銅綠假單胞菌含有O抗原(菌體抗原)以及H抗原(鞭毛抗原)。O抗原包含兩種成分:一種是其外膜蛋白,為保護性抗原;另一種是脂多糖,有特異性。O抗原可用以分型。銅綠假單胞菌的標本采集,分別來自不同影響部位的各種標本,包括血液、尿液、痰標本、膿汁、穿刺液等。還包括來自醫(yī)院環(huán)境中的各種標本如水、空氣、物體表面采樣等。通過染色鏡檢,銅綠假單胞菌為革蘭陰性桿菌,菌體大小(1.5~5.0)um×寬(0.5~1)um,細長且長短不一,有時呈球桿狀或線狀,成對或短鏈狀排列。菌體的一端有單鞭毛,無芽胞,無莢膜。銅綠假單胞菌在普通瓊脂培養(yǎng)基上生長18~24h可以見到扁平、濕潤的菌落。哈爾濱銅綠假單胞菌甘油菌
對于銅綠假單胞菌的檢測,要注意將綠假單胞菌檢測板上層膜不干膠標簽部分揭開,用無菌吸管吸取1毫升樣品稀釋液均勻滴加到紙片上,迅速貼好上層膜并水平晃動檢測板,靜置2分鐘左右,待樣品稀釋液完全被吸附在濾紙上。每個稀釋度接種兩個檢測板作為重復(fù)。將檢測板疊在一起,倒置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi),36攝氏度~1攝氏度,培養(yǎng)15~24h。銅綠假單胞菌又稱綠膿桿菌,是一種常見的條件致病菌,屬于非發(fā)酵革蘭氏陰性桿菌。若為實驗室長期保存菌種,因傳代頻繁可發(fā)生無色素變種。較低溫甘油保存法和半固體保存法兩種方法保存的菌種42攝氏度生長試驗陽性,氧化酶陽性,氧化葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣,動力陽性,明較液化試驗陽性。銅綠假單胞菌凍干粉規(guī)格銅綠假單胞菌生長對營養(yǎng)要求不高。
銅綠假單胞菌菌種在經(jīng)冷凍干燥并抽真空保存的,開啟后必須一次使用完,不能留菌粉下次再用,另外安瓿管里大部份是用牛奶做為保護劑,里邊菌體為少數(shù),復(fù)蘇時要全部菌懸液在新鮮培養(yǎng)基上,并在建議的溫度下培養(yǎng)。銅綠假單胞菌菌種操作應(yīng)在無菌條件下進行,轉(zhuǎn)種完畢,廢棄物應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理,以名污染周圍環(huán)境。銅綠假單胞菌復(fù)蘇后,應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時轉(zhuǎn)接傳代。銅綠假單胞菌產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定,創(chuàng)封閉管包裝,凍干后的菌株使用時添加配套的復(fù)蘇培養(yǎng)基后迅速而完全溶解。有著嚴格的質(zhì)檢程序,確保產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。銅綠假單胞菌產(chǎn)品普遍使用到食品、藥品、化妝品、水產(chǎn)品、化工等行業(yè),疾控中心、質(zhì)檢局、出入境、藥檢局等等,得到普遍好評。
銅綠假單胞菌的檢測方法成為纖維及其制品檢測銅綠假單胞菌的依據(jù)。檢測銅綠假單胞菌的操作步驟為,制備樣液;樣液在培養(yǎng)液中,置(35+2)攝氏度增菌培養(yǎng)18h~24h;挑取培養(yǎng)物,于十六烷三甲基溴化銨瓊脂平板.上畫線接種,置(35土2)攝氏度分離培養(yǎng)18h~24h;取可疑菌落涂片,做革蘭氏染色,鏡檢為革蘭氏陰性菌者應(yīng)進行生化試驗。被檢樣品經(jīng)增菌、分離培養(yǎng)后,證實為革蘭氏陰性桿菌,氧化酶及綠膿菌素試驗均為陽性者,即可報告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。如綠膿菌素試驗陰性而明膠液化、硝酸鹽還原產(chǎn)氣和42攝氏度生長試驗三者皆為陽性時,仍可報告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。銅綠假單胞菌主要產(chǎn)生青色的色素。
銅綠假單胞菌低溫保存法主要為簡單保存法,將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4攝氏度冰箱保存,保存時間不超過1~2個月,若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時間可達3~4個月。液氮較低溫保存法,將生長穩(wěn)定期的細胞懸浮在10%甘油或其他低冰點液體中,密封于安瓿管內(nèi),然后控制冷卻速度,使安瓿管溫度逐步下降至-35攝氏度時,即可置于-150~-196攝氏度的液氮罐中保存。大多數(shù)微生物如病毒、噬菌體、多種細菌、放線菌、酵母和原蟲、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物,都可用此法長期保存。銅綠假單胞菌在普通培養(yǎng)基上可以生存并能產(chǎn)生水溶性的色素。昆明CMCC(B)10104甘油菌
銅綠假單胞菌在普通培養(yǎng)基上有著綠膿素與帶熒光的水溶性熒光素等。哈爾濱銅綠假單胞菌甘油菌
檢測銅綠假單胞菌的注意事項,采用無菌操作進行檢測,做好器具、環(huán)境的滅菌工作。均勻取樣,應(yīng)保證所取樣品具有代表性。對樣品進行前處理時,嚴格遵守操作規(guī)程,保證樣品溶液的振蕩次數(shù),使其充分混勻。畫線分離培養(yǎng)是檢測銅綠假單胞菌的關(guān)鍵步驟。分離培養(yǎng)得到的單個菌落越多越利于提高檢出率。做革蘭氏染色時,涂片要薄厚均勻,菌體密度適宜。氧化酶試驗結(jié)果是判定銅綠假單胞菌是否存在的重要依據(jù)??蓪⑵渥鳛楹Y選試驗。如氧化酶試驗結(jié)果為陰性,則不必再進行后續(xù)試驗,即可判定為未檢出銅綠假單胞菌。1%二甲基對苯二胺試液放置時間延長,試液顏色會逐漸變深,所以要現(xiàn)用現(xiàn)配。挑取菌落時要用玻璃棒,也可用木質(zhì)或竹制小棒代替,盡量不要使用金屬絲或金屬棒,防止試驗出現(xiàn)假陽性。哈爾濱銅綠假單胞菌甘油菌
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