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吉林protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠性能

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-05-05

偶聯(lián)單抗NJ001的免疫磁珠對(duì)肺腺*裸鼠模型micro-CT掃描的增強(qiáng)作用.方法:經(jīng)尾靜脈注射SPC-A1-luc細(xì)胞建立肺腺*裸鼠模型,生物發(fā)光成像定量監(jiān)測(cè)**的大小.裸鼠分為:生理鹽水組,裸磁珠組和免疫磁珠組,每周分別注射生理鹽水,750nm裸磁珠溶液和偶聯(lián)NJ001的750nm免疫磁珠溶液,于注射前和注射后4h進(jìn)行micro-CT掃描.利用免疫組織化學(xué)驗(yàn)證**組織中NJ001特異性抗原SP70的表達(dá).結(jié)果:免疫磁珠組在第4周即可檢測(cè)到**,而生理鹽水組和裸磁珠組均到第6周才能檢測(cè)到.第6周生理鹽水組,裸磁珠組和免疫磁珠組micro-CT掃描**的灰度值分別為注射前的59.05±0.66,60.69±0.55和58.25±0.32,注射后的60.30±1.83,61.05±0.68和67.41±3.82.與注射前相比,免疫磁珠組注射后的灰度值***增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0079).生理鹽水組和裸磁珠組注射后的灰度值與注射前相比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05).結(jié)論:偶聯(lián)單抗NJ001的免疫磁珠對(duì)肺腺*裸鼠模型micro-CT掃描有增強(qiáng)作用,并且有望用于肺*的早期診斷.上海普平生物科技有限公司專業(yè)致力于免疫磁珠直銷。吉林protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠性能

免疫磁珠法分選人骨髓多能成體祖細(xì)胞,觀察其分選效果,建立體外分選純化及培養(yǎng)人骨髓來(lái)源多能成體祖細(xì)胞(hMAPCs)的方法.方法:取健康成人志愿者適量骨髓后采用梯度密度離心法分離獲取單個(gè)核細(xì)胞,在自制培養(yǎng)基下貼壁培養(yǎng)后,將獲取的骨髓貼壁細(xì)胞通過(guò)CD45,血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)負(fù)分選,錐蟲(chóng)藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)計(jì)數(shù)MACS分選前后細(xì)胞活力.流式細(xì)胞儀鑒定分選后細(xì)胞純度;流式細(xì)胞儀分析培養(yǎng)細(xì)胞CD29,CD44,CD34和HLA-DR表達(dá)情況.結(jié)果:通過(guò)MACS分選,平均每1×106/ml骨髓貼壁細(xì)胞可分選出約(5~10)×104/mlhMAPCs,分選后的hMAPCs細(xì)胞生長(zhǎng)良好,**長(zhǎng)傳代到第20代.分選前后細(xì)胞活力分別為(96.7±1.7)%和(96.0±2.4)%,無(wú)明顯差異;流式細(xì)胞儀分析獲取的CD45-,GlyA-細(xì)胞純度大于98%;流式細(xì)胞儀檢測(cè)hMAPCs中CD29陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞比率為99.2%,CD44陽(yáng)性細(xì)胞比率為98.3%,CD34陽(yáng)性細(xì)胞比率為1.2%,HLA-DR陽(yáng)性細(xì)胞比率為5.3%.結(jié)論:CD45,GlyA免疫微磁珠負(fù)分選可從骨髓中分離高純度的hMAPCs;分選后hMAPCs在自行研制的培養(yǎng)基中有較強(qiáng)的增殖能力.安徽COIP免疫磁珠經(jīng)銷商價(jià)格4折起上海普平生物科技有限公司銷售的免疫磁珠擁有完善的售后服務(wù)。

建立檢測(cè)人血清抗白***烯醇化酶(Eno)IgG類抗體的免疫磁珠法,并評(píng)估其在***血癥診斷中的價(jià)值。方法將Eno重組蛋白耦聯(lián)至磁性微珠上,以辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的羊抗人IgG為二抗,優(yōu)化免疫磁珠法的反應(yīng)條件,考察其精密度和特異性。收集經(jīng)血培養(yǎng)確診的***血癥患者(n=113)、***定植者(n=50)、細(xì)菌菌血癥患者(n=30)和健康人對(duì)照者(n=100)血清,用免疫磁珠法測(cè)定抗Eno抗體,并與ELISA法結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果免疫磁珠法測(cè)定抗Eno抗體的批內(nèi)、批間變異系數(shù)(CV)分別為8.2%和14.2%,重組Eno抗原對(duì)相應(yīng)抗體的阻斷率為91.6%。以吸光度(A)值0.29為cutoff值時(shí),診斷***血癥的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為80.5%、92.3%、90.1%和84.5%。免疫磁珠法的敏感性和特異性與ELISA法比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但檢測(cè)流程從37℃2.5h縮短至常溫1h。結(jié)論免疫磁珠法檢測(cè)抗EnoIgG類抗體簡(jiǎn)便、快捷、可靠,在侵襲性******研究中具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

