利用高效安全無(wú)污染的生物制劑褐藻寡糖外源噴施黃瓜幼苗，將黃瓜幼 苗分為噴施組和未噴施組；再配制不同濃度（0.05%、0.1%、0.2%、0.3%、0.5%、） 的褐藻寡糖溶液噴施黃瓜幼苗。對(duì)黃瓜幼苗的生長(zhǎng)指標(biāo)，抗氧化酶活性及抗氧化 酶相關(guān)基因、WRKY 基因家族對(duì)褐藻寡糖應(yīng)答情況進(jìn)行測(cè)定。旨在探究不同濃 度褐藻寡糖對(duì)黃瓜的生長(zhǎng)、產(chǎn)量及品質(zhì)的影響，對(duì)褐藻寡糖對(duì)作物促進(jìn)作用的機(jī) 理進(jìn)行了初步研究，探索 WRKY 轉(zhuǎn)錄因子和褐藻寡糖在黃瓜生長(zhǎng)中的重要功能 及作用機(jī)制。褐藻寡糖促進(jìn)黃瓜幼苗生長(zhǎng)發(fā)育，主要表現(xiàn)為生物量（株高、莖粗）隨 著濃度的升高呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，葉片數(shù)增多。與未噴施組相比，噴施組生物量均有所 改善。對(duì)果期產(chǎn)量也有所提高。褐藻寡糖能夠改變草莓的呼吸過(guò)程，減少水分散失，降低外界對(duì)其造成的損傷。江西藥品褐藻寡糖

    溫度是影響植物生長(zhǎng)與分布的重要因素,而低溫更是地球上植物所面臨的主要生存問(wèn)題之一。研究發(fā)現(xiàn),植物在受到低溫脅迫后,過(guò)氧化氫酶系統(tǒng)首先受到破壞,造成氧自由基積累,細(xì)胞膜的通透性增加,細(xì)胞功能受損或者結(jié)構(gòu)被破壞,胞內(nèi)各種物質(zhì)都有不同程度外滲,葉綠素結(jié)構(gòu)被破壞,造成光合速率下降,光合作用作用減弱,嚴(yán)重者還會(huì)造成植物植株死亡。尤其是突發(fā)低溫凍害會(huì)使植物大面積凍壞導(dǎo)致突然死亡,常常給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來(lái)嚴(yán)重危害。因此,提高植物耐低溫能力,增強(qiáng)其抗凍性能對(duì)于延長(zhǎng)植物生長(zhǎng)時(shí)間,提高作物產(chǎn)量和品質(zhì)具有十分重要的意義。本研究采用褐藻寡糖溶液噴施到煙C葉片后進(jìn)行低溫脅迫,通過(guò)檢測(cè)相關(guān)指標(biāo),探討褐藻寡糖在低溫下對(duì)煙C植株的保護(hù)作用。山西褐藻寡糖復(fù)配褐藻寡糖與作物細(xì)胞作用后還可以在細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中，對(duì)細(xì)胞的生物活性進(jìn)行調(diào)節(jié)，增強(qiáng)植物抗病能力。

   褐藻寡糖對(duì)煙C葉片細(xì)胞膜低溫?fù)p傷程度的影響 丙二醛MDA含量和細(xì)胞電滲率大小是植物細(xì)胞膜損傷程度的重要指標(biāo) ,在低溫環(huán)境中 ,植物受到損傷后,細(xì)胞膜受到破壞, MDA和細(xì)胞電滲率都有不同程度升高 。經(jīng)過(guò)低溫脅迫6h后, 水處理(ADO 濃度為 0)組MDA含量和電滲率分別增加了4 .9倍和1 .5倍 ,隨著低溫脅迫時(shí)間延長(zhǎng),MDA和電滲率仍繼續(xù)增加, 這是因?yàn)殡m然煙C葉面覆蓋有水層, 能夠減小葉面溫差變化 ,減輕低溫對(duì)葉片傷害,但并不能完全阻止凍害發(fā)生, 因此煙C胞內(nèi)物質(zhì)不斷滲漏, 隨低溫處理時(shí)間延長(zhǎng)細(xì)胞損傷不斷加劇 。噴施寡糖后進(jìn)行低溫脅迫, 0 .05 %～ 0 .30 %ADO 處理組 MDA 和電滲率相比同一時(shí)刻水處理組都有不 同程度下降 ,說(shuō)明能夠減少細(xì)胞膜損傷, 降低胞內(nèi)物質(zhì) 外滲, 但經(jīng) 0 .10 %ADO 處理的煙C在 48 h 時(shí) MDA 和 細(xì)胞電滲率明顯升高。經(jīng)1 .00 %ADO 處理后進(jìn)行低溫脅迫 ,短時(shí)間內(nèi) MDA 含量和電滲率都劇烈增加, 隨著時(shí)間延長(zhǎng)不斷上升 ,說(shuō)明此濃度ADO加重了煙C葉片傷害 ,可能是由于較高濃度 ADO 溶液對(duì)煙C葉片形成較強(qiáng)滲透勢(shì), 造成細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)滲出 ,破壞了細(xì)胞正常 結(jié)構(gòu) ,在低溫下更加劇了煙C葉片損傷。

