細胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時候轉(zhuǎn)染效率低下，還要考慮會不會存在試劑過期的情況。毛博當(dāng)年做轉(zhuǎn)染整整半年，百思不得其解。較后發(fā)現(xiàn)，原來是Lipofectamine2000過期了。換了之后，立馬成功。根據(jù)我的經(jīng)驗，盡量使用開封半年內(nèi)的，因為過了半年后，就算沒有過失效期，但是細胞毒性較大增加，而轉(zhuǎn)染效率卻較大下降。千萬不要為了省錢，影響實驗進度哈。2.未加血清轉(zhuǎn)染后未及時加入血清，會導(dǎo)致細胞大量死亡。一般要在轉(zhuǎn)染后的4-6小時換液且換為有血清的培養(yǎng)基。根據(jù)毛博的經(jīng)驗，其實也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴加血清。這個時候，較好不要換液，不要打擾細胞，讓它安安靜靜地休息。但是也不能過早加入血清在現(xiàn)生命可續(xù)研究中，大部分的工作是利用基因功能研究來探索生命過程。蘇州正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑推薦廠家

細胞轉(zhuǎn)染方法：1.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內(nèi)，形成DNA脂復(fù)合物，也能被表面帶負電的細胞膜吸附，再通過融合或細胞內(nèi)吞進入細胞。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中，是目前實驗室較方便的轉(zhuǎn)染方法之一，其轉(zhuǎn)染率較高，優(yōu)于磷酸鈣法。由于脂質(zhì)體對細胞有一定的毒性，所以轉(zhuǎn)染時間一般不超過24小時。常用細胞類型：cos-7、BHK、NIH3T3、Hela等2.電穿孔轉(zhuǎn)染法電流能夠可逆地擊穿細胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內(nèi)，這種方法就是電穿孔。當(dāng)遇到某些脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很低或幾乎無法轉(zhuǎn)入時建議用電穿孔法轉(zhuǎn)染。一般情況下，高電場強度會殺死50%-70%的細胞。現(xiàn)在針對細胞死亡開發(fā)出了一種電轉(zhuǎn)保護劑，可以較大的降低細胞的死亡率，同時提高電穿孔轉(zhuǎn)染效率杭州正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑報價加入混合液，將細胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時。

細胞轉(zhuǎn)染實驗的方法有哪些：1.脂質(zhì)體法。中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA，借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細胞膜內(nèi)。帶正電的陽離子脂質(zhì)體則不同，DNA并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中，而是帶負電的DNA自動結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上，形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物，從而吸附到帶負電的細胞膜表面，經(jīng)過內(nèi)吞被導(dǎo)入細胞。脂質(zhì)體法始于1987年，此法的出現(xiàn)使得轉(zhuǎn)染效率、轉(zhuǎn)染的穩(wěn)定性和可重復(fù)性較大提高。陽離子脂質(zhì)體細胞毒性相對較高，對不同的細胞可能會干擾細胞的代謝。2.非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染。較新的納米聚合物轉(zhuǎn)染試劑，如Entranster試劑，納米材料，細胞毒性小，轉(zhuǎn)染效率高，漸漸成為各大實驗室的選擇轉(zhuǎn)染試劑。

細胞轉(zhuǎn)染方法：1.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內(nèi)，形成DNA脂復(fù)合物，也能被表面帶負電的細胞膜吸附，再通過融合或細胞內(nèi)吞進入細胞。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中，是目前實驗室較方便的轉(zhuǎn)染方法之一，其轉(zhuǎn)染率較高，優(yōu)于磷酸鈣法。由于脂質(zhì)體對細胞有一定的毒性，所以轉(zhuǎn)染時間一般不超過24小時。常用細胞類型：cos-7、BHK、NIH3T3、Hela等2.電穿孔轉(zhuǎn)染法電流能夠可逆地擊穿細胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內(nèi)，這種方法就是電穿孔。當(dāng)遇到某些脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很低或幾乎無法轉(zhuǎn)入時建議用電穿孔法轉(zhuǎn)染。一般情況下，高電場強度會殺死50%-70%的細胞。現(xiàn)在針對細胞死亡開發(fā)出了一種電轉(zhuǎn)保護劑，可以較大的降低細胞的死亡率，同時提高電穿孔轉(zhuǎn)染效率。瞬時表達分析所需的人力和時間比穩(wěn)定表達少。

DNA細胞轉(zhuǎn)染步驟：1.提前現(xiàn)在細胞鋪板提前現(xiàn)在將細胞種植在24孔板中，以轉(zhuǎn)染時細胞密度在60％左右為宜。2.轉(zhuǎn)染過程⑴將0.8μg的DNA用25μl無血清稀釋液稀釋，充分混勻，制成DNA稀釋液。注意：無血清稀釋液建議采用OPTI-MEM、無血清DMEM或1640。⑵將2μlEntransterTM-H4000用25μl無血清稀釋液體稀釋，充分混勻，制成EntransterTM-H4000稀釋液。室溫靜置5分鐘。⑶將EntransterTM-H4000稀釋液分別加入到DNA稀釋液中，充分混勻（可用振蕩器振蕩或用加樣器吹吸10次以上），室溫靜置15分鐘。轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備完成。⑷將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入到含細胞和完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器上，輕柔混勻。注意：①對本試劑，采用含血清的全培養(yǎng)基有助于提升轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備①將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。無錫長沙細胞高效轉(zhuǎn)染試劑

在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法，則各有其特點。蘇州正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑推薦廠家

細胞電轉(zhuǎn)染實驗的幾點建議：1.電場強度要合適合適的電場強度對于電轉(zhuǎn)染實驗非常重要，電場強度不能過高，過高會增加細胞的死亡率；也不能過低，過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同細胞系具有不同的較佳場強值，實驗前應(yīng)測定所轉(zhuǎn)染細胞系的較佳電場強度。2.細胞狀態(tài)要好用于電轉(zhuǎn)的細胞一般選取處于對數(shù)生長期的細胞（15代以內(nèi)，傳代后2d）。因為處于對數(shù)生長期的細胞分裂旺盛，表面結(jié)構(gòu)致密比穩(wěn)定期的細胞差，電轉(zhuǎn)后，細胞膜的恢復(fù)能力強，而且處于有絲分裂期的細胞更容易接受外源DNA.蘇州正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑推薦廠家

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