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在體光纖成像記錄直接標(biāo)記法不涉及細(xì)胞的遺傳修飾，標(biāo)價(jià)能夠在體外培養(yǎng)時(shí)主動(dòng)與細(xì)胞結(jié)合，也可以將標(biāo)記直接注射到動(dòng)物體內(nèi)，間接標(biāo)記法，將報(bào)告基因引入細(xì)胞，并翻譯成酶、受體、熒光或生物發(fā)光蛋白如果報(bào)告基因的表達(dá)是穩(wěn)定的，標(biāo)記的細(xì)胞可以在整個(gè)細(xì)胞的生命周期中被觀察到。由...

較為低血清試驗(yàn)的要求。內(nèi)有毒的檢測(cè)：內(nèi)有毒的，又叫脂多糖（LPS）或脂寡糖（LOS），存在于革蘭氏陰性菌的細(xì)胞外膜。臨床上，內(nèi)有毒的作為一些革蘭氏陰性菌的診斷提示，如腦膜炎球菌。動(dòng)物體內(nèi)，內(nèi)有毒的能夠?qū)е掳l(fā)熱或者誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)；細(xì)胞培養(yǎng)中，內(nèi)有毒的能夠誘導(dǎo)細(xì)胞反...

在體光纖成像記錄和傳統(tǒng)的體外成像或細(xì)胞培養(yǎng)相比有著明顯優(yōu)點(diǎn)。首先，在體光纖成像記錄能夠反映細(xì)胞或基因表達(dá)的空間和時(shí)間分布，從而了解活的物體動(dòng)物體內(nèi)的相關(guān)生物學(xué)過(guò)程、特異性基因功能和相互作用。由于可以對(duì)同一個(gè)研究個(gè)體進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間反復(fù)查看成像，既可以進(jìn)步數(shù)據(jù)的可比性...

逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)的原理是：提取組織或細(xì)胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機(jī)引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA。再以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，而獲得目的基因或檢測(cè)基因表達(dá)。完整RNA 的提取和純化，是進(jìn)行RNA 方面的研究...

隨著熒光標(biāo)記技術(shù)和光學(xué)成像技術(shù)的發(fā)展, 在體生物光學(xué)成像（In vivo optical imaging）已經(jīng)發(fā)展 為一項(xiàng)嶄新的分子、 基因表達(dá)的分析檢測(cè)技術(shù)，在 生命科學(xué)、 醫(yī)學(xué)研究及藥物研發(fā)等領(lǐng)域得到較多應(yīng)用, 主要分為在體生物發(fā)光成像（Biolumine...

在體光纖成像記錄是了解生物體組織結(jié)構(gòu)，闡明生物體各種生理功能的一種重要研究手段。它利用光學(xué)或電子顯微鏡直接獲得生物細(xì)胞和組織的微觀結(jié)構(gòu)圖像，通過(guò)對(duì)所得圖像的分析來(lái)了解生物細(xì)胞的各種生理過(guò)程。近年來(lái)，隨著光學(xué)成像技術(shù)的發(fā)展，尤其是數(shù)字化成像技術(shù)和計(jì)算機(jī)圖像分析技...

在體光纖成像記錄人類(lèi)大量的復(fù)雜行為主要取決于上千億個(gè)神經(jīng)元組成的精確神經(jīng)環(huán)路，而神經(jīng)環(huán)路的建立依賴(lài)于神經(jīng)元之間突觸連接的形成。突觸是神經(jīng)元交流的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)，只有通過(guò)突觸連接，神經(jīng)元之間以及神經(jīng)元和靶向細(xì)胞（包括肌肉，腺體分析的細(xì)胞）才能有效的傳遞信號(hào)，因此突觸連...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的常見(jiàn)問(wèn)題：PCR產(chǎn)物的電泳檢測(cè)時(shí)間一般為48h以?xún)?nèi)，有些很好于當(dāng)日電泳檢測(cè)，大于48h后帶型不規(guī)則甚至消失。假陰性：不出現(xiàn)擴(kuò)增條帶。PCR反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)有模板核酸的制備，引物的質(zhì)量與特異性，酶的質(zhì)量及溴乙錠的使用， PCR循環(huán)條件。尋找原因亦應(yīng)...

在體光纖成像記錄是了解生物體組織結(jié)構(gòu)，闡明生物體各種生理功能的一種重要研究手段。它利用光學(xué)或電子顯微鏡直接獲得生物細(xì)胞和組織的微觀結(jié)構(gòu)圖像，通過(guò)對(duì)所得圖像的分析來(lái)了解生物細(xì)胞的各種生理過(guò)程。近年來(lái)，隨著光學(xué)成像技術(shù)的發(fā)展，尤其是數(shù)字化成像技術(shù)和計(jì)算機(jī)圖像分析技...

