碳二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺(EDC/NHS)方法在羧基磁珠表面偶聯(lián)抗體,制備可高效分離細(xì)胞的免疫磁珠.方法用EDC和NHS活化磁珠表面羧基,活化的羧基再與抗體上氨基進(jìn)行反應(yīng),從而將抗體偶聯(lián)于磁珠表面,獲得免疫磁珠.使用高性能納米粒度分析儀(HPPS),二辛可酸(BCA)蛋白定量試劑盒,流式細(xì)胞儀,透射電鏡(TEM)表征磁珠的粒徑,磁珠表面聯(lián)接的抗體量及其免疫活性.結(jié)果HPPS檢測(cè)磁珠平均水力學(xué)粒徑為110nm;磁珠表面偶聯(lián)52.4μg抗CD11a+抗體/mg磁珠.經(jīng)磁分離后細(xì)胞的流式分析結(jié)果表明,CD11a+免疫磁珠可以有效分離髓系白血病細(xì)胞系(KG-1a)細(xì)胞,免疫磁珠均勻結(jié)合于細(xì)胞表面,...
免疫磁珠法分選人骨髓多能成體祖細(xì)胞,觀察其分選效果,建立體外分選純化及培養(yǎng)人骨髓來源多能成體祖細(xì)胞(hMAPCs)的方法.方法:取健康成人志愿者適量骨髓后采用梯度密度離心法分離獲取單個(gè)核細(xì)胞,在自制培養(yǎng)基下貼壁培養(yǎng)后,將獲取的骨髓貼壁細(xì)胞通過CD45,血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)負(fù)分選,錐蟲藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)計(jì)數(shù)MACS分選前后細(xì)胞活力.流式細(xì)胞儀鑒定分選后細(xì)胞純度;流式細(xì)胞儀分析培養(yǎng)細(xì)胞CD29,CD44,CD34和HLA-DR表達(dá)情況.結(jié)果:通過MACS分選,平均每1×106/ml骨髓貼壁細(xì)胞可分選出約(5~10)×104/mlhMAPCs,分選后的hMAPCs細(xì)胞生長良好...
抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠,并進(jìn)行初步應(yīng)用。方法采用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備抗熒光素單克隆抗體;制備腹水,經(jīng)50%硫酸銨粗提后,再經(jīng)陰離子交換樹脂DE52進(jìn)一步純化單克隆抗體;采用氧化共沉淀法制備納米磁性粒子;乳液聚合法制備羧基磁性微球;用碳二亞胺將抗熒光素單克隆抗體共價(jià)偶聯(lián)于磁性微球表面,制備抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠。用制備的免疫磁珠檢測(cè)乙肝表面抗原,并與市售ELISA試劑盒的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果共獲得5株雜交瘤細(xì)胞株,其中1F12細(xì)胞株分泌的抗體效價(jià)、相對(duì)親和力較高,特異性較好;純化的1F12株單抗的純度達(dá)95%,蛋白含量為2.4mg/ml,ELISA效價(jià)為106,相對(duì)親和力為0.2m...
偶聯(lián)單抗NJ001的免疫磁珠對(duì)肺腺*裸鼠模型micro-CT掃描的增強(qiáng)作用.方法:經(jīng)尾靜脈注射SPC-A1-luc細(xì)胞建立肺腺*裸鼠模型,生物發(fā)光成像定量監(jiān)測(cè)**的大小.裸鼠分為:生理鹽水組,裸磁珠組和免疫磁珠組,每周分別注射生理鹽水,750nm裸磁珠溶液和偶聯(lián)NJ001的750nm免疫磁珠溶液,于注射前和注射后4h進(jìn)行micro-CT掃描.利用免疫組織化學(xué)驗(yàn)證**組織中NJ001特異性抗原SP70的表達(dá).結(jié)果:免疫磁珠組在第4周即可檢測(cè)到**,而生理鹽水組和裸磁珠組均到第6周才能檢測(cè)到.第6周生理鹽水組,裸磁珠組和免疫磁珠組micro-CT掃描**的灰度值分別為注射前的59.05±0.66,...
