干粉培養(yǎng)基是一種經(jīng)常被使用的培養(yǎng)基,由于其易于儲存和攜帶,也經(jīng)常被用于實驗室的常規(guī)操作中。在使用干粉培養(yǎng)基時,人們經(jīng)常會問到一個問題,那就是干粉培養(yǎng)基可以重復(fù)使用嗎?首先,需要明確的是干粉培養(yǎng)基是指培養(yǎng)基由干燥制成的粉末,而并不是指培養(yǎng)基的原液。在細菌或其他微生物培養(yǎng)中,常用的是制成干粉之后需要通過加水或其他液體來重建成液態(tài)培養(yǎng)基的干粉培養(yǎng)基。因此,干粉培養(yǎng)基在制備時需要嚴(yán)格的操作和儲存規(guī)范,以保證其質(zhì)量和可重復(fù)使用性。而對于是否可以重復(fù)使用,需要依據(jù)實驗室的具體情況來考慮。如果干粉培養(yǎng)基使用過程中與周圍環(huán)境接觸,或者在制備時不符合儲存要求,那么干粉培養(yǎng)基的質(zhì)量就無法得到保障。這時候,即便再次...
在保存干粉培養(yǎng)基時還需要注意以下注意事項:盡可能縮減干粉培養(yǎng)基長時間不間斷存儲。因為長時間不使用,尤其是室溫下,會受到光照、濕度等自然環(huán)境的影響,溫濕度波動,會產(chǎn)生不穩(wěn)定的物理與化學(xué)效應(yīng),導(dǎo)致化學(xué)反應(yīng)發(fā)生,細菌及其他微生物生長。在保存時使用密封包裝進行,使其隔絕空氣和水分及其他微生物的進入。及時檢查干粉培養(yǎng)基的保質(zhì)期,避免超過保質(zhì)期的使用,影響實驗結(jié)果。準(zhǔn)確記錄干粉培養(yǎng)基的配方,標(biāo)簽上應(yīng)說明干粉培養(yǎng)基的名稱、生產(chǎn)日期、有效期,混合使用指導(dǎo),以方便日后使用。不同種類的干粉培養(yǎng)基具有多種營養(yǎng)成分和試劑配方,它們可用于不同類型的細胞和微生物培養(yǎng)。淀粉銨鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)基如果干粉培養(yǎng)基使用后得以正確儲存,...
各種生物具有不同的營養(yǎng)需求和生長特性。在選擇培養(yǎng)基時需要了解生物的基本信息,如生長率、形態(tài)、特化程度、基因型和病毒負荷等因素。對于不同種類的生物,需要選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,以使其能夠生長繁殖,并保持其原始形態(tài)和特性。在選擇培養(yǎng)基時,一般需要考慮的問題包括生物的飼養(yǎng)密度、培養(yǎng)時間、培養(yǎng)液中濃度的較佳濃度等。不同的實驗要求需要不同的培養(yǎng)基。例如,細胞培養(yǎng)和微生物培養(yǎng)需要不同種類的培養(yǎng)基。細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基一般需要提供較高的營養(yǎng)水平和多種生長因子,以支持細胞生長和繁殖;而微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)基則需要提供特定的有機物或無機鹽類,以保證微生物生長和繁殖的需要。此外,對于一些特定的細胞和微生物,還需要有特殊的培養(yǎng)技...
各種生物具有不同的營養(yǎng)需求和生長特性。在選擇培養(yǎng)基時需要了解生物的基本信息,如生長率、形態(tài)、特化程度、基因型和病毒負荷等因素。對于不同種類的生物,需要選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,以使其能夠生長繁殖,并保持其原始形態(tài)和特性。在選擇培養(yǎng)基時,一般需要考慮的問題包括生物的飼養(yǎng)密度、培養(yǎng)時間、培養(yǎng)液中濃度的較佳濃度等。不同的實驗要求需要不同的培養(yǎng)基。例如,細胞培養(yǎng)和微生物培養(yǎng)需要不同種類的培養(yǎng)基。細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基一般需要提供較高的營養(yǎng)水平和多種生長因子,以支持細胞生長和繁殖;而微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)基則需要提供特定的有機物或無機鹽類,以保證微生物生長和繁殖的需要。此外,對于一些特定的細胞和微生物,還需要有特殊的培養(yǎng)技...