小動(dòng)物在體光纖成像記錄圖像處理軟件除了提供含有光子強(qiáng)度標(biāo)尺的成像圖片外，還能計(jì)算分析發(fā)光面積、總光子數(shù)、光子強(qiáng)度的相關(guān)參數(shù)供實(shí)驗(yàn)者參考。原則上，如預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)拍攝出圖片非特異性雜點(diǎn)多，需降低曝光時(shí)間；反之，如信號(hào)過(guò)弱可適當(dāng)延長(zhǎng)曝光時(shí)間。但曝光時(shí)間的延長(zhǎng)，不單增加了...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)：定量PCR允許實(shí)時(shí)定量和檢測(cè)特定的DNA序列，因?yàn)樗诤铣蛇^(guò)程中測(cè)量濃度。有兩種方法可以同時(shí)檢測(cè)和定量。種方法是使用在DNA雙鏈之間非特異性保留的熒光染料。第二種方法涉及編碼特定序列并被熒光標(biāo)記的探針。只有在探針與其互補(bǔ)DNA雜交后，才能使用這...

在體光纖成像記錄就是生物樣本的造影技術(shù)，依照樣本尺度大小可以概分為組織造影與細(xì)胞分子的顯微技術(shù)。這些大致都需要光學(xué)技術(shù)配合生物樣本的特性發(fā)展，少數(shù)會(huì)使用光以外的波動(dòng)性質(zhì)將圖像光信號(hào)變?yōu)殡娦盘?hào)的器件，它是利用少數(shù)載流子的注入、存儲(chǔ)和轉(zhuǎn)移等物理過(guò)程來(lái)完成幾種電路功...

很好的胎牛血清對(duì)細(xì)胞成長(zhǎng)的作用：提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需的天然或天然的生長(zhǎng)因子。提供天然的結(jié)合蛋白，能識(shí)別氨基酸、脂質(zhì)、金屬離子和等，能結(jié)合并調(diào)節(jié)它們的活性。已知清蛋白即具有上述功能，并對(duì)細(xì)胞代謝、生物合成、增殖和存活具有潛在的影響。又如胎牛血清中富含胎球蛋白，具有多...

在體光纖成像記錄人類(lèi)大量的復(fù)雜行為主要取決于上千億個(gè)神經(jīng)元組成的精確神經(jīng)環(huán)路，而神經(jīng)環(huán)路的建立依賴(lài)于神經(jīng)元之間突觸連接的形成。突觸是神經(jīng)元交流的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)，只有通過(guò)突觸連接，神經(jīng)元之間以及神經(jīng)元和靶向細(xì)胞（包括肌肉，腺體分析的細(xì)胞）才能有效的傳遞信號(hào)，因此突觸連...

胎牛血清：八月齡胎牛心臟穿刺取血；新生牛血清：出生12-24小時(shí)新生牛靜脈;又可細(xì)分為：a.高級(jí)新生牛血清：后靜置自然析出的血清;b.標(biāo)準(zhǔn)新生牛血清：c.經(jīng)離心分離的血清;d.普通新生牛血清：融血或微融血的血清；小牛血清：出生三月齡小牛動(dòng)脈分離血清；血清是血漿...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)準(zhǔn)備：PCR所用的酶主要有兩種來(lái)源：Taq和Pfu，分別來(lái)自?xún)煞N不同的噬熱菌。其中Taq擴(kuò)增效率高但易發(fā)生錯(cuò)配。Pfu擴(kuò)增效率弱但有糾錯(cuò)功能。所以實(shí)際使用時(shí)根據(jù)需要必須做不同的選擇。模板即擴(kuò)增用的DNA，可以是任何來(lái)源，但有兩個(gè)原則，純度必須較高...

聚合酶鏈反應(yīng)允許快速生產(chǎn)短DN段，即使已知的引物序列不超過(guò)兩個(gè)。聚合酶鏈反應(yīng)的這種能力增強(qiáng)了許多方法，例如生成雜交 探針用于 Southern 或northern blot 雜交。聚合酶鏈反應(yīng)為這些技術(shù)提供了大量的純DNA，有時(shí)是單鏈的，甚至可以從非常少量的起...

聚合酶鏈反應(yīng)：在檢測(cè)病原體方面,病原體培養(yǎng)是臨床診斷的金標(biāo)準(zhǔn) .但是對(duì)于一些苛養(yǎng)菌 生長(zhǎng)緩慢的細(xì)菌或難以培養(yǎng)的病原體等培養(yǎng)的陽(yáng)性檢出率不高.檢測(cè)時(shí)間過(guò)長(zhǎng) 無(wú)法滿(mǎn)足臨床早期快速診斷以指導(dǎo)醫(yī)治的需要[3]。當(dāng)前 PCR 技術(shù)是在傳統(tǒng) PCR 技術(shù)應(yīng)用的基礎(chǔ)上進(jìn)行的...

