胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過(guò)了活細(xì)胞會(huì)受壓過(guò)大,死亡。此外在操作過(guò)程中容易污染,所以不推薦。另一種說(shuō)法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。關(guān)于細(xì)胞貼壁少的問(wèn)題,凍存細(xì)胞解凍時(shí)1毫升細(xì)胞液要加10毫升-15m培養(yǎng)液,而培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問(wèn)題,試驗(yàn)中復(fù)蘇1管細(xì)胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過(guò)多,細(xì)胞濃度過(guò)低,不利于細(xì)胞的貼壁。日本裂殖酵母
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