免疫磁珠分離成人骨髓中STRO-1^+陽性細(xì)胞,獲得同質(zhì)性骨髓基質(zhì)干細(xì)胞.方法:實(shí)驗(yàn)于2004-06/2005-06在東南大學(xué)修復(fù)重建外科研究所實(shí)驗(yàn)室完成.采集正常自愿獻(xiàn)髓者骨髓,淋巴細(xì)胞分離液體離心純化分離后利用免疫磁珠分離出STRO-1^+細(xì)胞,研究其生長曲線,體外擴(kuò)增能力,集落形成能力,細(xì)胞表型,細(xì)胞周期,成骨能力.結(jié)果:①利用免疫磁珠可從成人骨髓中獲取STRO-1^+細(xì)胞.經(jīng)體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)STRO-1^+細(xì)胞貼壁生長,相差顯微鏡下STRO-1^+細(xì)胞呈成纖維細(xì)胞梭形外觀.②生長曲線可分為細(xì)胞生長延滯期,對(duì)數(shù)生長期及穩(wěn)定期,細(xì)胞倍增時(shí)間為57h.③STRO-1^+細(xì)胞可以在體外擴(kuò)增1...
免疫磁珠法(MiniMACS)在分離純化外周血CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞亞群中的應(yīng)用.方法:應(yīng)用密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheralbloodmononucleatecells,PBMC),采用MiniMACS分別分離和純化39例標(biāo)本外周血PBMC中的CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞,并經(jīng)流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞純度和臺(tái)盼藍(lán)染色的方法對(duì)細(xì)胞活力進(jìn)行評(píng)估.結(jié)果:MiniMACS分離外周血CD4+T淋巴細(xì)胞前,后細(xì)胞純度分別為(37.38±5.74)%,(97.75±1.03)%(P〈0.001),CD8+T淋巴細(xì)胞分離純化前后細(xì)胞純度分別為(20.11±6.83)%,(96...
分離轉(zhuǎn)基因小鼠骨髓造血干細(xì)胞.運(yùn)用針對(duì)小鼠干細(xì)胞表面特異表達(dá)的干細(xì)胞抗原-1(stemcellantigen-1,Sca-1)的單克隆抗體和包被于磁顆粒表面的第二抗體,采用磁吸附細(xì)胞分選方法(MACS)分離小鼠骨髓造血干細(xì)胞,用流式細(xì)胞術(shù)(FACS)檢測(cè)MACS分離后骨髓細(xì)胞中干細(xì)胞(Sca-1陽性細(xì)胞)比例,監(jiān)測(cè)細(xì)胞分選效果.結(jié)果顯示MACS分離后骨髓細(xì)胞中Sca-1陽性細(xì)胞所占比例達(dá)85%以上,涂片觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞組成和細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征與FACS所得結(jié)果一致.MACS可以從轉(zhuǎn)基因小鼠全骨髓細(xì)胞中分離出Sca-1陽性的骨髓造血干細(xì)胞,細(xì)胞純度可達(dá)85%以上.BEENbio Anti Myc Co-...
常見問題及對(duì)策5:磁珠在使用過程中出現(xiàn)結(jié)塊現(xiàn)象?磁珠在使用時(shí)如果出現(xiàn)結(jié)塊現(xiàn)象一般較難振蕩打散,容易導(dǎo)致分布不均,出現(xiàn)該問題的原因是磁珠在磁場(chǎng)中放置太久而使磁珠牢固的結(jié)合在一起。用超聲波水浴處理2min即可打散磁珠使其重新分散,但應(yīng)注意超聲處理也會(huì)使磁珠在樣品溶液中捕獲的抗體脫落,所以磁珠在加樣后洗脫前不宜使用該方法。緩沖液匯總Co-IP&CHIP磁珠緩沖液匯總:細(xì)胞裂解液:正常RIPA細(xì)胞裂解緩沖液(一般是公司購買)抗體磁珠結(jié)合buffer:PBST(1*PBS+1%TritonX-100)Washingbuffer:PBST(1*PBS+1%TritonX-100)抗原與抗體/磁珠復(fù)合物bi...