血清為何要熱滅活，有必要對(duì)所有血清都滅活嗎？如何正確的進(jìn)行滅活？加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。啟動(dòng)的補(bǔ)體系統(tǒng)參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，啟動(dòng)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活化。在免疫學(xué)研究中，培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅清。實(shí)驗(yàn)顯...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的常見(jiàn)問(wèn)題：出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增帶：PCR擴(kuò)增后出現(xiàn)的條帶與預(yù)計(jì)的大小不一致，或大或小，或者同時(shí)出現(xiàn)特異性擴(kuò)增帶 與非特異性擴(kuò)增帶。非特異性條帶的出現(xiàn)，其原因：一是引物與靶序列不完全互補(bǔ)、或引物聚合形成二聚體。二是Mg2+離子濃度過(guò)高、退火溫度過(guò)低，...

在體監(jiān)測(cè)基因療于中的基因表達(dá)，隨著 后基因組時(shí)代的到來(lái)和人們對(duì)疾病發(fā)生的發(fā)展機(jī)制的深入了解, 在基因水平上療于壞掉的、 心血管疾病、 和分子遺傳病等惡性疾病已經(jīng)得到國(guó)內(nèi)外研究人員越來(lái)越 較多的關(guān)注。如何客觀地檢測(cè)基因療于的臨床療效判斷終點(diǎn), 有效監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)基因在生...

聚合酶鏈反應(yīng)注意事項(xiàng)：在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。在總RNA的提取過(guò)程中，注意避免mRNA的斷裂；為了防止非特異性擴(kuò)增，必須設(shè)陰性對(duì)照；內(nèi)參的設(shè)定：主要為了用于靶RNA的定量。常用的內(nèi)參有G3PD（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）、β-Acti...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR技術(shù)的基本原理類(lèi)似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程，其特異性依賴(lài)于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性-退火-延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解...

血清的保存應(yīng)該注意：血清中的沉淀物、絮狀物：主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成，這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量，可用離心3000rpm，5分鐘去除，也可不用處理，顯微鏡下"小黑點(diǎn)"。經(jīng)過(guò)熱處理過(guò)的血清，沉淀物的形成會(huì)明顯增多。有些沉淀物在顯微...

細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎？如何處理？一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染，微生物則會(huì)大量繁殖，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。如果...

絕大多數(shù)聚合酶鏈反應(yīng)方法依賴(lài)于熱循環(huán)。熱循環(huán)將反應(yīng)物暴露于加熱和冷卻的重復(fù)循環(huán)中，以允許不同的溫度依賴(lài)性反應(yīng)——具體地說(shuō)，脫氧核糖核酸融化和酶-驅(qū)動(dòng)DNA復(fù)制。聚合酶鏈反應(yīng)使用兩種主要試劑-引物(引物是短的單鏈DN段，稱(chēng)為寡核苷酸，是目標(biāo)DNA區(qū)域的互補(bǔ)序列)...

為何血清會(huì)存在批間差？如何避免此影響？因?yàn)檠鍋?lái)源于動(dòng)物，其組成成分有1000種左右，每個(gè)批號(hào)的組分和組分含量都是不固定的，因此批間差異是可能存在的。為了避免批間差異對(duì)細(xì)胞的影響，XP建議先進(jìn)行批號(hào)測(cè)試，篩選合適的批號(hào)，備好庫(kù)存（血清未開(kāi)封時(shí)，在-20℃下可保...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的常見(jiàn)問(wèn)題：Mg2+濃度：Mg2+離子濃度對(duì)PCR擴(kuò)增效率影響很大，濃度過(guò)高可降低PCR擴(kuò)增的特 異性，濃度過(guò)低則影響PCR擴(kuò)增產(chǎn)量甚至使PCR擴(kuò)增失敗而不出擴(kuò)增條帶。反應(yīng)體積的改變：通常進(jìn)行PCR擴(kuò)增采用的體積為20ul、30ul、50ul?；?..

對(duì)血清的成分和作用的研究雖有很大進(jìn)展，但仍存在一些問(wèn)題。主要是：血清的成份可能有幾百種之多，對(duì)其準(zhǔn)確的成份、含量及其作用機(jī)制仍不清楚，尤其是對(duì)其中一些多肽類(lèi)生長(zhǎng)因子、和脂類(lèi)等尚未充分認(rèn)識(shí)，這給研究工作帶來(lái)許多困難；血清都是批量生產(chǎn)，各批量之間差異很大，而且血清...

聚合酶鏈反應(yīng)也可以用作以下敏感試驗(yàn)的一部分組織分型，對(duì)移植至關(guān)重要。截至2008年，甚至有人提議用聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)取代傳統(tǒng)的血型抗體檢測(cè)。許多形式的病癥涉及致病基因的改變。通過(guò)使用基于聚合酶鏈反應(yīng)的測(cè)試來(lái)研究這些突變，醫(yī)治方案有時(shí)可以根據(jù)患者的不同而不同。聚合...