RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細胞類型中的轉(zhuǎn)染機制存在多種差異。以下將詳細闡述不同RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細胞類型中轉(zhuǎn)染機制的差異表現(xiàn)。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑:機制概述:脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑通常由陽離子脂質(zhì)和中性脂質(zhì)組成,其轉(zhuǎn)染機制主要是通過與帶負電的RNA分子結(jié)合,形成脂質(zhì)體-RNA復(fù)合物。這個復(fù)合物能夠與細胞膜相互作用,通過內(nèi)吞作用或膜融合等方式進入細胞。進入細胞后,脂質(zhì)體-RNA復(fù)合物逐漸釋放RNA分子,使其能夠在細胞內(nèi)發(fā)揮作用。在不同細胞類型中的表現(xiàn):在腎*細胞系786-O和ACHN中,目前雖未明確提及脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的作用,但可以推測其可能通過類似的機制進入細胞,影響細胞內(nèi)的基因表達和細胞生長。例如,微小RNA-1180(miR-1180)轉(zhuǎn)染對腎*細胞生長產(chǎn)生影響,雖然未明確指出轉(zhuǎn)染試劑類型,但脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑可能在類似的研究中發(fā)揮作用1。在MEF細胞、3T3細胞、Hela細胞及MCF-7細胞中,MessageMax脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑能將modGFP高效轉(zhuǎn)染入細胞,并實現(xiàn)modGFP和modmCherry在MEF細胞中的共轉(zhuǎn)及核內(nèi)因子nGFP和mTBX5在MEF細胞核中的定位。這表明脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑在不同類型的細胞中能夠有效地將RNA分子轉(zhuǎn)運到細胞內(nèi),并實現(xiàn)特定蛋白的表達。用二乙基氨基乙基修飾,右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質(zhì)子化,這使得它可以自組裝成帶負電荷核酸的納米顆粒。天津轉(zhuǎn)染試劑定制
陽離子聚合物作為轉(zhuǎn)染試劑結(jié)合機制:以陽離子聚合物EZTransCellReagent為例,在優(yōu)化RNA干擾(RNAi)條件的研究中發(fā)現(xiàn),陽離子聚合物通過與RNA分子結(jié)合來實現(xiàn)轉(zhuǎn)染14。例如,設(shè)計針對GFP的shRNA,使用EZ轉(zhuǎn)染試劑將其轉(zhuǎn)染到細胞中,shRNA***降低了GFP的表達。預(yù)稀釋的轉(zhuǎn)染試劑在室溫下以及小核酸的存在可增加轉(zhuǎn)染效率,且在24小時時達到峰值。與環(huán)狀核酸相比,線性核酸與陽離子聚合物結(jié)合時顯示出更高的轉(zhuǎn)染效率和更高的基因組整合率。作用特點:陽離子聚合物介導(dǎo)的RNAi條件優(yōu)化后,為未來的RNAi研究提供了有用的數(shù)據(jù)。肺轉(zhuǎn)染試劑動物實驗陽離子聚合物是一種非病毒載體。
非人靈長類動物是神經(jīng)科學(xué)研究的重要動物模型,超高場磁共振腦成像技術(shù)在非人靈長類動物研究中具有重要作用。非人靈長類動物超高場磁共振腦成像技術(shù)進展:徐斌、高陽、王菁綜述了非人靈長類動物超高場磁共振腦成像應(yīng)用、面臨的技術(shù)挑戰(zhàn)以及當(dāng)前的技術(shù)解決方案等3。磁共振腦成像技術(shù)是目前**主要的非侵入式大腦神經(jīng)信號探測手段,非人靈長類動物磁共振腦成像研究對于深入理解磁共振腦成像生理機制、研發(fā)定量生理探測技術(shù)、神經(jīng)科學(xué)基礎(chǔ)研究、心理學(xué)以及臨床病理機制研究等都具有重要作用。但非人靈長類動物磁共振腦成像面臨著缺少適配商用系統(tǒng)、需要更高成像分辨率以及對多樣化動物實驗需求兼容性等技術(shù)挑戰(zhàn)。超高場磁共振具有高信噪比、高腦血氧水平依賴信號檢測靈敏度和亞毫米級高分辨率成像能力等優(yōu)勢,有潛力應(yīng)用于非人靈長類動物超高分辨率腦成像研究。