免疫磁珠法分選人骨髓多能成體祖細(xì)胞,觀察其分選效果,建立體外分選純化及培養(yǎng)人骨髓來源多能成體祖細(xì)胞(hMAPCs)的方法.方法:取健康成人志愿者適量骨髓后采用梯度密度離心法分離獲取單個(gè)核細(xì)胞,在自制培養(yǎng)基下貼壁培養(yǎng)后,將獲取的骨髓貼壁細(xì)胞通過CD45,血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)負(fù)分選,錐蟲藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)計(jì)數(shù)MACS分選前后細(xì)胞活力.流式細(xì)胞儀鑒定分選后細(xì)胞純度;流式細(xì)胞儀分析培養(yǎng)細(xì)胞CD29,CD44,CD34和HLA-DR表達(dá)情況.結(jié)果:通過MACS分選,平均每1×106/ml骨髓貼壁細(xì)胞可分選出約(5~10)×104/mlhMAPCs,分選后的hMAPCs細(xì)胞生長良好...
羥基淀粉沉淀去除臍血紅細(xì)胞和免疫磁珠(MACS)陽性選擇,建立富集,分離臍血CD34+細(xì)胞的簡易實(shí)用方法,通過造血祖細(xì)胞集落培養(yǎng)分析其在細(xì)胞因子作用下的增殖潛能,觀察羥基淀粉沉淀對(duì)造血細(xì)胞增殖功能的影響.方法:采用羥基淀粉沉淀和改進(jìn)的MACS富集,分離臍血CD34+細(xì)胞,以甲纖半固體造血細(xì)胞培養(yǎng)法觀察其粒-單系細(xì)胞(CFU-GM)和紅系爆式集落(BFU-E)的數(shù)量和特性.結(jié)果:臍血分離前,CD34+細(xì)胞純度為1.5%~3%,MACS分離后其純度可達(dá)85%,羥基淀粉沉淀和MACS分離可達(dá)91%;CD34+造血祖細(xì)胞培養(yǎng)有明顯的增殖,采用IL-3,IL-6,SCF,GM-CSF,EPO等細(xì)胞因子組...
常用的磁珠法DNA提取試劑盒,國外的有Dynal、Qiagen等,國內(nèi)將磁珠應(yīng)用于核酸提取的研究起源于02年左右,經(jīng)過近些年的反復(fù)試驗(yàn),形成了穩(wěn)定的核酸提取體系,并已被***用于一些疾?。ㄈ缫腋?、丙肝、結(jié)核菌)等的定量檢測(cè)(如惠爾納米的系列磁珠法核酸提取試劑盒)。國產(chǎn)磁珠法試劑盒與進(jìn)口產(chǎn)品相比,已不單單是只具有價(jià)格優(yōu)勢(shì),其產(chǎn)品的穩(wěn)定性、高效性、提取出的核酸的質(zhì)量與產(chǎn)量都足以與進(jìn)口磁珠法試劑盒媲美。但是進(jìn)口試劑盒長期以來形成的完善的銷售渠道對(duì)國產(chǎn)試劑盒的推廣是一大挑戰(zhàn)。買免疫磁珠就找上海普平生物科技有限公司!河南anti-Flag COIP免疫磁珠送貨上門免疫磁珠用多聚抗原肽(multiplea...
