選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑陽離子脂質(zhì)體：如LipofectamineTM2000等陽離子脂質(zhì)體是常用的轉(zhuǎn)染試劑。通過優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，如轉(zhuǎn)染前細胞融合度、質(zhì)粒質(zhì)量與脂質(zhì)體體積比及轉(zhuǎn)染時間等，可以提高轉(zhuǎn)染效率。例如，在脂質(zhì)體介導RNA干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染雞成骨細胞的試驗中，當轉(zhuǎn)染前細胞融合達到90％以上，質(zhì)粒DNA與脂質(zhì)體比例為1:2.5時轉(zhuǎn)染效率比較高，并且在轉(zhuǎn)染后48h轉(zhuǎn)染效果比較好，對細胞的毒性作用較小4。二、利用天然陽離子肽混合物——魚精蛋白作為穩(wěn)定劑和增強劑：魚精蛋白不僅可以作為肝素的中和藥物和緩釋胰島素配方中的化合物，還可以用于核酸的細胞遞送。自***作為轉(zhuǎn)染增強劑使用以來，魚精蛋白已被***用作RNA遞送的穩(wěn)定劑。它能保護RNA免受生物系統(tǒng)內(nèi)的降解，并增強其對細胞的穿透能力。例如，魚精蛋白穩(wěn)定的RNA遞送系統(tǒng)可以根據(jù)***目標進行調(diào)整，如與靶向抗體融合實現(xiàn)精確遞送、消化成細胞穿透肽提高轉(zhuǎn)染效率或與功能性聚合物非共價混合等。陽離子 RNA 轉(zhuǎn)染試劑在結(jié)合 RNA 分子機制上存在多種差異。甘肅polyplus轉(zhuǎn)染試劑

轉(zhuǎn)染時間對奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細胞轉(zhuǎn)染的影響：在奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細胞中，應(yīng)用帶有FAM標記的miRNA-185mimics為報告基因，檢測兩種不同轉(zhuǎn)染試劑（LipofectamineRNAiMAX與Lipofectamine2000）在細胞接種不同時間后的轉(zhuǎn)染效率33。結(jié)果顯示，無論使用哪種轉(zhuǎn)染試劑，12h的轉(zhuǎn)染效率均極***高于18、24h，LipofectamineRNAiMAX各時間點的轉(zhuǎn)染效率均極***高于Lipofectamine2000。并且，使用LipofectamineRNAiMAX作為轉(zhuǎn)染試劑時，12h的熒光強度也比較高。這說明在奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細胞中，選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑和轉(zhuǎn)染時間可以提高轉(zhuǎn)染效率。同時，該研究未明確轉(zhuǎn)染對細胞死亡的影響，但可以進一步研究不同轉(zhuǎn)染條件下細胞的存活率，以確定在提高轉(zhuǎn)染效率的同時降低細胞死亡的比較好條件。鄭州轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的凍融被認為是另一個可能影響轉(zhuǎn)染效率的潛在因素。

RNA電穿孔高效轉(zhuǎn)染原代淋巴細胞：使用體外轉(zhuǎn)錄的mRNA通過電穿孔可以實現(xiàn)高基因轉(zhuǎn)染效率和低轉(zhuǎn)染相關(guān)毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉(zhuǎn)染的受激原代人和鼠T淋巴細胞中觀察到90％以上的轉(zhuǎn)基因表達和80％以上的活細胞。GFPRNA對未刺激的人PBMC或鼠脾細胞進行電穿孔，分別產(chǎn)生95％和56％的GFP?細胞。此外，基因表達迅速且持久，對經(jīng)過RNA電穿孔的T淋巴細胞未觀察到不良影響7。五、優(yōu)化共轉(zhuǎn)染方法整合共轉(zhuǎn)染和平行共轉(zhuǎn)染：研究不同的共轉(zhuǎn)染和連續(xù)轉(zhuǎn)染方法，特別是體外轉(zhuǎn)錄信使RNA（IVTmRNA）。對于在納米載體形成之前預(yù)混合的IVTmRNAs（整合共轉(zhuǎn)染）和同時用單獨形成的納米載體轉(zhuǎn)染細胞（平行共轉(zhuǎn)染），分析決定共轉(zhuǎn)染效率的定量參數(shù)。同時遞送siRNA和mRNA也表明整合方法的比較高共轉(zhuǎn)染效率，但由于兩個**運營實體的峰值輸出在動力學上不同，連續(xù)交付的效率比較高。