在保存干粉培養(yǎng)基時還需要注意以下注意事項:盡可能縮減干粉培養(yǎng)基長時間不間斷存儲。因為長時間不使用,尤其是室溫下,會受到光照、濕度等自然環(huán)境的影響,溫濕度波動,會產(chǎn)生不穩(wěn)定的物理與化學(xué)效應(yīng),導(dǎo)致化學(xué)反應(yīng)發(fā)生,細菌及其他微生物生長。在保存時使用密封包裝進行,使其隔絕空氣和水分及其他微生物的進入。及時檢查干粉培養(yǎng)基的保質(zhì)期,避免超過保質(zhì)期的使用,影響實驗結(jié)果。準(zhǔn)確記錄干粉培養(yǎng)基的配方,標(biāo)簽上應(yīng)說明干粉培養(yǎng)基的名稱、生產(chǎn)日期、有效期,混合使用指導(dǎo),以方便日后使用。細菌在培養(yǎng)基中生長,與環(huán)境的影響和培養(yǎng)基的質(zhì)量有很大關(guān)系。KM8P培養(yǎng)基培養(yǎng)基不同的研究目的需要不同種類的培養(yǎng)基。例如,對于細胞的生化實驗,...
如何有效避免培養(yǎng)基污染?做好實驗操作規(guī)則:在實驗中制定好統(tǒng)一意識的操作規(guī)則至關(guān)重要。例如,制定有關(guān)實驗前和實驗中洗手、換鞋、穿戴實驗服的規(guī)定。還要保證操作的環(huán)境衛(wèi)生、實驗材料消毒等等。這樣可以降低實驗環(huán)境中的細菌來源,保證實驗材料的純度,同時也可以提高操作人員的自覺性和流程規(guī)范性,然后避免因人為原因而產(chǎn)生的污染。做好培養(yǎng)基制作:在培養(yǎng)基的制作過程中,一些常見的問題往往會導(dǎo)致污染,例如:不干凈的試管,不潔凈的機器設(shè)備,不正確的過濾操作和培養(yǎng)基儲存不當(dāng)?shù)?。為了避免這些問題,實驗室人員應(yīng)該采用高標(biāo)準(zhǔn)的實驗原料,在制作培養(yǎng)基前徹底清洗操作區(qū),并使用無菌試管及機器設(shè)備,千萬不要盲目省事不進行適當(dāng)?shù)膶嶒灉?zhǔn)...
預(yù)裝培養(yǎng)基的有效期是指由于技術(shù)和保質(zhì)問題而限定的使用時限。雖然預(yù)裝培養(yǎng)基在生產(chǎn)過程中基本上是消毒處理的,但是在使用過程中,仍然會存在著微生物和其他污染因素對培養(yǎng)基的影響。因此,即使保質(zhì)期未過,在使用之前也應(yīng)檢查其質(zhì)量,并確保其適用于實驗的要求。一般情況下,市售的預(yù)裝培養(yǎng)基的保質(zhì)期通常為6-12個月,但是這只是一個約定值,并不是通用值。在制造過程中,每個廠家都會考慮到不同的因素,如培養(yǎng)基成分、凝膠結(jié)構(gòu)、包裝方式和儲存條件等,保質(zhì)期因此也不一樣。因此,在購買預(yù)裝培養(yǎng)基時,我們應(yīng)該認真查看其保質(zhì)期,以便判斷其可行性。固體培養(yǎng)基則通過向液態(tài)培養(yǎng)基中加入凝膠劑來制成,以便在培養(yǎng)過程中提供可視化定位細胞的...
