標(biāo)記神經(jīng)元：在動(dòng)物體內(nèi)，特定的熒光染料可以穩(wěn)定且持久地標(biāo)記皮質(zhì)脊髓神經(jīng)元，用于病理生理學(xué)研究和切片膜片鉗研究。如將Fluoro-Red和Fluoro-Green注入麻醉新生大鼠的頸脊髓，固定的腦切片顯示出離散的內(nèi)部皮質(zhì)層中細(xì)長(zhǎng)或金字塔形細(xì)胞輪廓中的***熒光，與V層錐體細(xì)胞一致，并且標(biāo)記的神經(jīng)元使用切片膜片鉗方法顯示出自發(fā)突觸活動(dòng)4。用于細(xì)菌成像：有機(jī)熒光染料可用于大腸桿菌的超分辨率成像實(shí)驗(yàn)。通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)定大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線(xiàn)，以及將大腸桿菌與有機(jī)熒光染料尼羅紅共孵育，在超分辨率顯微鏡下實(shí)現(xiàn)了大腸桿菌細(xì)胞壁的熒光標(biāo)記。這一實(shí)驗(yàn)既結(jié)合了生物化學(xué)和分析化學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)及儀器的原理和操作，也有利于學(xué)生深入了解新型的細(xì)菌熒光標(biāo)記技術(shù)6。近紅外熒光壽命成像：近紅外（NIR）染料在小動(dòng)物成像和漫射光學(xué)斷層掃描中用作熒光標(biāo)記。通過(guò)三種方式將現(xiàn)有的共聚焦和多光子激光掃描顯微鏡（LSM）與時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)（TCSPC）熒光壽命成像（FLIM）系統(tǒng)相適應(yīng)，用于近紅外FLIM。測(cè)試的許多近紅外染料在生物組織中顯示出明顯的壽命變化，取決于它們所結(jié)合的組織結(jié)構(gòu)，因此近紅外FLIM可以提供有關(guān)組織組成和局部生化參數(shù)的補(bǔ)充信息7。光漂白是指染料在長(zhǎng)時(shí)間光照下熒光強(qiáng)度逐漸減弱的現(xiàn)象。免疫熒光熒光染料細(xì)胞膜

實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)成像實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)成像對(duì)于研究動(dòng)物體內(nèi)的生理和病理過(guò)程具有重要意義。通過(guò)將PET動(dòng)態(tài)成像技術(shù)應(yīng)用于高吞吐量多鼠成像方法，可以同時(shí)獲取動(dòng)態(tài)腦圖像4。這為研究動(dòng)物大腦的功能連接和神經(jīng)活動(dòng)提供了新的途徑。動(dòng)物成像技術(shù)還可以結(jié)合基因編碼的神經(jīng)調(diào)節(jié)工具，實(shí)現(xiàn)對(duì)動(dòng)物大腦活動(dòng)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和調(diào)控13。這將有助于深入了解動(dòng)物的行為和認(rèn)知過(guò)程，以及神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生機(jī)制。四、標(biāo)準(zhǔn)化和質(zhì)量控制小動(dòng)物成像的標(biāo)準(zhǔn)化對(duì)于提高數(shù)據(jù)的有效性和可靠性至關(guān)重要。使用小動(dòng)物成像設(shè)備的標(biāo)準(zhǔn)化，以及一般的動(dòng)物處理，是確保數(shù)據(jù)可重復(fù)性和可靠性的關(guān)鍵14。例如，提供有效的小動(dòng)物成像質(zhì)量控制的指導(dǎo)，使用幻像建立質(zhì)量控制計(jì)劃，可以標(biāo)準(zhǔn)化多中心研究或多掃描儀的圖像質(zhì)量參數(shù)。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，需要解決由于動(dòng)物處理引起的額外復(fù)雜性，以確保標(biāo)準(zhǔn)化的成像程序。實(shí)施標(biāo)準(zhǔn)化的動(dòng)物神經(jīng)成像協(xié)議將促進(jìn)動(dòng)物群體成像努力以及元分析和復(fù)制研究，提高研究結(jié)果的可比性和可靠性。細(xì)胞核熒光染料DIR動(dòng)物成像技術(shù)不僅在醫(yī)學(xué)研究中具有重要應(yīng)用，還可以拓展到其他領(lǐng)域。