優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件MOI值對Lentivirus載體轉(zhuǎn)染許旺細胞的影響：以Lentivirus三質(zhì)粒系統(tǒng)構(gòu)建病毒載體，在體外對原代大鼠許旺細胞進行轉(zhuǎn)染，研究不同MOI值（***復數(shù)）對轉(zhuǎn)染效率的影響32。結(jié)果顯示，在病毒轉(zhuǎn)染3天后，各不同MOI值的培養(yǎng)孔中開始出現(xiàn)少量熒光反應(yīng)，第5天時熒光數(shù)量明顯增多，第7天達到高峰，第9天與第7天變化不明顯。從細胞轉(zhuǎn)染效率來看，不同的MOI值效果不同，MOI值為5和10時轉(zhuǎn)染效率較高。這表明在使用Lentivirus載體轉(zhuǎn)染許旺細胞時，優(yōu)化MOI值可以提高轉(zhuǎn)染效率。同時，未提及該轉(zhuǎn)染過程對細胞死亡的影響，但可以通過進一步的實驗，如細胞活性檢測等，來確定在提高轉(zhuǎn)染效率的同時對細胞死亡的影響。由于CRISPR/Cas的發(fā)現(xiàn)，基因組編輯領(lǐng)域經(jīng)歷了一場變革。

考慮實驗?zāi)康暮蛻?yīng)用場景不同的實驗?zāi)康暮蛻?yīng)用場景可能需要不同類型的轉(zhuǎn)染試劑。***應(yīng)用：如果轉(zhuǎn)染試劑用于基因***或藥物研發(fā)等應(yīng)用，那么需要選擇具有良好生物相容性和安全性的試劑。在安全有效的遞送mRNA使用改性PEI基脂質(zhì)聚合物的研究中，探索了All-Fect和Leu-FectC作為新型轉(zhuǎn)染試劑，這些試劑具有優(yōu)異的生物相容性、高效的遞送能力和強大的溶酶體逃逸能力，可直接增加mRNA穩(wěn)定性并促進高效基因翻譯，適用于基因***等應(yīng)用4?；A(chǔ)研究：對于基礎(chǔ)研究實驗，可能更注重轉(zhuǎn)染效率和實驗的可重復性。在不同轉(zhuǎn)染方式用于modRNA轉(zhuǎn)染人脂肪干細胞的初步研究中，比較了不同轉(zhuǎn)染方式的轉(zhuǎn)染效率和蛋白表達情況，以及在體內(nèi)促進血管再生的效果，為基礎(chǔ)研究提供了參考10。綜上所述，選擇**適合的RNA轉(zhuǎn)染試劑需要綜合考慮轉(zhuǎn)染效率、細胞毒性、RNA需求、血清兼容性、多因子轉(zhuǎn)染能力以及實驗?zāi)康暮蛻?yīng)用場景等多個因素。在選擇轉(zhuǎn)染試劑時，可以參考已有的研究文獻，進行預(yù)實驗以評估不同試劑的性能，并根據(jù)實驗需求和條件選擇**合適的轉(zhuǎn)染試劑?；瘜W轉(zhuǎn)染的效率可能取決于幾個因素，如使用的試劑類型、靶細胞的來源和性質(zhì)，以及選擇的DNA與試劑比例。轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體

在聚葡萄糖、精胺(PG)偶聯(lián)物和第四代聚酰胺樹狀大分子(PAMAM G4)的幫助下。甘肅polyplus轉(zhuǎn)染試劑

對于容易轉(zhuǎn)染的貼壁細胞如人胚腎細胞（HEK293）和人宮頸*細胞（HeLa），脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率相對較高。這些細胞具有較強的內(nèi)吞能力，能夠有效地攝取脂質(zhì)體-核酸復合物。例如，在標準的轉(zhuǎn)染條件下，HEK293細胞的轉(zhuǎn)染效率可以達到50%-70%。而對于一些難轉(zhuǎn)染的貼壁細胞，如原代肝細胞和某些神經(jīng)細胞，其轉(zhuǎn)染效率較低。這是因為它們的細胞膜結(jié)構(gòu)比較復雜，可能存在較厚的糖萼或者緊密的細胞間連接，阻礙了脂質(zhì)體-核酸復合物的進入。例如，原代肝細胞的轉(zhuǎn)染效率可能只有10%-20%。

一般來說，貼壁細胞對脂質(zhì)體的耐受性相對較好。但是，在高濃度脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的情況下，即使是耐受性好的細胞也會受到影響。例如，HeLa細胞在高濃度脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染時，可能會出現(xiàn)細胞膜完整性受損，表現(xiàn)為細胞內(nèi)乳酸脫氫酶（LDH）釋放增加，細胞的代謝活動也會受到一定程度的干擾。對于難轉(zhuǎn)染的貼壁細胞，由于其本身比較脆弱，較低濃度的脂質(zhì)體也可能產(chǎn)生明顯的細胞毒性。比如原代神經(jīng)細胞，脂質(zhì)體可能會破壞其精細的神經(jīng)突起結(jié)構(gòu)，影響細胞的正常生理功能。 甘肅polyplus轉(zhuǎn)染試劑