干粉培養(yǎng)基有著良好的經(jīng)濟性和生態(tài)環(huán)境特點。它可以使用更少的儀器和設(shè)備,且在瓶子空間小的情況下完成實驗,使其更加具有成本效益和生態(tài)環(huán)境特點。干粉培養(yǎng)基的配制不需要添加大量水,成品體積相對較小,因此比液體培養(yǎng)基更加穩(wěn)定,更容易存儲和運輸。這意味著可以在不同的地方使用相同的干粉培養(yǎng)基,從而確保實驗結(jié)果的可靠性和可重復(fù)性。干粉培養(yǎng)基有許多優(yōu)點,包括長期存儲穩(wěn)定、配制方便、可自由調(diào)整、成本更加經(jīng)濟、易于運輸?shù)取R虼?,在實驗室實驗的過程中,干粉培養(yǎng)基是一種非常可靠的選擇,值得研究者的信任和使用。培養(yǎng)基根據(jù)其組成、用途、酸堿度等不同因素分類,如營養(yǎng)瓊脂、LB培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基等。SP4培養(yǎng)基培養(yǎng)基 細菌...
天然培養(yǎng)基是指一類利用動物、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。例如。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基和LB培養(yǎng)基等。常用的天然有機營養(yǎng)物質(zhì)包括豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麩皮、牛奶、血清、椰子汁等。天然培養(yǎng)基成本較低,除在實驗室經(jīng)常使用外,也適于用來進行工業(yè)上大規(guī)模的微生物發(fā)酵生產(chǎn)。合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分,用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計而配制的培養(yǎng)基。例如。高氏1號培養(yǎng)基和查氏培養(yǎng)基等。合成培養(yǎng)基有一定的配方,配制合成培養(yǎng)基時重復(fù)性強,但與天然培養(yǎng)基相比其成本較高,微生物在其中生長速度較慢,一般適于在實驗室用來進行有關(guān)微生物營養(yǎng)需求、代謝、分類鑒定、生物量測定、菌種選育及遺傳分析等...
培養(yǎng)基在醫(yī)學(xué)上也有著普遍的應(yīng)用。病原微生物的病理生理學(xué)研究和臨床醫(yī)療常常需要使用培養(yǎng)基。例如,在病原體研究中,醫(yī)學(xué)實驗室常常要利用各種培養(yǎng)基技術(shù)來分離和鑒定病原體、判斷病原體對藥物的敏感性和抗藥性、以及預(yù)測疾病的發(fā)展和蔓延趨勢等。培養(yǎng)基還在食品、環(huán)境、制藥等領(lǐng)域中得到普遍應(yīng)用。食品中常常需要檢測生菌和檢驗產(chǎn)品的污染,環(huán)境中也需要快速監(jiān)測和診斷各種細菌和病毒等微生物因素。制藥行業(yè)則需要選擇較適合的培養(yǎng)基,以提高某種微生物的產(chǎn)量和制備質(zhì)量等。液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基和半固態(tài)培養(yǎng)基是常用的培養(yǎng)基種類。淀粉酪蛋白瓊脂(SCA)培養(yǎng)基干粉培養(yǎng)基在制備過程中必須加水。這是因為這種培養(yǎng)基是以干燥的粉末形式保存...
預(yù)裝培養(yǎng)基可以給實驗室?guī)碇T多好處。首先,它節(jié)省了實驗室技術(shù)人員的工作時間,從而提高實驗時間的利用效率。因為手工制備培養(yǎng)基需要耗費大量的時間和精力,這增加了實驗人員的負擔(dān)。通過使用預(yù)裝培養(yǎng)基,實驗室工作人員可以減少時間和勞動力的浪費,從而將更多的精力投入到實驗研究中。預(yù)裝培養(yǎng)基也可以提高實驗的安全性,因為在手工制備培養(yǎng)基時可能存在交叉病變的風(fēng)險。在實驗中,微生物之間的影響需要特別注意,如果不注意衛(wèi)生和消毒,則可能造成影響的擴散。使用預(yù)裝培養(yǎng)基可以降低這種影響和污染的風(fēng)險,從而提高實驗室的安全性。在制備培養(yǎng)基時,要注意保持一定的 pH 值。Littman瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基(syntheti...