磁珠與抗體偶聯(lián)的比較好條件,制備抗單增李斯特菌免疫磁珠;將免疫磁珠與顯色培養(yǎng)法結(jié)合,初步建立起利用免疫磁珠分離技術(shù)對(duì)單增李斯特菌進(jìn)行分離鑒定的檢測(cè)方法.從而為食品中單增李斯特菌的檢測(cè)提供一種快速,高效和靈敏的檢測(cè)新方法.方法:以單增李斯特菌體作為免疫抗原,免疫新西蘭兔,獲得兔抗單增李斯特菌多克隆抗體,鑒定多抗活性以及與單增李斯特菌體的結(jié)合能力;用激光粒度儀和透射電鏡分析不同活性基團(tuán)修飾磁珠的粒徑大小和分散性,選擇性質(zhì)穩(wěn)定的磁珠用以制備免疫磁珠;設(shè)計(jì)正交試驗(yàn),摸索pH,溫度,時(shí)間對(duì)氨基修飾磁珠與多抗偶聯(lián)的影響,選擇比較好條件制備免疫磁珠并用于捕獲單增李斯特菌;設(shè)計(jì)不同的偶聯(lián)緩沖溶液,偶聯(lián)時(shí)間,偶...
免疫磁珠分離成人骨髓中STRO-1^+陽性細(xì)胞,獲得同質(zhì)性骨髓基質(zhì)干細(xì)胞.方法:實(shí)驗(yàn)于2004-06/2005-06在東南大學(xué)修復(fù)重建外科研究所實(shí)驗(yàn)室完成.采集正常自愿獻(xiàn)髓者骨髓,淋巴細(xì)胞分離液體離心純化分離后利用免疫磁珠分離出STRO-1^+細(xì)胞,研究其生長曲線,體外擴(kuò)增能力,集落形成能力,細(xì)胞表型,細(xì)胞周期,成骨能力.結(jié)果:①利用免疫磁珠可從成人骨髓中獲取STRO-1^+細(xì)胞.經(jīng)體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)STRO-1^+細(xì)胞貼壁生長,相差顯微鏡下STRO-1^+細(xì)胞呈成纖維細(xì)胞梭形外觀.②生長曲線可分為細(xì)胞生長延滯期,對(duì)數(shù)生長期及穩(wěn)定期,細(xì)胞倍增時(shí)間為57h.③STRO-1^+細(xì)胞可以在體外擴(kuò)增1...
常見問題及對(duì)策3:如何避免磁珠在儲(chǔ)存或使用過程中可能出現(xiàn)的聚集情況?磁珠應(yīng)保存在2~8℃,使用時(shí)應(yīng)避免由于污染而導(dǎo)致的不可逆聚集,或因干燥而導(dǎo)致的聚集。磁珠在低pH的洗脫緩沖液中發(fā)生聚集屬于正常現(xiàn)象,不影響磁珠的正常使用。在Bindingbuffer和Elutionbuffer中添加終濃度為0.1%(v/v)的非離子型去垢劑(如NP-40、Tween-20或TritonX-100)可有效防止磁珠聚集。經(jīng)過低pH洗脫操作的磁珠可以用結(jié)合緩沖液洗滌至中性,然后用含有0.1%(v/v)Tween-20的Trisbuffer(pH7.5)振蕩重懸磁珠,并用超聲波水浴處理2min,即可使磁珠恢復(fù)均勻狀態(tài)...
兔前軟骨干細(xì)胞PSCs,(precartilagiousstemcells)的分離,培養(yǎng)方法及增殖,表型特征,為細(xì)胞移植***椎間盤退變,提供合適的種子細(xì)胞.[方法]取胎兔骨骺周圍軟骨膜(LaCroix環(huán))中的細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng),然后采用免疫磁珠分離系統(tǒng)分選純化PSCs.體外培養(yǎng),傳代,凍存復(fù)蘇,繪制生長曲線,觀察細(xì)胞特性.分別采用免疫組化,免疫熒光,RT-PCR等方法鑒定純化后的PSCs.[結(jié)果]免疫磁珠分離可獲得純度較高的兔PSCs,培養(yǎng)后成活率高,細(xì)胞狀態(tài)良好.細(xì)胞凍存復(fù)蘇后,細(xì)胞增殖速度,細(xì)胞形態(tài)及表面標(biāo)志物無明顯變化.免疫組化,免疫熒光,RT-PCR等方法鑒定后,細(xì)胞都有明顯的PSCs...
