利用免疫磁珠從SD大鼠坐骨神經(jīng)分離培養(yǎng)獲得大量,高純度雪旺細(xì)胞的方法.[方法]選用4-7dSD大鼠,無菌條件下取雙側(cè)坐骨神經(jīng),解剖鏡下剝離去除神經(jīng)外膜,獲得神經(jīng)束,將神經(jīng)束剪碎至1mm3大小.采用雙酶2次消化法消化,胎牛血清中止消化后,離心并加入DF12培養(yǎng)液培養(yǎng).7d后應(yīng)用免疫磁珠法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行純化培養(yǎng),培養(yǎng)2d后進(jìn)行傳代接種.培養(yǎng)過程中對(duì)細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,計(jì)數(shù)及活力測(cè)定;MTY法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,采用免疫細(xì)胞化學(xué)熒光染色對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定并且計(jì)算所得細(xì)胞純度.[結(jié)果]分離培養(yǎng)所得細(xì)胞即為雪旺細(xì)胞;采用免疫磁珠法能對(duì)培養(yǎng)所得雪旺細(xì)胞進(jìn)行純化.純化后雪旺細(xì)胞活力為96%±0.5%,純度98%±1.1%,培養(yǎng)2d后就可以傳代.[結(jié)論]免疫磁珠法可以用于雪旺細(xì)胞的純化培養(yǎng),所得雪旺細(xì)胞純度高,活力強(qiáng),能滿足組織工程人工神經(jīng)的需要.根據(jù)您的具體需求選擇不同的免疫磁珠系列。江蘇anti-HA COIP免疫磁珠送貨上門

免疫共沉淀（COIP）實(shí)驗(yàn)過程（1）轉(zhuǎn)染后24-48h可收獲細(xì)胞，加入適量細(xì)胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑），冰上裂解30min,細(xì)胞裂解液于4°C，最大轉(zhuǎn)速離心30min后取上清；（2）取少量裂解液以備Westernblot分析，剩余裂解液加1μg相應(yīng)的抗體加入到細(xì)胞裂解液，4°C緩慢搖晃孵育過夜；（3）取10μlproteinA瓊脂糖珠，用適量裂解緩沖液洗3次，每次3,000rpm離心3min；（4）將預(yù)處理過的10μlproteinA瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過夜的細(xì)胞裂解液中4°C緩慢搖晃孵育2-4h，使抗體與proteinA瓊脂糖珠耦聯(lián)；（5）免疫沉淀反應(yīng)后，在4°C以3,000rpm速度離心3min，將瓊脂糖珠離心至管底；將上清小心吸去，瓊脂糖珠用1ml裂解緩沖液洗3－4次；***加入15μl的2×SDS上樣緩沖液，沸水煮5分鐘；（6）SDS-PAGE,Westernblotting或質(zhì)譜儀分析。注意的問題：（1）細(xì)胞裂解采用溫和的裂解條件，不能破壞細(xì)胞內(nèi)存在的所有蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用，多采用非離子變性劑（NP40或TritonX-100)。每種細(xì)胞的裂解條件是不一樣的，通過經(jīng)驗(yàn)確定。不能用高濃度的變性劑（0.2%SDS)，細(xì)胞裂解液中要加各種酶抑制劑，如商品化的cocktailer。（2）使用明確的抗體，可以將幾種抗體共同使用。（3）使用對(duì)照抗體：浙江anti-Myc COIP免疫磁珠送貨上門上海普平生物科技有限公司主營(yíng)產(chǎn)品很多，其中免疫磁珠銷量很好。

常見問題及對(duì)策3：如何避免磁珠在儲(chǔ)存或使用過程中可能出現(xiàn)的聚集情況？磁珠應(yīng)保存在2～8℃，使用時(shí)應(yīng)避免由于污染而導(dǎo)致的不可逆聚集，或因干燥而導(dǎo)致的聚集。磁珠在低pH的洗脫緩沖液中發(fā)生聚集屬于正常現(xiàn)象，不影響磁珠的正常使用。在Bindingbuffer和Elutionbuffer中添加終濃度為0.1%(v/v)的非離子型去垢劑（如NP-40、Tween-20或TritonX-100）可有效防止磁珠聚集。經(jīng)過低pH洗脫操作的磁珠可以用結(jié)合緩沖液洗滌至中性，然后用含有0.1%(v/v)Tween-20的Trisbuffer(pH7.5)振蕩重懸磁珠，并用超聲波水浴處理2min，即可使磁珠恢復(fù)均勻狀態(tài)，以上處理均不影響磁珠的抗體結(jié)合效率。4：如何解決磁珠易粘附管壁的現(xiàn)象？建議使用低吸附率的耗材進(jìn)行磁珠操作。另外，在緩沖液中添加0.01%～0.1%(v/v)的非離子型去垢劑（如NP-40、Tween-20或TritonX-100）可以有效降低磁珠對(duì)耗材的粘附。

