人腦**組織中分離,培養(yǎng),純化和鑒定腦**干細(xì)胞(BTSCs),探討CD133免疫磁珠分選方法獲取BTSCs的可行性及BTSCs的生物學(xué)特性.方法:留取人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤新鮮標(biāo)本,分離獲得腦腫瘤細(xì)胞.應(yīng)用CD133免疫磁珠分選方法純化BTSCs;流式細(xì)胞儀檢測分選陽性率;神經(jīng)球計(jì)數(shù)法分析CD133+/-亞群細(xì)胞神經(jīng)球形成情況;免疫熒光方法檢測CD133+/-亞群細(xì)胞表面神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)標(biāo)記物CD133,神經(jīng)巢蛋白(nestin)表達(dá)情況;檢測CD133+/-亞群細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)分化后細(xì)胞表面分化標(biāo)記物β-TubulinⅢ,GFAP表達(dá)情況.結(jié)果:CD133+亞群細(xì)胞具有干細(xì)胞特性,可形成明顯的神經(jīng)球,具有自我更新和明顯的增殖能力,并且NSCs標(biāo)記物CD133,nestin表達(dá)陽性,經(jīng)誘導(dǎo)分化后分化標(biāo)記物β-TubulinⅢ,GFAP表達(dá)陽性;CD133-亞群細(xì)胞無上述特性.結(jié)論:CD133免疫磁珠分選方法獲得的CD133+亞群細(xì)胞即為BTSCs,該方法可以得到高純度的BTSCs,可以用于BTSCs的實(shí)驗(yàn)研究.免疫磁珠的主要特點(diǎn)都有哪些呢？湖北蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠送貨上門

免疫磁珠細(xì)胞分選方法可以在幾分鐘內(nèi)從復(fù)雜的細(xì)胞混合物中分離出很高純度的細(xì)胞。把細(xì)胞用超級順磁性的免疫磁珠特異性地標(biāo)記，磁性標(biāo)記完后，把這些細(xì)胞通過一個(gè)放在強(qiáng)而穩(wěn)定磁場中的分選柱。分選柱里的基質(zhì)造成一個(gè)高梯度磁場。被磁性標(biāo)記的細(xì)胞滯留在柱里而未被標(biāo)記的細(xì)胞則流出。當(dāng)分選柱移出磁場后，滯留柱內(nèi)的磁性標(biāo)記細(xì)胞就可以被洗脫出來，這樣就完全可以獲得標(biāo)記和未標(biāo)記的兩個(gè)細(xì)胞組份。超順磁性的磁珠的體積很小，其直徑約為50nm，體積約小于真核細(xì)胞的一百萬份之一，可與病毒的大小相比。標(biāo)記細(xì)胞上的微型磁珠即使在掃描電鏡照片上也幾乎看不到。磁性抗體和磁性標(biāo)記物間的反應(yīng)可在幾分鐘內(nèi)完成。由于微型磁珠的體積極小，所以不會對細(xì)胞造成機(jī)械性壓力，而且使孵育時(shí)間短，操作過程快。免疫磁珠形成一個(gè)穩(wěn)定的膠體液，它們在磁場中既不沉淀又不凝聚。微型磁珠的大小和它的組成成份（氧化鐵和多糖）使其可被生物降解，且不會***細(xì)胞或影響細(xì)胞的功能和活力，細(xì)胞的生理功能也不變。磁珠不需要去除，因此，陽性分選出的細(xì)胞（即磁性標(biāo)記細(xì)胞）可立即用于分析和隨后的實(shí)驗(yàn)。江蘇COIP免疫磁珠哪家好免疫磁珠的主要特點(diǎn)有很多。

核酸提取磁珠通過對磁珠進(jìn)行一定的包被（如硅基、氨基、羧基等），從而可以實(shí)現(xiàn)對核酸的高通量、自動化提取，這一技術(shù)產(chǎn)生于20世紀(jì)80年代，已經(jīng)有了成熟的試劑盒并形成為產(chǎn)業(yè)。隨著基因檢測、個(gè)性化給藥、產(chǎn)前診斷等的普及，在生物行業(yè)各領(lǐng)域都追求高通量、自動化的***，傳統(tǒng)DNA提取方法的局限愈來愈明顯，而磁珠法DNA提取的優(yōu)勢則愈來愈明顯：①能夠?qū)崿F(xiàn)自動化、大批量操作，已有96孔的核酸自動提取儀，用一個(gè)樣品的提取時(shí)間即可實(shí)現(xiàn)對96個(gè)樣品的處理，符合生物學(xué)高通量的操作要求，使得傳染性疾病爆發(fā)時(shí)能夠進(jìn)行快速及時(shí)的應(yīng)對，這一特點(diǎn)使得傳統(tǒng)方法望塵莫及；②操作簡單、用時(shí)短，整個(gè)提取流程只有四步，大多可以在36-40分鐘內(nèi)完成；③安全無毒，不使用傳統(tǒng)方法中的苯、氯仿等有毒試劑，對實(shí)驗(yàn)操作人員的傷害減少到**少，完全符合現(xiàn)代環(huán)保理念；④磁珠與核酸的特異性結(jié)合使得提取的核酸純度高、濃度大。

