建立免疫磁珠法分離,并培養(yǎng)人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的方法.方法將術(shù)中取得的腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本,通過剪切、消化和吹打成單細(xì)胞懸液,篩網(wǎng)過濾,免疫磁珠分選試劑盒分選出CD133+細(xì)胞,用神經(jīng)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)法培養(yǎng)出具有單細(xì)胞克隆能力的細(xì)胞球,取第3代進(jìn)行誘導(dǎo)分化,分化前后用免疫細(xì)胞熒光化學(xué)方法鑒定**干細(xì)胞及分化后細(xì)胞.結(jié)果免疫磁珠分選出的CD133-細(xì)胞,可懸浮生長(zhǎng)并形成神經(jīng)干細(xì)胞樣細(xì)胞球,有較強(qiáng)的增殖能力,干細(xì)胞標(biāo)志物巢蛋白(nestin)陽(yáng)性,分化后細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)元小管相關(guān)蛋白β-3(β-tubulin3)和星形膠質(zhì)細(xì)胞膠質(zhì)纖維酸性蛋白質(zhì)(GFAP)特異性抗原,而巢蛋白、CD133陰性,并具有**的核型.結(jié)論免疫磁珠分選法可避免原代培養(yǎng)中眾多細(xì)胞混雜牛長(zhǎng)的發(fā)生,能夠從大量腫瘤細(xì)胞中分離出只占極少比例的**干細(xì)胞,細(xì)胞結(jié)合磁珠后在體外可以長(zhǎng)期培養(yǎng)和傳代,進(jìn)一步證實(shí)了**干細(xì)胞的存在,并為膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的研究奠定基礎(chǔ).免疫磁珠多種系列供您選擇。廣東anti-HA 免疫共沉淀免疫磁珠供應(yīng)商

免疫共沉淀（COIP）優(yōu)點(diǎn)（1）相互作用的蛋白質(zhì)都是經(jīng)翻譯后修飾的，處于天然狀態(tài)；（2）蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進(jìn)行的，可以避免人為的影響；（3）可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物。免疫共沉淀（COIP）缺點(diǎn)（1）可能檢測(cè)不到低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用；（2）兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接結(jié)合，而可能有第三者在中間起橋梁作用；（3）必須在實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)目的蛋白是什么，以選擇***檢測(cè)的抗體，所以，若預(yù)測(cè)不正確，實(shí)驗(yàn)就得不到結(jié)果，方法本身具有冒險(xiǎn)性。（4）靈敏度沒有親和色譜高。天津anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠經(jīng)銷商價(jià)格4折起一個(gè)好的免疫磁珠需要具備哪些特點(diǎn)您知道嗎？

COIP常見問題及對(duì)策1：如何提高抗體與磁珠結(jié)合效率?磁珠與抗體的結(jié)合效率與抗體的種屬來源及所屬亞型有關(guān)，請(qǐng)確認(rèn)抗體的類型與ProteinA/G配基的親和效率。如抗體所屬亞型與ProteinA/G的親和度較低，可以通過增加抗體與磁珠的孵育時(shí)間（30～120min）、提高結(jié)合緩沖液的pH值（8～9）及降低離子強(qiáng)度（25～100mMNaCl）等方法提高親和效率。2：如何提高磁珠在免疫沉淀反應(yīng)中的特異性?可以先將抗體與樣品進(jìn)行孵育，形成抗體-抗原復(fù)合物，再用ProteinA/G磁珠捕獲復(fù)合物。這種方法可以提高抗體與抗原的結(jié)合效率，并降低磁珠與樣品接觸的時(shí)間，從而提高沉淀產(chǎn)物的特異性。對(duì)于蛋白質(zhì)/核酸共沉淀或染色質(zhì)免疫共沉淀也推薦使用此法。

碳二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺(EDC/NHS)方法在羧基磁珠表面偶聯(lián)抗體,制備可高效分離細(xì)胞的免疫磁珠.方法用EDC和NHS活化磁珠表面羧基,活化的羧基再與抗體上氨基進(jìn)行反應(yīng),從而將抗體偶聯(lián)于磁珠表面,獲得免疫磁珠.使用高性能納米粒度分析儀(HPPS),二辛可酸(BCA)蛋白定量試劑盒,流式細(xì)胞儀,透射電鏡(TEM)表征磁珠的粒徑,磁珠表面聯(lián)接的抗體量及其免疫活性.結(jié)果HPPS檢測(cè)磁珠平均水力學(xué)粒徑為110nm;磁珠表面偶聯(lián)52.4μg抗CD11a+抗體/mg磁珠.經(jīng)磁分離后細(xì)胞的流式分析結(jié)果表明,CD11a+免疫磁珠可以有效分離髓系白血病細(xì)胞系(KG-1a)細(xì)胞,免疫磁珠均勻結(jié)合于細(xì)胞表面,且不影響細(xì)胞的活性.結(jié)論成功制備可用于細(xì)胞分離且不影響分離后細(xì)胞活性的新型免疫磁珠.上海普平生物科技有限公司就帶您了解一下免疫磁珠的特點(diǎn)。

分離轉(zhuǎn)基因小鼠骨髓造血干細(xì)胞.運(yùn)用針對(duì)小鼠干細(xì)胞表面特異表達(dá)的干細(xì)胞抗原-1(stemcellantigen-1,Sca-1)的單克隆抗體和包被于磁顆粒表面的第二抗體,采用磁吸附細(xì)胞分選方法(MACS)分離小鼠骨髓造血干細(xì)胞,用流式細(xì)胞術(shù)(FACS)檢測(cè)MACS分離后骨髓細(xì)胞中干細(xì)胞(Sca-1陽(yáng)性細(xì)胞)比例,監(jiān)測(cè)細(xì)胞分選效果.結(jié)果顯示MACS分離后骨髓細(xì)胞中Sca-1陽(yáng)性細(xì)胞所占比例達(dá)85%以上,涂片觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞組成和細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征與FACS所得結(jié)果一致.MACS可以從轉(zhuǎn)基因小鼠全骨髓細(xì)胞中分離出Sca-1陽(yáng)性的骨髓造血干細(xì)胞,細(xì)胞純度可達(dá)85%以上.想要買免疫磁珠？您要先了解免疫磁珠的特點(diǎn)。廣東anti-HA 免疫共沉淀免疫磁珠銷售

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免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。當(dāng)用預(yù)先固化在agarosebeads上的蛋白質(zhì)A的抗體免疫沉淀A蛋白，那么與A蛋白在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離，對(duì)B蛋白進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)而證明兩者間的相互作用。這種方法得到的目的蛋白是在細(xì)胞內(nèi)與興趣蛋白天然結(jié)合的，符合體內(nèi)實(shí)際情況，得到的結(jié)果可信度高。這種方法常用于測(cè)定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。廣東anti-HA 免疫共沉淀免疫磁珠供應(yīng)商

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