檢測(cè)EPCAM、MUC16兩種抗原在上皮性卵巢*循環(huán)腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的相關(guān)性。方法分別用羧基磁珠制備EPCAM、MUC16兩種免疫磁珠,分3組:EPCAM免疫磁珠檢測(cè)組、MUC16免疫磁珠檢測(cè)組、2種磁珠均等混合檢測(cè)組。對(duì)來(lái)源于同一患者的等體積外周血樣本進(jìn)行循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè),HE染色后鑒定檢測(cè)值。結(jié)果EPCAM免疫磁珠、MUC16免疫磁珠、EPCAM+MUC16免疫磁珠對(duì)同體積、同來(lái)源樣本檢測(cè)值分別為22±11、14±6、28±12個(gè)腫瘤細(xì)胞(P0.05),說(shuō)明檢測(cè)效率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論MUC16與EPCAM在上皮性卵巢*循環(huán)腫瘤細(xì)胞中**表達(dá)且存在差異,因此增加MUC16這一***標(biāo)志物可有效提高上皮性卵巢*CTCs檢出數(shù)量。BEENbio ProteinA/G Co-IP&CHIP磁珠全國(guó)招商代理。陜西anti-HA COIP免疫磁珠銷(xiāo)售

常見(jiàn)問(wèn)題及對(duì)策3：如何避免磁珠在儲(chǔ)存或使用過(guò)程中可能出現(xiàn)的聚集情況？磁珠應(yīng)保存在2～8℃，使用時(shí)應(yīng)避免由于污染而導(dǎo)致的不可逆聚集，或因干燥而導(dǎo)致的聚集。磁珠在低pH的洗脫緩沖液中發(fā)生聚集屬于正?，F(xiàn)象，不影響磁珠的正常使用。在Bindingbuffer和Elutionbuffer中添加終濃度為0.1%(v/v)的非離子型去垢劑（如NP-40、Tween-20或TritonX-100）可有效防止磁珠聚集。經(jīng)過(guò)低pH洗脫操作的磁珠可以用結(jié)合緩沖液洗滌至中性，然后用含有0.1%(v/v)Tween-20的Trisbuffer(pH7.5)振蕩重懸磁珠，并用超聲波水浴處理2min，即可使磁珠恢復(fù)均勻狀態(tài)，以上處理均不影響磁珠的抗體結(jié)合效率。4：如何解決磁珠易粘附管壁的現(xiàn)象？建議使用低吸附率的耗材進(jìn)行磁珠操作。另外，在緩沖液中添加0.01%～0.1%(v/v)的非離子型去垢劑（如NP-40、Tween-20或TritonX-100）可以有效降低磁珠對(duì)耗材的粘附。天津anti-Flag COIP免疫磁珠銷(xiāo)售免疫磁珠的優(yōu)點(diǎn)有很多。

核酸提取磁珠通過(guò)對(duì)磁珠進(jìn)行一定的包被（如硅基、氨基、羧基等），從而可以實(shí)現(xiàn)對(duì)核酸的高通量、自動(dòng)化提取，這一技術(shù)產(chǎn)生于20世紀(jì)80年代，已經(jīng)有了成熟的試劑盒并形成為產(chǎn)業(yè)。隨著基因檢測(cè)、個(gè)性化給藥、產(chǎn)前診斷等的普及，在生物行業(yè)各領(lǐng)域都追求高通量、自動(dòng)化的***，傳統(tǒng)DNA提取方法的局限愈來(lái)愈明顯，而磁珠法DNA提取的優(yōu)勢(shì)則愈來(lái)愈明顯：①能夠?qū)崿F(xiàn)自動(dòng)化、大批量操作，已有96孔的核酸自動(dòng)提取儀，用一個(gè)樣品的提取時(shí)間即可實(shí)現(xiàn)對(duì)96個(gè)樣品的處理，符合生物學(xué)高通量的操作要求，使得傳染性疾病爆發(fā)時(shí)能夠進(jìn)行快速及時(shí)的應(yīng)對(duì)，這一特點(diǎn)使得傳統(tǒng)方法望塵莫及；②操作簡(jiǎn)單、用時(shí)短，整個(gè)提取流程只有四步，大多可以在36-40分鐘內(nèi)完成；③安全無(wú)毒，不使用傳統(tǒng)方法中的苯、氯仿等有毒試劑，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作人員的傷害減少到**少，完全符合現(xiàn)代環(huán)保理念；④磁珠與核酸的特異性結(jié)合使得提取的核酸純度高、濃度大。

抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠,并進(jìn)行初步應(yīng)用。方法采用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備抗熒光素單克隆抗體;制備腹水,經(jīng)50%硫酸銨粗提后,再經(jīng)陰離子交換樹(shù)脂DE52進(jìn)一步純化單克隆抗體;采用氧化共沉淀法制備納米磁性粒子;乳液聚合法制備羧基磁性微球;用碳二亞胺將抗熒光素單克隆抗體共價(jià)偶聯(lián)于磁性微球表面,制備抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠。用制備的免疫磁珠檢測(cè)乙肝表面抗原,并與市售ELISA試劑盒的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果共獲得5株雜交瘤細(xì)胞株,其中1F12細(xì)胞株分泌的抗體效價(jià)、相對(duì)親和力較高,特異性較好;純化的1F12株單抗的純度達(dá)95%,蛋白含量為2.4mg/ml,ELISA效價(jià)為106,相對(duì)親和力為0.2mg/L,與FITC標(biāo)記的BSA可特異性結(jié)合;納米磁性粒子的平均粒徑為150nm,鐵含量為71.63%;羧基磁性微球的平均粒徑為210nm,羧基含量約為2.15mmol/g;每克羧基磁性微球可結(jié)合抗熒光素單克隆抗體約12mg,制備的免疫磁珠可有效結(jié)合熒光素標(biāo)記的蛋白。應(yīng)用抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠檢測(cè)乙型肝炎表面抗原的靈敏度高于ELISA試劑,檢測(cè)限達(dá)0.1ng/ml。結(jié)論成功制備了抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠,其具有應(yīng)用于免疫檢測(cè)分析的價(jià)值。上海普平生物科技有限公司專(zhuān)業(yè)致力于免疫磁珠直銷(xiāo)。

免疫共沉淀（COIP）實(shí)驗(yàn)過(guò)程（1）轉(zhuǎn)染后24-48h可收獲細(xì)胞，加入適量細(xì)胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑），冰上裂解30min,細(xì)胞裂解液于4°C，最大轉(zhuǎn)速離心30min后取上清；（2）取少量裂解液以備Westernblot分析，剩余裂解液加1μg相應(yīng)的抗體加入到細(xì)胞裂解液，4°C緩慢搖晃孵育過(guò)夜；（3）取10μlproteinA瓊脂糖珠，用適量裂解緩沖液洗3次，每次3,000rpm離心3min；（4）將預(yù)處理過(guò)的10μlproteinA瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過(guò)夜的細(xì)胞裂解液中4°C緩慢搖晃孵育2-4h，使抗體與proteinA瓊脂糖珠耦聯(lián)；（5）免疫沉淀反應(yīng)后，在4°C以3,000rpm速度離心3min，將瓊脂糖珠離心至管底；將上清小心吸去，瓊脂糖珠用1ml裂解緩沖液洗3－4次；***加入15μl的2×SDS上樣緩沖液，沸水煮5分鐘；（6）SDS-PAGE,Westernblotting或質(zhì)譜儀分析。注意的問(wèn)題：（1）細(xì)胞裂解采用溫和的裂解條件，不能破壞細(xì)胞內(nèi)存在的所有蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用，多采用非離子變性劑（NP40或TritonX-100)。每種細(xì)胞的裂解條件是不一樣的，通過(guò)經(jīng)驗(yàn)確定。不能用高濃度的變性劑（0.2%SDS)，細(xì)胞裂解液中要加各種酶抑制劑，如商品化的cocktailer。（2）使用明確的抗體，可以將幾種抗體共同使用。（3）使用對(duì)照抗體：上海普平生物科技有限公司銷(xiāo)售的免疫磁珠質(zhì)量很好。陜西anti-HA COIP免疫磁珠銷(xiāo)售

免疫磁珠的主要特點(diǎn)有很多。陜西anti-HA COIP免疫磁珠銷(xiāo)售

分離轉(zhuǎn)基因小鼠骨髓造血干細(xì)胞.運(yùn)用針對(duì)小鼠干細(xì)胞表面特異表達(dá)的干細(xì)胞抗原-1(stemcellantigen-1,Sca-1)的單克隆抗體和包被于磁顆粒表面的第二抗體,采用磁吸附細(xì)胞分選方法(MACS)分離小鼠骨髓造血干細(xì)胞,用流式細(xì)胞術(shù)(FACS)檢測(cè)MACS分離后骨髓細(xì)胞中干細(xì)胞(Sca-1陽(yáng)性細(xì)胞)比例,監(jiān)測(cè)細(xì)胞分選效果.結(jié)果顯示MACS分離后骨髓細(xì)胞中Sca-1陽(yáng)性細(xì)胞所占比例達(dá)85%以上,涂片觀(guān)察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞組成和細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征與FACS所得結(jié)果一致.MACS可以從轉(zhuǎn)基因小鼠全骨髓細(xì)胞中分離出Sca-1陽(yáng)性的骨髓造血干細(xì)胞,細(xì)胞純度可達(dá)85%以上.陜西anti-HA COIP免疫磁珠銷(xiāo)售

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