培養(yǎng)基的pH值對微生物的生長和繁殖有著重要的影響,因此有時候培養(yǎng)基會按照pH值的范圍進行分類。中性培養(yǎng)基的pH值約為7.4,這種培養(yǎng)基適合于大多數(shù)微生物的生長繁殖,例如生長基(Nutrient Agar)就是一種中性培養(yǎng)基。酸性培養(yǎng)基的pH值在5.5到6.5之間,適用于某些菌株,如乳酸桿菌、酸性乳桿菌等。堿性培養(yǎng)基的pH值超過7.0,是為了培養(yǎng)生長于高pH環(huán)境的微生物,例如氫氧化物耐受乙酸桿菌等。預(yù)裝培養(yǎng)基還可以根據(jù)其使用目的進一步分類。細菌富集培養(yǎng)基:細菌富集培養(yǎng)基的目的是收集低濃度的微生物,通常在自然樣品中存在非常少量的微生物,因此必須富集到足夠的量,才能進行接下來的試驗。這種培養(yǎng)基通常添...
對于預(yù)裝培養(yǎng)基的儲存溫度應(yīng)該是在 4℃ 到 8℃ 的范圍內(nèi)。這是因為預(yù)裝培養(yǎng)基中含有大量的營養(yǎng)物質(zhì),這些物質(zhì)在常溫下很容易被微生物利用,從而失去營養(yǎng)價值。同時,4℃ 到 8℃ 的溫度可以有效地防止微生物的生長和繁殖,從而保證培養(yǎng)基的質(zhì)量和效果。對于預(yù)裝培養(yǎng)基的儲存條件應(yīng)該是“干燥、陰涼、避光和密封”。這是因為預(yù)裝培養(yǎng)基中含有一定比例的水分,如果儲存條件不當(dāng),就會導(dǎo)致微生物的生長和繁殖,從而影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此,我們需要選擇干燥、陰涼、避光和密封的地方進行存儲。在存儲時,應(yīng)該避免陽光直射、潮濕和高溫的環(huán)境,以免影響預(yù)裝培養(yǎng)基的質(zhì)量和穩(wěn)定性。同時,在儲存過程中,應(yīng)該注意避免磕碰和摔落,提高預(yù)...
要獲得微生物純培養(yǎng),必須避免雜菌污染,因此對所用器材及工作場所進行消毒與滅菌。對培養(yǎng)基而言,更是要進行嚴(yán)格的滅菌。對培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌,一般培養(yǎng)基用1.05kg/cm2,121.3℃條件下維持15-30min可達到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過程中,長時間高溫會使某些不耐熱物質(zhì)遭到破壞,如使糖類物質(zhì)形成氨基糖、焦糖,因此含糖培養(yǎng)基常在0.56kg/cm2,112.6℃15-30分鐘進行滅菌,某些對糖類要求較高的培養(yǎng)基,可先將糖進行過濾除菌或間歇滅菌,再與其他已滅菌的成分混合。微生物的供能方式會影響它對營養(yǎng)物質(zhì)的利用,因此不同微生物需要不同成分的培養(yǎng)基。3.5%氯化鈉三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基細胞培養(yǎng)...
天然培養(yǎng)基血清種類:目用于組織培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細胞也用人血清、馬血清等。選擇用牛血清培養(yǎng)細胞的原因:來源充足、制備技術(shù)成熟、經(jīng)過長時間的應(yīng)用考驗人們對其有比較深入的理解。牛血清對絕大多數(shù)哺乳動物細胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細胞時使用其他動物血清更合適。牛血清是細胞培養(yǎng)中用量比較大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,具有極為重要的功能。牛血清分為小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)比較高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞...
按培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分是否完全區(qū)分:1.基本培養(yǎng)基,亦稱“較低限度培養(yǎng)基”。只能滿足微生物野生型菌株生長需要的培養(yǎng)基,稱為基本培養(yǎng)基,是含有營養(yǎng)要求較低成分的合成培養(yǎng)基,常用“[-]”表示。這種培養(yǎng)基往往缺少某些生長因子,所以經(jīng)過誘變過的營養(yǎng)缺陷型菌株不能生長。2.完全培養(yǎng)基,基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加血清等物質(zhì)后,叫完全培養(yǎng)基,也叫(血清)細胞培養(yǎng)基。完全培養(yǎng)基可用來滿足微生物的各種營養(yǎng)缺陷型菌株的生長需要,常以“[+]”表示。3.補充培養(yǎng)基,凡是只能滿足相應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型生長需要的組合培養(yǎng)基,稱為補充培養(yǎng)基,它是在基本培養(yǎng)基中加入該菌株不能合成的營養(yǎng)因子而組成的。根據(jù)在基本培養(yǎng)基中加入的是A或B等營養(yǎng)因子代...