納米顆粒遞送藥物并發(fā)揮功能的能力在很大程度上取決于它們被細胞攝取的機制。以蒲公英湯劑體為例,研究發(fā)現(xiàn)親溶酶體物質(zhì)能***抑制蒲公英湯劑體進入細胞;巨胞飲抑制劑細胞松弛素D和阿米洛利能***降低蒲公英湯劑體的胞內(nèi)攝入,且呈現(xiàn)劑量依賴性,敲減Rac1和PAK1也有效地抑制其進入細胞。這些結(jié)果提示蒲公英湯劑體通過內(nèi)吞進入A549細胞且主要由巨胞飲介導(dǎo)26。同理,RNA轉(zhuǎn)染試劑在某些情況下也可能利用巨胞飲途徑進入細胞。電穿孔轉(zhuǎn)染中的內(nèi)吞途徑電穿孔轉(zhuǎn)染是一種用于基因遞送的技術(shù),在研究其機制時發(fā)現(xiàn),用冰冷介質(zhì)處理或在電穿孔轉(zhuǎn)染前使用內(nèi)吞抑制劑處理三種不同的人類細胞系(HEK293、HCT116和HT29)。結(jié)果表明,用冰冷介質(zhì)、氯丙嗪或染料木黃酮處理會***降低所有三種細胞系的電穿孔轉(zhuǎn)染效率,但阿米洛利處理對電穿孔轉(zhuǎn)染效率影響不***。對于用小干擾RNA(siRNA)處理的細胞,只有敲低網(wǎng)格蛋白重鏈(CLTC)會導(dǎo)致所有三種細胞系的電穿孔轉(zhuǎn)染效率降低。這些數(shù)據(jù)表明,網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用在電穿孔轉(zhuǎn)染中起著重要作用27。納米顆粒可以參與內(nèi)體途徑,并可以通過細胞質(zhì)將DNA運輸?shù)郊毎恕?/p>
熱成像技術(shù)在動物檢測方面也具有很大的潛力。AnimaldetectionusingthermalimagingandaUAV:Rafa?Fr?ckowiak和Z.Goraj的研究測試了多旋翼無人機搭配熱成像相機用于檢測大型野生動物的方法2。他們在波蘭的CzarnaBialostocka森林區(qū)進行了研究,選用了視角為33°×26.6°、熱傳感器分辨率為640×512像素的熱成像相機E20TvxYuneec,并以YuneecH520E六旋翼無人機作為搭載工具。研究結(jié)果表明,熱成像相機在檢測和識別大型野生動物方面具有潛力,如歐亞麋鹿和馬鹿等。在2022年冬季,還能夠確定馬鹿的性別。三、X射線發(fā)光成像技術(shù)X射線發(fā)光成像技術(shù)結(jié)合了X射線成像的高空間分辨率和光學(xué)成像的高測量靈敏度,可用于小動物成像。小動物的X射線發(fā)光成像:MichaelCLun、WenxiangCong和Md.Arifuzzaman綜述了兩種類型的X射線發(fā)光計算斷層掃描(XLCT)成像方法,并介紹了他們正在建立的聚焦X射線發(fā)光斷層掃描(FXLT)成像系統(tǒng)7。該系統(tǒng)將開發(fā)基于機器學(xué)習(xí)的FXLT重建算法,并合成不同發(fā)射波長的納米級磷光劑。其結(jié)構(gòu)的一個共同特征是分子中存在許多帶正電的基團,這些基團被質(zhì)子化成帶正電的聚合物。甘肅轉(zhuǎn)染試劑靠譜
基于病毒的轉(zhuǎn)染,或者更具體地稱為轉(zhuǎn)導(dǎo),涉及使用病毒載體將特定的核酸序列帶入宿主細胞。天津轉(zhuǎn)染試劑定制
陽離子殼交聯(lián)的類Knedel納米粒子作為轉(zhuǎn)染試劑結(jié)合機制:陽離子殼交聯(lián)的類Knedel納米顆粒(cSCKs)含有不同百分比伯胺和叔胺,通過與siRNA結(jié)合來發(fā)揮作用18。含100%伯胺的cSCK在HeLa細胞中的沉默效率比較高,能夠抑制人血清中siRNA降解以及轉(zhuǎn)染HeLa和小鼠巨噬細胞系。與融合的GALA肽復(fù)合可以增強iNOS在較低siRNA濃度下的siRNA沉默,這被證明可以增強攝取后的內(nèi)體逃逸,進一步說明其結(jié)合機制可能涉及與siRNA的緊密結(jié)合以及促進細胞內(nèi)轉(zhuǎn)運。作用特點:cSCK-pa100在HeLa細胞、293T細胞和人支氣管上皮(HEK)細胞中顯示出比Lipofectamine2000更高的沉默效率,但在人支氣管上皮(BEAS-2B)細胞和人乳腺上皮(MCF10a)細胞中可比。在小鼠巨噬細胞系中,cSCK-pa100表現(xiàn)出更大的iNOS沉默,并提供了更好的保護免于血清降解,證明了其作為siRNA轉(zhuǎn)染劑的潛在用途。綜上所述,不同類型的陽離子RNA轉(zhuǎn)染試劑在結(jié)合RNA分子的機制上存在差異,主要涉及靜電相互作用、納米復(fù)合物形成以及與其他分子的協(xié)同作用等方面。這些差異導(dǎo)致了它們在轉(zhuǎn)染效率、細胞毒性、對不同細胞類型的適用性等方面的不同特點。天津轉(zhuǎn)染試劑定制