免疫磁珠(Immunomagneticbeads,IMB),是由載體微球和免疫配基結(jié)合而成的一種納米級(jí)材料.免疫磁珠分離技術(shù)是以高均一性的磁性微球?yàn)楣滔嘀С治?將免疫配基(如抗體,抗原等)通過功能基團(tuán)結(jié)合到磁性載體上形成免疫磁性微球,利用特異性的免疫學(xué)反應(yīng),在磁力作用下,發(fā)生力學(xué)移動(dòng),從混合溶液中分離出特異性的靶物質(zhì).具有分離速度快,效率高,可重復(fù)性好,操作簡單,不需要昂貴的儀器設(shè)備等優(yōu)點(diǎn).本實(shí)驗(yàn)采用化學(xué)共沉淀的方法合成了納米級(jí)Fe3O4磁性微粒,具有顆粒均一程度高,懸浮穩(wěn)定性好,超順磁性等特點(diǎn),經(jīng)固體物含量的測(cè)定及其粒徑的測(cè)定,磁珠的濃度約為7.9mg/mL,粒徑約為30~100nm左右,對(duì)...
檢測(cè)EPCAM、MUC16兩種抗原在上皮性卵巢*循環(huán)腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的相關(guān)性。方法分別用羧基磁珠制備EPCAM、MUC16兩種免疫磁珠,分3組:EPCAM免疫磁珠檢測(cè)組、MUC16免疫磁珠檢測(cè)組、2種磁珠均等混合檢測(cè)組。對(duì)來源于同一患者的等體積外周血樣本進(jìn)行循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè),HE染色后鑒定檢測(cè)值。結(jié)果EPCAM免疫磁珠、MUC16免疫磁珠、EPCAM+MUC16免疫磁珠對(duì)同體積、同來源樣本檢測(cè)值分別為22±11、14±6、28±12個(gè)腫瘤細(xì)胞(P0.05),說明檢測(cè)效率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論MUC16與EPCAM在上皮性卵巢*循環(huán)腫瘤細(xì)胞中**表達(dá)且存在差異,因此增加MUC16這一***標(biāo)志物可有效...
建立檢測(cè)人血清抗白***烯醇化酶(Eno)IgG類抗體的免疫磁珠法,并評(píng)估其在***血癥診斷中的價(jià)值。方法將Eno重組蛋白耦聯(lián)至磁性微珠上,以辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的羊抗人IgG為二抗,優(yōu)化免疫磁珠法的反應(yīng)條件,考察其精密度和特異性。收集經(jīng)血培養(yǎng)確診的***血癥患者(n=113)、***定植者(n=50)、細(xì)菌菌血癥患者(n=30)和健康人對(duì)照者(n=100)血清,用免疫磁珠法測(cè)定抗Eno抗體,并與ELISA法結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果免疫磁珠法測(cè)定抗Eno抗體的批內(nèi)、批間變異系數(shù)(CV)分別為8.2%和14.2%,重組Eno抗原對(duì)相應(yīng)抗體的阻斷率為91.6%。以吸光度(A)值0.29為cuto...
抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠,并進(jìn)行初步應(yīng)用。方法采用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備抗熒光素單克隆抗體;制備腹水,經(jīng)50%硫酸銨粗提后,再經(jīng)陰離子交換樹脂DE52進(jìn)一步純化單克隆抗體;采用氧化共沉淀法制備納米磁性粒子;乳液聚合法制備羧基磁性微球;用碳二亞胺將抗熒光素單克隆抗體共價(jià)偶聯(lián)于磁性微球表面,制備抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠。用制備的免疫磁珠檢測(cè)乙肝表面抗原,并與市售ELISA試劑盒的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果共獲得5株雜交瘤細(xì)胞株,其中1F12細(xì)胞株分泌的抗體效價(jià)、相對(duì)親和力較高,特異性較好;純化的1F12株單抗的純度達(dá)95%,蛋白含量為2.4mg/ml,ELISA效價(jià)為106,相對(duì)親和力為0.2m...