   免疫磁珠分離成人骨髓中STRO-1^+陽性細(xì)胞,獲得同質(zhì)性骨髓基質(zhì)干細(xì)胞.方法:實(shí)驗(yàn)于2004-06/2005-06在東南大學(xué)修復(fù)重建外科研究所實(shí)驗(yàn)室完成.采集正常自愿獻(xiàn)髓者骨髓,淋巴細(xì)胞分離液體離心純化分離后利用免疫磁珠分離出STRO-1^+細(xì)胞,研究其生長曲線,體外擴(kuò)增能力,集落形成能力,細(xì)胞表型,細(xì)胞周期,成骨能力.結(jié)果:①利用免疫磁珠可從成人骨髓中獲取STRO-1^+細(xì)胞.經(jīng)體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)STRO-1^+細(xì)胞貼壁生長,相差顯微鏡下STRO-1^+細(xì)胞呈成纖維細(xì)胞梭形外觀.②生長曲線可分為細(xì)胞生長延滯期,對數(shù)生長期及穩(wěn)定期,細(xì)胞倍增時(shí)間為57h.③STRO-1^+細(xì)胞可以在體外擴(kuò)增12周左右,形成的成纖維細(xì)胞集落數(shù),處于細(xì)胞分裂期的細(xì)胞數(shù),擴(kuò)增倍數(shù)均低于傳統(tǒng)分離方法得到的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞.④經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測,STRO-1^+細(xì)胞穩(wěn)定地表達(dá)CD29,CD44,CD105,不表達(dá)造血細(xì)胞系的表面標(biāo)記CD14,CD34,CD45,HLA-DR.⑤經(jīng)成骨培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)STRO-1^+的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞具有很強(qiáng)的成骨分化能力.結(jié)論:利用免疫磁珠能夠從成人骨髓中快速分離,純化骨髓基質(zhì)干細(xì)胞,且具有高效,靈敏。免疫磁珠的好處有很多。

免疫共沉淀（COIP）實(shí)驗(yàn)過程（1）轉(zhuǎn)染后24-48h可收獲細(xì)胞，加入適量細(xì)胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑），冰上裂解30min,細(xì)胞裂解液于4°C，最大轉(zhuǎn)速離心30min后取上清；（2）取少量裂解液以備Westernblot分析，剩余裂解液加1μg相應(yīng)的抗體加入到細(xì)胞裂解液，4°C緩慢搖晃孵育過夜；（3）取10μlproteinA瓊脂糖珠，用適量裂解緩沖液洗3次，每次3,000rpm離心3min；（4）將預(yù)處理過的10μlproteinA瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過夜的細(xì)胞裂解液中4°C緩慢搖晃孵育2-4h，使抗體與proteinA瓊脂糖珠耦聯(lián)；（5）免疫沉淀反應(yīng)后，在4°C以3,000rpm速度離心3min，將瓊脂糖珠離心至管底；將上清小心吸去，瓊脂糖珠用1ml裂解緩沖液洗3－4次；***加入15μl的2×SDS上樣緩沖液，沸水煮5分鐘；（6）SDS-PAGE,Westernblotting或質(zhì)譜儀分析。注意的問題：（1）細(xì)胞裂解采用溫和的裂解條件，不能破壞細(xì)胞內(nèi)存在的所有蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用，多采用非離子變性劑（NP40或TritonX-100)。每種細(xì)胞的裂解條件是不一樣的，通過經(jīng)驗(yàn)確定。不能用高濃度的變性劑（0.2%SDS)，細(xì)胞裂解液中要加各種酶抑制劑，如商品化的cocktailer。（2）使用明確的抗體，可以將幾種抗體共同使用。（3）使用對照抗體：上海普平生物科技有限公司銷售免疫磁珠價(jià)格低廉。江蘇anti-Myc COIP免疫磁珠供應(yīng)商

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磁珠與抗體偶聯(lián)的比較好條件,制備抗單增李斯特菌免疫磁珠;將免疫磁珠與顯色培養(yǎng)法結(jié)合,初步建立起利用免疫磁珠分離技術(shù)對單增李斯特菌進(jìn)行分離鑒定的檢測方法.從而為食品中單增李斯特菌的檢測提供一種快速,高效和靈敏的檢測新方法.方法:以單增李斯特菌體作為免疫抗原,免疫新西蘭兔,獲得兔抗單增李斯特菌多克隆抗體,鑒定多抗活性以及與單增李斯特菌體的結(jié)合能力;用激光粒度儀和透射電鏡分析不同活性基團(tuán)修飾磁珠的粒徑大小和分散性,選擇性質(zhì)穩(wěn)定的磁珠用以制備免疫磁珠;設(shè)計(jì)正交試驗(yàn),摸索pH,溫度,時(shí)間對氨基修飾磁珠與多抗偶聯(lián)的影響,選擇比較好條件制備免疫磁珠并用于捕獲單增李斯特菌;設(shè)計(jì)不同的偶聯(lián)緩沖溶液,偶聯(lián)時(shí)間,偶聯(lián)溫度,通過比較羧基修飾磁珠與抗體偶聯(lián)后上清中剩余的抗體量來確定比較好偶聯(lián)條件,運(yùn)用制備的免疫磁珠對樣品中的單增李斯特菌進(jìn)行捕獲,并與顯色平板結(jié)合試驗(yàn),鑒定制備的免疫磁珠捕獲單增李斯特菌的能力.湖北蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠送貨上門

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