對于已經(jīng)購買來的預(yù)裝培養(yǎng)基,其內(nèi)部較初的狀態(tài)已經(jīng)是無菌的。因此,在通常情況下,我們不需要對新的預(yù)裝培養(yǎng)基進行任何形式的消毒處理。只需要在使用之前,檢查預(yù)裝培養(yǎng)基瓶口是否無菌,便可以直接使用。在使用過程中,應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格遵守實驗室操作規(guī)范,避免外界微生物的污染。對于需要自制的培養(yǎng)基而言,其情況也不盡相同。如果自制的培養(yǎng)基中包含天然成分,那么在自制之后就需要進行消毒處理,以殺死培養(yǎng)基中可能存在的微生物。在消毒處理之后,再將培養(yǎng)基裝入瓶中,就可以進行進一步的實驗使用。同時,在使用自制的預(yù)裝培養(yǎng)基時,需要嚴(yán)格控制其培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間、以及實驗環(huán)境等參數(shù),以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。無論是選擇何種種類的培養(yǎng)基,都...
長時間高溫還會引起磷酸鹽、碳酸鹽與某些陽離子(特別是鈣、鎂、鐵離子)結(jié)合形成難溶性復(fù)合物而產(chǎn)生沉淀,因此,在配制用于觀察和定量測定微生物生長狀況的合成培養(yǎng)基時,常需在培養(yǎng)基中加入少量螯合劑,避免培養(yǎng)基中產(chǎn)生沉淀,常用的螯合劑為乙二胺四乙酸(EDTA)。還可以將含鈣、鎂、鐵等離子的成分與磷酸鹽、碳酸鹽分別進行滅菌,然后再混合,避免形成沉淀;高壓蒸汽滅菌后,培養(yǎng)基pH會發(fā)生改變(一般使pH降低),可根據(jù)所培養(yǎng)微生物的要求,在培養(yǎng)基滅菌前后加以調(diào)整。常見的培養(yǎng)基有LB培養(yǎng)基,YPD培養(yǎng)基,M9培養(yǎng)基和DMEM培養(yǎng)基等。馬鈴薯浸出液瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)基分類有哪些?營養(yǎng)缺陷型:野生型菌株經(jīng)過人工誘變或者自然...
培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)濃度合適時微生物才能生長良好,營養(yǎng)物質(zhì)濃度過低時不能滿足微生物正常生長所需,濃度過高時則可能對微生物生長起抑制作用,例如高濃度糖類物質(zhì)、無機鹽、重金屬離子等不僅不能維持和促進微生物的生長,反而起到抑菌或殺菌作用。另外,培養(yǎng)基中各營養(yǎng)物質(zhì)之間的濃度配比也直接影響微生物的生長繁殖和(或)代謝產(chǎn)物的形成和積累,其中碳氮比(C/N)的影響較大。嚴(yán)格地講,碳氮比指培養(yǎng)基中碳元素與氮元素的物質(zhì)的量比值,有時也指培養(yǎng)基中還原糖與粗蛋白之比。例如,在利用微生物發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸的過程中,培養(yǎng)基碳氮比為4/1時,菌體大量繁殖,谷氨酸積累少;當(dāng)培養(yǎng)基碳氮比為3/1時,菌體繁殖受到抑制,谷氨酸產(chǎn)量則...
培養(yǎng)基(Medium)是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料,一般都含有水、氮源、無機鹽(包括微量元素)、碳源、生長因子(維生素、氨基酸、堿基、色素和血清等)等。培養(yǎng)基由于配制的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后,易被細菌污染或分解變質(zhì),因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基(如組織培養(yǎng)基),較長時間的貯存,必須放在3-6℃的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長期保管,均改制成粉末。半固態(tài)培養(yǎng)基是一種介于液態(tài)培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基之間的混合形式,常用于篩選微生物菌株。溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基(diffe...