褐藻寡糖對(duì)SOD活性的影響SOD是植物體內(nèi)重要抗逆酶類(lèi)之一,能夠催化O-2·歧化反應(yīng),生成H2O2和O2,H2O2在POD、CAT和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶催化下轉(zhuǎn)化為水而去除,各種環(huán)境脅迫均能不同程度提高其活力,以增強(qiáng)植物去除O-2·能力。隨著低溫脅迫時(shí)間延長(zhǎng),水處理組細(xì)胞損傷加劇,SOD活力不斷上升,去除O-2·能力逐漸增強(qiáng)。噴施ADO后進(jìn)行低溫脅迫,0.05%,0.20%,0.30%ADO組SOD活力短時(shí)間內(nèi)迅速上升,說(shuō)明ADO對(duì)煙C的SOD活力產(chǎn)生了誘導(dǎo)作用,隨著時(shí)間變化O-2·產(chǎn)生和去除達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡,其SOD活力緩慢回落,以0.20%濃度ADO誘導(dǎo)效果比較好,SOD活力6h后誘導(dǎo)增強(qiáng)至空白對(duì)照的6倍,這對(duì)于提高煙C去除O-2·能力具有重要作用。0.10%濃度ADO在6～24h之內(nèi)沒(méi)有明顯改變SOD活力大小,維持在比較恒定水平,但48hSOD活力迅速上升,表明細(xì)胞內(nèi)O-2·含量增加,細(xì)胞受到了損傷破壞。高濃度1.00%ADO會(huì)破壞煙C葉片細(xì)胞結(jié)構(gòu),造成保內(nèi)物質(zhì)滲漏,加劇低溫下葉片損傷,超出了植株自身修復(fù)能力,產(chǎn)生了毒副作用,SOD活力逐漸降低。褐藻寡糖對(duì)植物的抗逆機(jī)制是通過(guò)誘導(dǎo)作用實(shí)現(xiàn)的。

   褐藻寡糖不僅可促進(jìn)植物的生長(zhǎng)，而且可提高植物對(duì)病害的抵抗力(Otterleietal.,1991)。王松(2003)利用沸水煮提的方法從海帶中得到褐藻酸鈉后，然后再經(jīng)過(guò)酸解和海螺酶降解得到聚合度為8-20的褐藻寡糖。將此褐藻寡糖應(yīng)用于抗花葉病毒的研究。發(fā)現(xiàn)在處理4d后抗性開(kāi)始提高，第6d時(shí)誘導(dǎo)抗病性達(dá)到高，并且以濃度為1000μg/ml的褐藻寡糖的誘導(dǎo)效果好。由于植物誘導(dǎo)抗逆領(lǐng)域關(guān)于褐藻寡糖的研究較少，因此開(kāi)發(fā)褐藻寡糖在植物誘導(dǎo)抗逆領(lǐng)域中的應(yīng)用，對(duì)于豐富褐藻寡糖的生物功能，開(kāi)發(fā)具有誘導(dǎo)抗逆活性的褐藻寡糖片段，對(duì)增強(qiáng)植物對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力，提高作物產(chǎn)量和品質(zhì)具有十分重要的意義。海洋活性寡糖的開(kāi)發(fā)與利用已成為利用海洋資源進(jìn)行高值化開(kāi)發(fā)的關(guān)鍵技術(shù)之一。對(duì)海洋的特殊環(huán)境適應(yīng)，使多種海洋生物具有獨(dú)特的多糖組成，利用多種手段對(duì)海洋多糖進(jìn)行降解，可以獲得種類(lèi)繁多，結(jié)構(gòu)各異的寡糖片段，由于其結(jié)構(gòu)和組成的差異，寡糖片段內(nèi)攜帶大量不同的信息，具有不同的功能活性。尤其是寡糖還可以作為誘抗劑能夠誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗逆性能，此外寡糖還能夠調(diào)節(jié)植物的生長(zhǎng)發(fā)育，因此海洋寡糖由于其獨(dú)特的組成和生物活性，已成為目前植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)與誘導(dǎo)抗逆研究的熱點(diǎn)。幼苗葉中葉綠素含童增高葉片凈光合速率、胞間濃度、氣孔導(dǎo)度和蒸騰速率增加。貴州褐藻寡糖纖維

褐藻寡糖能夠作為信號(hào)調(diào)節(jié)分子作用于植物，促進(jìn)植物的生長(zhǎng)，此研究為海洋活性寡糖的開(kāi)發(fā)開(kāi)辟了新的途徑。江西藥品褐藻寡糖

    褐藻寡糖噴施后黃瓜葉片CAT活性顯著提高（p＜）,。葉片POD活性被激發(fā),。果實(shí)CAT、POD、SOD、APX、GR活性均有所增高,。褐藻寡糖噴施后,黃瓜果實(shí)的抗氧化酶G-POD4基因表達(dá)水平上升,T2組是CK組的。噴施組SOD1基因表達(dá)水平均升高,其中T3組較CK組升高了。褐藻寡糖噴施后,分別檢測(cè)葉片和根中WRKY家族轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)變化。在黃瓜葉片中,第Ⅰ類(lèi)WRKY家族基因,WRKY2、WRKY4、WRKY23、WRKY39響應(yīng)褐藻寡糖表達(dá)上調(diào),第Ⅱ類(lèi)WRKY家族基因有15個(gè)基因響應(yīng)褐藻寡糖表達(dá)上調(diào),第Ⅲ類(lèi)WRKY家族基因基因中WRKY20、WRKY22、WRKY34、WRKY35在12h或24h出現(xiàn)表達(dá)上調(diào)的峰值。在黃瓜根中,第Ⅰ類(lèi)WRKY家族基因,WRKY2、WRKY23、WRKY39響應(yīng)褐藻寡糖表達(dá)上調(diào),第Ⅱ類(lèi)基因中有14個(gè)基因響應(yīng)褐藻寡糖表達(dá)上調(diào),第Ⅲ類(lèi)WRKY家族基因有6個(gè)基因響應(yīng)褐藻寡糖表達(dá)上調(diào)。 江西藥品褐藻寡糖

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