COIP實(shí)驗(yàn)步驟第三步:免疫共沉淀根據(jù)不同的抗體結(jié)合方式,這里的免疫共沉淀步驟會(huì)稍有不同,但是本質(zhì)是一樣的,都是為了形成抗原-蛋白復(fù)合物。如果直接使用 Protein A/G 結(jié)合的 beads,先進(jìn)行細(xì)胞裂解液/蛋白混合物與抗體的孵育,再加入 beads 將蛋白-抗體復(fù)合物拉下來。如果使用了交聯(lián)劑將抗體與 Protein A/G 固定,或者直接將抗體固定在 beads,則將固定抗體的 beads 與細(xì)胞裂解液或則蛋白混合物一起孵育。增加在洗脫之前的洗滌次數(shù)或在免疫共沉淀緩沖液中加入 Triton X-100 ,可以降低非特異性結(jié)合,以防止蛋白在陰性對(duì)照樹脂實(shí)驗(yàn)樣品中被檢測(cè)到。第四步:洗脫與檢...
一種免疫磁珠及制作方法和用于檢測(cè)的方法及測(cè)試板,所述的免疫磁珠至少由磁性載體微球組成,該磁性載體微球結(jié)合有至少一種免疫配基;所述的磁性載體微球由磁性納米粒和高分子骨架材料組成,其**為金屬小顆粒,**外為高分子材料,**外層為帶有各種可以結(jié)合不同免疫配基功能基因的功能層;免疫磁珠的制作方法包括:磁珠預(yù)處理;活化磁珠;偶聯(lián)抗體的制作;對(duì)偶聯(lián)抗體用封閉液封閉;免疫磁珠純化等;用于檢測(cè)的方法是:利用免疫學(xué)反應(yīng)夾心法,競(jìng)爭法以及間接法檢測(cè)不同物質(zhì)的存在,并在測(cè)試板上設(shè)置對(duì)照體系:測(cè)試板由包被試紙條,偶聯(lián)墊,樣品墊,吸水墊,覆蓋膜以及測(cè)試板外卡組成,它具有靈敏度高,定量準(zhǔn)確,不受光學(xué)因素干擾,磁信號(hào)穩(wěn)定...
常見問題及對(duì)策5:磁珠在使用過程中出現(xiàn)結(jié)塊現(xiàn)象?磁珠在使用時(shí)如果出現(xiàn)結(jié)塊現(xiàn)象一般較難振蕩打散,容易導(dǎo)致分布不均,出現(xiàn)該問題的原因是磁珠在磁場(chǎng)中放置太久而使磁珠牢固的結(jié)合在一起。用超聲波水浴處理2min即可打散磁珠使其重新分散,但應(yīng)注意超聲處理也會(huì)使磁珠在樣品溶液中捕獲的抗體脫落,所以磁珠在加樣后洗脫前不宜使用該方法。緩沖液匯總Co-IP&CHIP磁珠緩沖液匯總:細(xì)胞裂解液:正常RIPA細(xì)胞裂解緩沖液(一般是公司購買)抗體磁珠結(jié)合buffer:PBST(1*PBS+1%TritonX-100)Washingbuffer:PBST(1*PBS+1%TritonX-100)抗原與抗體/磁珠復(fù)合物bi...
免疫磁性細(xì)胞分選系統(tǒng)分離純化骨髓衍生肝干細(xì)胞亞群c-Kit^+lin^-。方法:實(shí)驗(yàn)于2006—07/08在南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心完成。6~8周齡的SPF級(jí)純系BALB,C雄性小鼠10只,體質(zhì)量18~20g。收集小鼠股骨骨髓細(xì)胞,利用免疫磁性細(xì)胞分選系統(tǒng),通過兩步法分選純化c-Kit^+lin^-:將獲取的lin^-細(xì)胞懸液8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按80μL/10^7加入Buffer重懸細(xì)胞。按20μL/10^7加生物素抗體磁珠,混勻,4℃冰箱孵育15min,按1 mL/10^7加入Buffer洗細(xì)胞1次,8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按50...