小鼠脾臟CD8+T細(xì)胞的免疫磁珠負(fù)性分選方法,并對(duì)分選后所得細(xì)胞進(jìn)行純度、活力及功能檢測(cè).方法以免疫磁珠負(fù)性分選法從小鼠脾臟細(xì)胞中分離CD8+T細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)所得細(xì)胞的純度,臺(tái)盼藍(lán)檢測(cè)細(xì)胞活力并用ConA刺激檢測(cè)增殖能力.結(jié)果經(jīng)過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定免疫磁珠負(fù)性分選后的小鼠脾臟CD8+T細(xì)胞純度達(dá)到(91.6±3.6)%,臺(tái)盼蘭染色細(xì)胞活力為(94.9±3.2)%,ConA刺激72h后有(56.3±1.7)%的細(xì)胞增殖.結(jié)論免疫磁珠負(fù)性分選法能夠分選出高純度的CD8+T細(xì)胞,并且不影響分選靶細(xì)胞的細(xì)胞活力和功能.免疫磁珠的主要特點(diǎn)有很多。

免疫共沉淀(COIP)實(shí)驗(yàn)過(guò)程(1)轉(zhuǎn)染后24-48h可收獲細(xì)胞,加入適量細(xì)胞裂解緩沖液(含蛋白酶抑制劑),冰上裂解30min,細(xì)胞裂解液于4°C,最大轉(zhuǎn)速離心30min后取上清;(2)取少量裂解液以備Westernblot分析,剩余裂解液加1μg相應(yīng)的抗體加入到細(xì)胞裂解液,4°C緩慢搖晃孵育過(guò)夜;(3)取10μlproteinA瓊脂糖珠,用適量裂解緩沖液洗3次,每次3,000rpm離心3min;(4)將預(yù)處理過(guò)的10μlproteinA瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過(guò)夜的細(xì)胞裂解液中4°C緩慢搖晃孵育2-4h,使抗體與proteinA瓊脂糖珠耦聯(lián);(5)免疫沉淀反應(yīng)后,在4°C以3,000rpm速度離心3min,將瓊脂糖珠離心至管底;將上清小心吸去,瓊脂糖珠用1ml裂解緩沖液洗3-4次;***加入15μl的2×SDS上樣緩沖液,沸水煮5分鐘;(6)SDS-PAGE,Westernblotting或質(zhì)譜儀分析。注意的問(wèn)題:(1)細(xì)胞裂解采用溫和的裂解條件,不能破壞細(xì)胞內(nèi)存在的所有蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,多采用非離子變性劑(NP40或TritonX-100)。每種細(xì)胞的裂解條件是不一樣的,通過(guò)經(jīng)驗(yàn)確定。不能用高濃度的變性劑(0.2%SDS),細(xì)胞裂解液中要加各種酶抑制劑,如商品化的cocktailer。(2)使用明確的抗體,可以將幾種抗體共同使用。(3)使用對(duì)照抗體:上海普平生物科技有限公司免疫磁珠的售后服務(wù)很好。廣東anti-Myc 免疫共沉淀免疫磁珠供應(yīng)商

免疫磁珠的主要特點(diǎn)都有哪些呢?吉林protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠性能

分離轉(zhuǎn)基因小鼠骨髓造血干細(xì)胞.運(yùn)用針對(duì)小鼠干細(xì)胞表面特異表達(dá)的干細(xì)胞抗原-1(stemcellantigen-1,Sca-1)的單克隆抗體和包被于磁顆粒表面的第二抗體,采用磁吸附細(xì)胞分選方法(MACS)分離小鼠骨髓造血干細(xì)胞,用流式細(xì)胞術(shù)(FACS)檢測(cè)MACS分離后骨髓細(xì)胞中干細(xì)胞(Sca-1陽(yáng)性細(xì)胞)比例,監(jiān)測(cè)細(xì)胞分選效果.結(jié)果顯示MACS分離后骨髓細(xì)胞中Sca-1陽(yáng)性細(xì)胞所占比例達(dá)85%以上,涂片觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞組成和細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征與FACS所得結(jié)果一致.MACS可以從轉(zhuǎn)基因小鼠全骨髓細(xì)胞中分離出Sca-1陽(yáng)性的骨髓造血干細(xì)胞,細(xì)胞純度可達(dá)85%以上.吉林protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠性能

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