濃度測(cè)量方法：文獻(xiàn)12提出了一種簡(jiǎn)單而通用的測(cè)量活細(xì)胞內(nèi)熒光標(biāo)記目標(biāo)分子的細(xì)胞內(nèi)濃度的方法。該方法基于染料熒光與量子產(chǎn)率和分子數(shù)量成正比的常識(shí)，通過(guò)已知濃度的一種染料和未知濃度的另一種染料的熒光比例以及特定的比例系數(shù)來(lái)確定未知染料的濃度。例如，在測(cè)量神經(jīng)元中熒光標(biāo)記的蛋白質(zhì)濃度時(shí)，通過(guò)這種方法可以進(jìn)行快速、廉價(jià)且可靠的定量分析13。自組織狀態(tài)空間模型的應(yīng)用：文獻(xiàn)13提出了一種同時(shí)測(cè)量熒光強(qiáng)度和熒光信號(hào)的方法來(lái)估算細(xì)胞內(nèi)Ca探針的濃度，并提出了細(xì)胞內(nèi)Ca?（2+）動(dòng)力學(xué)、膜電流測(cè)量過(guò)程和熒光信號(hào)強(qiáng)度測(cè)量過(guò)程被描述為狀態(tài)空間模型，進(jìn)而擴(kuò)展為自組織狀態(tài)空間模型，用粒子濾波法進(jìn)行估計(jì)，通過(guò)數(shù)值實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了該方法的有效性，可以估計(jì)細(xì)胞內(nèi)鈣離子指示劑染料的濃度和鈣離子濃度的時(shí)間過(guò)程。

影響成像的可重復(fù)性便于縱向研究：在動(dòng)物成像研究中，常常需要對(duì)同一動(dòng)物進(jìn)行多次成像，以觀(guān)察疾病的發(fā)展過(guò)程或***效果。穩(wěn)定的熒光染料能夠在多次成像中保持相對(duì)一致的熒光信號(hào)，便于進(jìn)行縱向研究。例如，在穩(wěn)定和長(zhǎng)效熒光標(biāo)記皮質(zhì)脊髓神經(jīng)元的研究中，將熒光染料Fluoro-Red和Fluoro-Green注射到新生大鼠的頸脊髓中，在固定的腦切片中，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后仍能觀(guān)察到***的熒光信號(hào)，表明這些染料在一定時(shí)間內(nèi)具有較好的穩(wěn)定性，適用于病理生理學(xué)和切片膜片鉗研究6。如果熒光染料不穩(wěn)定，每次成像的結(jié)果可能會(huì)有較大差異，難以進(jìn)行有效的縱向研究。確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠：穩(wěn)定的熒光染料可以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和可重復(fù)性。在不同的實(shí)驗(yàn)條件下，穩(wěn)定的熒光染料能夠發(fā)出相對(duì)穩(wěn)定的熒光信號(hào)，使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加可靠。例如，在新型近紅外熒光染料的研究中，通過(guò)摻入熒光染料骨架來(lái)提高染料的穩(wěn)定性，以便長(zhǎng)期觀(guān)察生物功能1。如果熒光染料不穩(wěn)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能會(huì)受到染料自身變化的影響，導(dǎo)致結(jié)果不可靠，難以重復(fù)。綜上所述，熒光染料的穩(wěn)定性對(duì)動(dòng)物成像結(jié)果有著重要的影響。穩(wěn)定的熒光染料能夠提高成像的準(zhǔn)確性、清晰度和可重復(fù)性，為動(dòng)物成像研究提供更加可靠的技術(shù)支持。將染料進(jìn)行多次熱循環(huán)，觀(guān)察其熒光性能是否發(fā)生變化。