按培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分是否完全區(qū)分:1.基本培養(yǎng)基,亦稱“較低限度培養(yǎng)基”。只能滿足微生物野生型菌株生長需要的培養(yǎng)基,稱為基本培養(yǎng)基,是含有營養(yǎng)要求較低成分的合成培養(yǎng)基,常用“[-]”表示。這種培養(yǎng)基往往缺少某些生長因子,所以經(jīng)過誘變過的營養(yǎng)缺陷型菌株不能生長。2.完全培養(yǎng)基,基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加血清等物質(zhì)后,叫完全培養(yǎng)基,也叫(血清)細胞培養(yǎng)基。完全培養(yǎng)基可用來滿足微生物的各種營養(yǎng)缺陷型菌株的生長需要,常以“[+]”表示。3.補充培養(yǎng)基,凡是只能滿足相應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型生長需要的組合培養(yǎng)基,稱為補充培養(yǎng)基,它是在基本培養(yǎng)基中加入該菌株不能合成的營養(yǎng)因子而組成的。根據(jù)在基本培養(yǎng)基中加入的是A或B等營養(yǎng)因子代...
培養(yǎng)基的pH必須控制在一定的范圍內(nèi),以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物。各類微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的較適pH條件各不相同,一般來講,細菌與放線菌適于在pH7-7.5范圍內(nèi)生長,酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范圍內(nèi)生長。值得注意的是,在微生物生長繁殖和代謝過程中,由于營養(yǎng)物質(zhì)被分解利用和代謝產(chǎn)物的形成與積累,會導(dǎo)致培養(yǎng)基pH發(fā)生變化,若不對培養(yǎng)基pH條件進行控制,往往導(dǎo)致微生物生長速度下降或(和)代謝產(chǎn)物產(chǎn)量下降。因此,為了維持培養(yǎng)基pH的相對恒定,通常在培養(yǎng)基中加入pH緩沖劑,常用的緩沖劑是一氫和二氫磷酸鹽(如KH2PO4和K2HPO4)組成的混合物。K2HPO4溶液呈堿性,...
天然培養(yǎng)基血清種類:目用于組織培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細胞也用人血清、馬血清等。選擇用牛血清培養(yǎng)細胞的原因:來源充足、制備技術(shù)成熟、經(jīng)過長時間的應(yīng)用考驗人們對其有比較深入的理解。牛血清對絕大多數(shù)哺乳動物細胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細胞時使用其他動物血清更合適。牛血清是細胞培養(yǎng)中用量比較大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,具有極為重要的功能。牛血清分為小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)比較高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞...
細胞培養(yǎng)過程中,細胞培養(yǎng)基是不可或缺的,細胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細胞中供給細胞營養(yǎng)和促使細胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是培養(yǎng)細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。通常細胞體外培養(yǎng)時需要加入血清,以維持細胞的生長和存活。而除了血清之外,部分細胞在培養(yǎng)過程中需要添加胰島素和β-巰基乙醇(β-mercaptoethanol)等成分來維持細胞狀態(tài)。MCF-7和NIH:OVCAR-3等細胞需要額外添加胰島素,而Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等細胞則需要添加β-巰基乙醇,不同細胞加入量會有差異,需根據(jù)細胞類型判斷。牛肉精蛋白胨培養(yǎng)基是常用的富營養(yǎng)培養(yǎng)基,適用于快速生長的微生物。植物組織培養(yǎng)基 MS 培養(yǎng)基...
細胞培養(yǎng)液(liquid of culture cellulae) 是指用于各種目的的體外培養(yǎng)、保存、運輸活組織及細胞的液體,實質(zhì)為人工模擬體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境,使細胞在此環(huán)境中有生長和繁殖的能力。由于其成分?jǐn)?shù)量明確并可通過調(diào)節(jié)某一種成分來觀察被研究對象的各種生物學(xué)改變,被廣泛應(yīng)用于細胞生物學(xué)科的研究。細胞培養(yǎng)液的組成成分主要有水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無機離子、生長因子等,這些成分必須通過嚴(yán)格挑選,嚴(yán)格測試后方可使用,所用的水必須達到2級試驗用水(CB/T 6682-1992),所用的器皿必須清潔無污并進行高壓滅菌或干烤去熱源處理。特定的培養(yǎng)基可用于特定的微生物和組織細胞培養(yǎng)。蔗糖胰蛋白...