CoIP ：實(shí)驗(yàn)原理一切從 CoIP 的原理談起：免疫共沉淀是一種以抗體和抗原識(shí)別專一性為基礎(chǔ)，用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。實(shí)驗(yàn)步驟第一步：樣品制備首先進(jìn)行樣品制備，以提取出想要研究的蛋白，由于不同類型的細(xì)胞裂解條件有所差異，這里不展開介紹。注意事項(xiàng)：細(xì)胞裂解要采用溫和的裂解條件，避免破壞細(xì)胞內(nèi)存在的蛋白間相互作用，裂解、洗滌時(shí)需使用非變性裂解液，如 NP-40 和 Triton X-100。此外，由于不同細(xì)胞裂解條件不一樣，建議通過預(yù)實(shí)驗(yàn)來確定比較好條件。第二步：固定抗體在共沉淀之前，先將固相基質(zhì)與抗體共同孵育，從而使兩者結(jié)合，常用的固相基質(zhì)有瓊脂糖 Agarose 和磁珠 Magnetic beads。瓊脂糖 Agarose 具有簡(jiǎn)單易用，直徑大，結(jié)合力強(qiáng)，多孔易吸附的特點(diǎn)；磁珠具有直徑小，背景低，抗體消耗少的特點(diǎn)，但操作時(shí)需借助磁力架。注意事項(xiàng)：抗體的選擇十分重要，選經(jīng)過 IP 驗(yàn)證的抗體，可以減少假陽(yáng)性概率。同時(shí)，要注意抗體/緩沖液的比例，抗體稀釋過度不利于后續(xù)抗原抗體結(jié)合；而抗體過多就不能完全沉降在固相基質(zhì)上，殘存于上清。操作時(shí)，為了避免損傷 beads，使用大口徑或截短***頭進(jìn)行加樣。上海普平生物科技有限公司專業(yè)致力于免疫磁珠直銷。

免疫磁珠法(MiniMACS)在分離純化外周血CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞亞群中的應(yīng)用.方法:應(yīng)用密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheralbloodmononucleatecells,PBMC),采用MiniMACS分別分離和純化39例標(biāo)本外周血PBMC中的CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞,并經(jīng)流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞純度和臺(tái)盼藍(lán)染色的方法對(duì)細(xì)胞活力進(jìn)行評(píng)估.結(jié)果:MiniMACS分離外周血CD4+T淋巴細(xì)胞前,后細(xì)胞純度分別為(37.38±5.74)%,(97.75±1.03)%(P〈0.001),CD8+T淋巴細(xì)胞分離純化前后細(xì)胞純度分別為(20.11±6.83)%,(96.85±1.86)%(P〈0.001);外周血分離前PBMC細(xì)胞活力為(97.66±2.73)%,純化為CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞后細(xì)胞活力分別為(97.44±3.08)%,(98.05±2.92)%(P〉0.05).結(jié)論:MiniMACS可以高度富集CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞且不改變細(xì)胞的活力.您了解免疫磁珠的優(yōu)勢(shì)嗎？陜西anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠銷售

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免疫磁珠法分離,并培養(yǎng)人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的方法.方法將術(shù)中取得的腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本,通過剪切,消化和吹打成單細(xì)胞懸液,篩網(wǎng)過濾,免疫磁珠分選試劑盒分選出CD133^+細(xì)胞,用神經(jīng)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)法培養(yǎng)出具有單細(xì)胞克隆能力的細(xì)胞球,取第3代進(jìn)行誘導(dǎo)分化,分化前后用免疫細(xì)胞熒光化學(xué)方法鑒定**干細(xì)胞及分化后細(xì)胞.結(jié)果免疫磁珠分選出的CD133^+細(xì)胞,可懸浮生長(zhǎng)并形成神經(jīng)干細(xì)胞樣細(xì)胞球,有較強(qiáng)的增殖能力,干細(xì)胞標(biāo)志物巢蛋白(nestin)陽(yáng)性,分化后細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)元小管相關(guān)蛋白β-3(β-tubulin3)和星形膠質(zhì)細(xì)胞膠質(zhì)纖維酸性蛋白質(zhì)(GFAP)特異性抗原,而巢蛋白,CD133^+陰性,并具有**的核型.結(jié)論免疫磁珠分選法可避免原代培養(yǎng)中眾多細(xì)胞混雜生長(zhǎng)的發(fā)生,能夠從大量腫瘤細(xì)胞中分離出只占極少比例的**干細(xì)胞,細(xì)胞結(jié)合磁珠后在體外可以長(zhǎng)期培養(yǎng)和傳代,進(jìn)一步證實(shí)了**干細(xì)胞的存在,并為膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的研究奠定基礎(chǔ).江蘇anti-HA COIP免疫磁珠送貨上門

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