建立免疫磁珠法分離,并培養(yǎng)人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的方法.方法將術(shù)中取得的腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本,通過剪切、消化和吹打成單細(xì)胞懸液,篩網(wǎng)過濾,免疫磁珠分選試劑盒分選出CD133+細(xì)胞,用神經(jīng)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)法培養(yǎng)出具有單細(xì)胞克隆能力的細(xì)胞球,取第3代進(jìn)行誘導(dǎo)分化,分化前后用免疫細(xì)胞熒光化學(xué)方法鑒定**干細(xì)胞及分化后細(xì)胞.結(jié)果免疫磁珠分選出的CD133-細(xì)胞,可懸浮生長并形成神經(jīng)干細(xì)胞樣細(xì)胞球,有較強(qiáng)的增殖能力,干細(xì)胞標(biāo)志物巢蛋白(nestin)陽性,分化后細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)元小管相關(guān)蛋白β-3(β-tubulin3)和星形膠質(zhì)細(xì)胞膠質(zhì)纖維酸性蛋白質(zhì)(GFAP)特異性抗原,而巢蛋白、CD133陰性,并具有**的核型.結(jié)...
羥基淀粉沉淀去除臍血紅細(xì)胞和免疫磁珠(MACS)陽性選擇,建立富集,分離臍血CD34+細(xì)胞的簡易實(shí)用方法,通過造血祖細(xì)胞集落培養(yǎng)分析其在細(xì)胞因子作用下的增殖潛能,觀察羥基淀粉沉淀對(duì)造血細(xì)胞增殖功能的影響.方法:采用羥基淀粉沉淀和改進(jìn)的MACS富集,分離臍血CD34+細(xì)胞,以甲纖半固體造血細(xì)胞培養(yǎng)法觀察其粒-單系細(xì)胞(CFU-GM)和紅系爆式集落(BFU-E)的數(shù)量和特性.結(jié)果:臍血分離前,CD34+細(xì)胞純度為1.5%~3%,MACS分離后其純度可達(dá)85%,羥基淀粉沉淀和MACS分離可達(dá)91%;CD34+造血祖細(xì)胞培養(yǎng)有明顯的增殖,采用IL-3,IL-6,SCF,GM-CSF,EPO等細(xì)胞因子組...
免疫磁珠分離成人骨髓中STRO-1^+陽性細(xì)胞,獲得同質(zhì)性骨髓基質(zhì)干細(xì)胞.方法:實(shí)驗(yàn)于2004-06/2005-06在東南大學(xué)修復(fù)重建外科研究所實(shí)驗(yàn)室完成.采集正常自愿獻(xiàn)髓者骨髓,淋巴細(xì)胞分離液體離心純化分離后利用免疫磁珠分離出STRO-1^+細(xì)胞,研究其生長曲線,體外擴(kuò)增能力,集落形成能力,細(xì)胞表型,細(xì)胞周期,成骨能力.結(jié)果:①利用免疫磁珠可從成人骨髓中獲取STRO-1^+細(xì)胞.經(jīng)體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)STRO-1^+細(xì)胞貼壁生長,相差顯微鏡下STRO-1^+細(xì)胞呈成纖維細(xì)胞梭形外觀.②生長曲線可分為細(xì)胞生長延滯期,對(duì)數(shù)生長期及穩(wěn)定期,細(xì)胞倍增時(shí)間為57h.③STRO-1^+細(xì)胞可以在體外擴(kuò)增1...