動物細胞培養(yǎng)必需的溶液,平衡鹽水(BSS):Hanks 液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液。PH調(diào)整液:3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES溶液(二羥乙基哌嗪乙烷磺酸)細胞消化液:胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、膠原酶溶液。1)青、鏈霉素,每毫升培養(yǎng)液含100U青霉素和100ug鏈霉素。2)卡那霉素:終濃度為50ug/ml培養(yǎng)液。3)制霉菌素:濃度25U/ml,小瓶分裝,每瓶一次用完。常用的動物血清主要有牛血清和馬血清。牛血清分為胎牛血清和犢牛血清,前者來源少,價格高;后者要求剛產(chǎn)下尚未哺乳的小牛,因為哺乳后的小牛血清中可能含有更復(fù)雜的成分。血清中已知的成分主要有蛋白質(zhì)、...
動物細胞培養(yǎng)必需的溶液,平衡鹽水(BSS):Hanks 液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液。PH調(diào)整液:3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES溶液(二羥乙基哌嗪乙烷磺酸)細胞消化液:胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、膠原酶溶液。1)青、鏈霉素,每毫升培養(yǎng)液含100U青霉素和100ug鏈霉素。2)卡那霉素:終濃度為50ug/ml培養(yǎng)液。3)制霉菌素:濃度25U/ml,小瓶分裝,每瓶一次用完。常用的動物血清主要有牛血清和馬血清。牛血清分為胎牛血清和犢牛血清,前者來源少,價格高;后者要求剛產(chǎn)下尚未哺乳的小牛,因為哺乳后的小牛血清中可能含有更復(fù)雜的成分。血清中已知的成分主要有蛋白質(zhì)、...
選擇性培養(yǎng)基是指根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計的培養(yǎng)基。其功能是使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌,從而提高該菌的篩選效率。酵母菌富集培養(yǎng)基:葡萄糖5%,尿素0.1%,硫化銨0.1%,磷酸二氫鉀0.25%,磷酸氫二鈉0.05%,七水合硫酸鎂0.1%,七水合硫酸鐵0.01%,酵母膏0.05%,孟加拉紅0.003%,pH4.5。富集好氧自生固氮菌:甘露醇1%,磷酸二氫鉀0.02%,七水合硫酸鎂0.02%,氯化鈉0.02%,二水合硫酸鈣0.01%,碳酸鈣0.5%培養(yǎng)基的配方也會受到環(huán)境、藥物和其他外部壓力的影響,因此,在實際應(yīng)用中需要不斷進行調(diào)整和改進。麥康凱瓊脂培養(yǎng)基(...
HBS 和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在 Eagle′s(2.2g/L) 中比在 Hanks′(0.35g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的 CO2 平衡,以維持溶液的 PH 值。Eagle′s 液在空氣水平的CO2中,溶液會變堿,Hanks′液在 CO2 培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織,需要用Eagle′s液,如果只是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的組織,用Hanks′液就可以了。由于大多數(shù)細胞適宜pH為7.2-7.4,偏離此范圍可能對細胞生長將產(chǎn)生有害的影響。但各種細胞對pH的要求也不完全相同,原代培養(yǎng)細胞一般對pH變動耐受差,無限細胞系耐受力強。但總體來說,細胞耐...
培養(yǎng)基(Medium)是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料,一般都含有水、氮源、無機鹽(包括微量元素)、碳源、生長因子(維生素、氨基酸、堿基、色素和血清等)等。培養(yǎng)基由于配制的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后,易被細菌污染或分解變質(zhì),因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基(如組織培養(yǎng)基),較長時間的貯存,必須放在3-6℃的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長期保管,均改制成粉末。培養(yǎng)基也有不同的形態(tài),可以是液體、半固體或固體形式。改良阿須貝(Ashby)無氮瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)基細胞培養(yǎng)過程中,細胞培養(yǎng)基是不可或缺的,細...