高效液相色譜法介紹

基本原理

高效液相色譜(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)，是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上，于20世紀(jì)60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻。因?yàn)檩^小的填充顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜。

使用高效液相色譜時，液體待檢測物被注入色譜柱，通過壓力在固定相中移動，由于被測物種不同物質(zhì)與固定相的相互作用不同，不同的物質(zhì)順序離開色譜柱，通過檢測器得到不同的峰信號，***通過分析比對這些信號來判斷待測物所含有的物質(zhì)。高效液相色譜作為一種重要的分析方法，***地應(yīng)用于化學(xué)和生化分析中。高效液相色譜從原理上與經(jīng)典的液相色譜沒有本質(zhì)的差別，它的特點(diǎn)是采用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測器和高效微粒固定相，適于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)、分子量大、不同極性的有機(jī)化合物。

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高效液相色譜

高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“**離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測，從而實(shí)現(xiàn)對試樣的分析。該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)應(yīng)用。 湖南賽默飛世爾Vanquish高效液相色譜系統(tǒng)采購可支持三個工作流程。雙梯度流路。同一集成式系統(tǒng)。

液相色譜類型

液相色譜按其分離機(jī)理，可分為四種類型--吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜、凝膠色譜法

吸附色譜法

吸附色譜法的固定相為吸附劑，色譜的分離過程是在吸附劑表面進(jìn)行的，不進(jìn)入固定相的內(nèi)部。與氣相色譜不同，流動相(即溶劑)分子也與吸附劑表面發(fā)生吸附作用。在吸附劑表面，樣品分子與流動相分子進(jìn)行吸附競爭，因此流動相的選擇對分離效果有很大的影響，一般可采用梯度淋洗法來提高色譜分離效率。

在聚合物的分析中，吸附色譜一般用來分離添加劑，如偶氮染料、抗氧化劑、表面活性劑等，也可用于石油烴類的組成分析。

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提供強(qiáng)大的分離性能

采用兩個相似的或者不同的色譜柱運(yùn)行樣品以提高通量或盡可能提**析效率。也可以額外選配一個柱溫箱，以分別進(jìn)行色譜柱的溫度控制。

簡化操作

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高效液相色譜分離原理

液-液分配

(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化學(xué)鍵合相色譜(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流動相和固定相都是液體。流動相與固定相之間應(yīng)互不相溶（極性不同，避免固定液流失），有一個明顯的分界面。當(dāng)試樣進(jìn)入色譜柱，溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行分配。達(dá)到平衡時，服從于高效液相色譜計(jì)算公式：

式中，cs—溶質(zhì)在固定相中濃度；cm—溶質(zhì)在流動相中的濃度； Vs—固定相的體積；Vm—流動相的體積。LLPC與GPC有相似之處，即分離的順序取決于K，K大的組分保留值大；但也有不同之處，GPC中，流動相對K影響不大，LLPC流動相對K影響較大。

a.正相液-液分配色譜法(Normal Phase liquid Chromatography): 流動相的極性小于固定液的極性。

b.反相液-液分配色譜法(Reverse Phase liquid Chromatography): 流動相的極性大于固定液的極性。

c.液-液分配色譜法的缺點(diǎn)：盡管流動相與固定相的極性要求完全不同，但固定液在流動相中仍有微量溶解；流動相通過色譜柱時的機(jī)械沖擊力，會造成固定液流失。上世紀(jì)70年代末發(fā)展的化學(xué)鍵合固定相（見后），可克服上述缺點(diǎn)。