一、化學(xué)結(jié)構(gòu)不同的化學(xué)結(jié)構(gòu)會(huì)導(dǎo)致熒光染料具有不同的穩(wěn)定性。例如：含雜環(huán)結(jié)構(gòu)的熒光染料：一些研究表明，含有苯并咪唑、苯并噻唑和苯并惡唑等雜環(huán)芳香染料修飾的殼聚糖衍生物具有良好的熱穩(wěn)定性和抗紫外輻射性能2。這是因?yàn)殡s環(huán)結(jié)構(gòu)可能會(huì)影響染料的電子分布和分子間相互作用，從而提高其穩(wěn)定性。具有特定取代基的染料：五甲川菁熒光染料中位引入電子給體對(duì)氨基苯或?qū)αu基苯后，具有較高的光穩(wěn)定性9。氨基降低了菁染料分子的激發(fā)態(tài)壽命，光穩(wěn)定性與激發(fā)態(tài)壽命成負(fù)相關(guān)。這說(shuō)明特定的取代基可以改變?nèi)玖系墓夥€(wěn)定性。二、制備方法制備方法也會(huì)對(duì)熒光染料的穩(wěn)定性產(chǎn)生影響。例如：濕磨法制備分散熒光染料色漿：以苯并吡喃類(lèi)分散熒光染料和萘磺酸類(lèi)陰離子分散劑為原料，通過(guò)濕磨法制備分散熒光染料色漿。研究發(fā)現(xiàn)，隨研磨時(shí)間延長(zhǎng)，分散熒光染料色漿的粒徑和熒光強(qiáng)度均有所降低。但分散熒光桃紅BG染料色漿離心穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性較好，更加適用于噴墨印花墨水的配制。多模態(tài)融合成像動(dòng)物成像技術(shù)的一個(gè)重要發(fā)展方向是多模態(tài)融合成像。上海熒光染料DIL

熒光染料在細(xì)胞內(nèi)離子濃度測(cè)量中起著重要的作用，不同種類(lèi)的熒光染料在測(cè)量細(xì)胞內(nèi)離子濃度時(shí)存在具體差異。免疫熒光熒光染料細(xì)胞膜

神經(jīng)特異性熒光染料：噁嗪類(lèi)熒光染料YQN-3能夠精細(xì)定位并識(shí)別出動(dòng)物（大鼠）的喉返神經(jīng)，從而在術(shù)中保留這些神經(jīng)的完整性8。這表明該類(lèi)熒光染料對(duì)特定的神經(jīng)組織具有較高的特異性。良好的穩(wěn)定性可以確保在動(dòng)物成像過(guò)程中始終保持對(duì)特定神經(jīng)部位的準(zhǔn)確識(shí)別和定位，為手術(shù)操作提供可靠的指導(dǎo)。如果穩(wěn)定性不佳，可能會(huì)導(dǎo)致成像部位的特異性降低，出現(xiàn)錯(cuò)誤定位或無(wú)法清晰顯示目標(biāo)神經(jīng)的情況。熒光染料標(biāo)記的氧化鐵磁性納米顆粒（MNP）：使用雙重?zé)晒馊玖蠘?biāo)記的MNP，其中附著在**（DY-730）上的染料在小鼠施用后的一天，其熒光在肝臟和脾臟中較為突出，但此后的時(shí)間點(diǎn)不明顯。相反，在體內(nèi)粘附到PEG涂層上的染料Dy-555的熒光較為穩(wěn)定14。這說(shuō)明不同部位的熒光染料穩(wěn)定性差異會(huì)影響對(duì)特定***（如肝臟和脾臟）的成像特異性。穩(wěn)定性好的染料能夠更準(zhǔn)確地反映目標(biāo)***的情況，而穩(wěn)定性差的染料可能會(huì)導(dǎo)致成像結(jié)果的不確定性，影響對(duì)動(dòng)物體內(nèi)特定部位的準(zhǔn)確判斷。免疫熒光熒光染料細(xì)胞膜