利用免疫磁珠法分選并鑒定人前列腺*類干細(xì)胞.方法利用免疫磁珠法從人前列腺*細(xì)胞株P(guān)C3中分選CD133+/CD44+細(xì)胞,通過免疫組化,流式細(xì)胞術(shù),CCK8,平板克隆形成實(shí)驗(yàn)及裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)鑒定其表面標(biāo)志物表達(dá)情況及**干細(xì)胞特性.結(jié)果經(jīng)免疫磁珠法分選所得CD133+/CD44+細(xì)胞比例為0.50%;免疫組化及流式顯示其CD44/CD133/整合素α2β1均高表達(dá);其細(xì)胞增殖和克隆形成率高于PC3細(xì)胞;以低密度注射時(shí),其裸鼠體內(nèi)成瘤率明顯高于PC3細(xì)胞.結(jié)論利用免疫磁珠法可從人前列腺*細(xì)胞株P(guān)C3中高效的分選出具有**干細(xì)胞生物學(xué)特性的前列腺*類干細(xì)胞.您喜歡免疫磁珠的這些特點(diǎn)嗎?安徽anti-...
建立檢測(cè)人血清抗白***烯醇化酶(Eno)IgG類抗體的免疫磁珠法,并評(píng)估其在***血癥診斷中的價(jià)值。方法將Eno重組蛋白耦聯(lián)至磁性微珠上,以辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的羊抗人IgG為二抗,優(yōu)化免疫磁珠法的反應(yīng)條件,考察其精密度和特異性。收集經(jīng)血培養(yǎng)確診的***血癥患者(n=113)、***定植者(n=50)、細(xì)菌菌血癥患者(n=30)和健康人對(duì)照者(n=100)血清,用免疫磁珠法測(cè)定抗Eno抗體,并與ELISA法結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果免疫磁珠法測(cè)定抗Eno抗體的批內(nèi)、批間變異系數(shù)(CV)分別為8.2%和14.2%,重組Eno抗原對(duì)相應(yīng)抗體的阻斷率為91.6%。以吸光度(A)值0.29為cuto...
常見問題及對(duì)策5:磁珠在使用過程中出現(xiàn)結(jié)塊現(xiàn)象?磁珠在使用時(shí)如果出現(xiàn)結(jié)塊現(xiàn)象一般較難振蕩打散,容易導(dǎo)致分布不均,出現(xiàn)該問題的原因是磁珠在磁場(chǎng)中放置太久而使磁珠牢固的結(jié)合在一起。用超聲波水浴處理2min即可打散磁珠使其重新分散,但應(yīng)注意超聲處理也會(huì)使磁珠在樣品溶液中捕獲的抗體脫落,所以磁珠在加樣后洗脫前不宜使用該方法。緩沖液匯總Co-IP&CHIP磁珠緩沖液匯總:細(xì)胞裂解液:正常RIPA細(xì)胞裂解緩沖液(一般是公司購買)抗體磁珠結(jié)合buffer:PBST(1*PBS+1%TritonX-100)Washingbuffer:PBST(1*PBS+1%TritonX-100)抗原與抗體/磁珠復(fù)合物bi...
免疫磁珠法分選人骨髓多能成體祖細(xì)胞,觀察其分選效果,建立體外分選純化及培養(yǎng)人骨髓來源多能成體祖細(xì)胞(hMAPCs)的方法.方法:取健康成人志愿者適量骨髓后采用梯度密度離心法分離獲取單個(gè)核細(xì)胞,在自制培養(yǎng)基下貼壁培養(yǎng)后,將獲取的骨髓貼壁細(xì)胞通過CD45,血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)負(fù)分選,錐蟲藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)計(jì)數(shù)MACS分選前后細(xì)胞活力.流式細(xì)胞儀鑒定分選后細(xì)胞純度;流式細(xì)胞儀分析培養(yǎng)細(xì)胞CD29,CD44,CD34和HLA-DR表達(dá)情況.結(jié)果:通過MACS分選,平均每1×106/ml骨髓貼壁細(xì)胞可分選出約(5~10)×104/mlhMAPCs,分選后的hMAPCs細(xì)胞生長良好...