抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠,并進(jìn)行初步應(yīng)用。方法采用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備抗熒光素單克隆抗體;制備腹水,經(jīng)50%硫酸銨粗提后,再經(jīng)陰離子交換樹脂DE52進(jìn)一步純化單克隆抗體;采用氧化共沉淀法制備納米磁性粒子;乳液聚合法制備羧基磁性微球;用碳二亞胺將抗熒光素單克隆抗體共價偶聯(lián)于磁性微球表面,制備抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠。用制備的免疫磁珠檢測乙肝表面抗原,并與市售ELISA試劑盒的檢測結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果共獲得5株雜交瘤細(xì)胞株,其中1F12細(xì)胞株分泌的抗體效價、相對親和力較高,特異性較好;純化的1F12株單抗的純度達(dá)95%,蛋白含量為2.4mg/ml,ELISA效價為106,相對親和力為0.2mg/L,與FITC標(biāo)記的BSA可特異性結(jié)合;納米磁性粒子的平均粒徑為150nm,鐵含量為71.63%;羧基磁性微球的平均粒徑為210nm,羧基含量約為2.15mmol/g;每克羧基磁性微球可結(jié)合抗熒光素單克隆抗體約12mg,制備的免疫磁珠可有效結(jié)合熒光素標(biāo)記的蛋白。應(yīng)用抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠檢測乙型肝炎表面抗原的靈敏度高于ELISA試劑,檢測限達(dá)0.1ng/ml。結(jié)論成功制備了抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠,其具有應(yīng)用于免疫檢測分析的價值。免疫磁珠的優(yōu)點有很多。湖南蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠哪家好

COIP常見問題及對策1：如何提高抗體與磁珠結(jié)合效率?磁珠與抗體的結(jié)合效率與抗體的種屬來源及所屬亞型有關(guān)，請確認(rèn)抗體的類型與ProteinA/G配基的親和效率。如抗體所屬亞型與ProteinA/G的親和度較低，可以通過增加抗體與磁珠的孵育時間（30～120min）、提高結(jié)合緩沖液的pH值（8～9）及降低離子強(qiáng)度（25～100mMNaCl）等方法提高親和效率。2：如何提高磁珠在免疫沉淀反應(yīng)中的特異性?可以先將抗體與樣品進(jìn)行孵育，形成抗體-抗原復(fù)合物，再用ProteinA/G磁珠捕獲復(fù)合物。這種方法可以提高抗體與抗原的結(jié)合效率，并降低磁珠與樣品接觸的時間，從而提高沉淀產(chǎn)物的特異性。對于蛋白質(zhì)/核酸共沉淀或染色質(zhì)免疫共沉淀也推薦使用此法。廣東protein A/G COIP免疫磁珠哪家好上海普平生物科技有限公司主做免疫磁珠的批發(fā)銷售。

精原干細(xì)胞(spermatogonialstemcells,SSCs)富集純化是利用SSCs進(jìn)行基因修飾新方法等研究的前提基礎(chǔ)。采用免疫磁珠分選法,使用干細(xì)胞抗體CD90.2進(jìn)行小鼠SSCs的純化富集,并采用流式細(xì)胞分析法和定量PCR驗證了磁珠分選效率。流式細(xì)胞分析結(jié)果:免疫磁珠分選后SSCs純度為50.11%。熒光定量PCR檢測結(jié)果:磁珠分選后支持細(xì)胞特異表達(dá)基因GATA4***下調(diào)(6倍)、SSCs表達(dá)基因GFRα-1上調(diào)(6.5倍)、生殖干細(xì)胞特異表達(dá)基因OCT4極***上調(diào)(5.9倍),3個基因相對表達(dá)量的變化說明,免疫磁珠分選效率為6倍。流式細(xì)胞分析法所產(chǎn)生的偏差可能是受到了未解離磁珠及SSCs本身轉(zhuǎn)基因熒光的影響。

COIP實驗步驟第三步：免疫共沉淀根據(jù)不同的抗體結(jié)合方式，這里的免疫共沉淀步驟會稍有不同，但是本質(zhì)是一樣的，都是為了形成抗原-蛋白復(fù)合物。如果直接使用 Protein A/G 結(jié)合的 beads，先進(jìn)行細(xì)胞裂解液/蛋白混合物與抗體的孵育，再加入 beads 將蛋白-抗體復(fù)合物拉下來。如果使用了交聯(lián)劑將抗體與 Protein A/G 固定，或者直接將抗體固定在 beads，則將固定抗體的 beads 與細(xì)胞裂解液或則蛋白混合物一起孵育。增加在洗脫之前的洗滌次數(shù)或在免疫共沉淀緩沖液中加入 Triton X-100 ，可以降低非特異性結(jié)合，以防止蛋白在陰性對照樹脂實驗樣品中被檢測到。第四步：洗脫與檢測***一步則是使用洗脫緩沖液將互作蛋白復(fù)合物洗脫，并通過 Western Blot 或者 Mass spectra 檢測鑒定蛋白。當(dāng)?shù)鞍谆蚩贵w對低 pH 的緩沖液敏感，可使用中性 pH 值的洗脫緩沖液。注意事項：如后續(xù)需進(jìn)行酶活或功能性分析，則需使用兼容下游檢測的 Elution buffer 進(jìn)行洗脫。對于交聯(lián)劑結(jié)合的 beads，為了保持抗體偶聯(lián)樹脂的活性，應(yīng)立即再生和存儲樹脂，保證抗體可以重復(fù)利用。您喜歡免疫磁珠的這些特點嗎？

從白血病KG1a細(xì)胞中分選CD34+CD38-干細(xì)胞并研究其生物學(xué)特性.方法免疫磁珠法分選CD34+CD38-細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞表面膜抗原,細(xì)胞周期,甲基纖維素培養(yǎng)體系觀察其克隆性;以HL60,K562,CD34+CD38+細(xì)胞為對照,甲基偶氮唑藍(lán)法檢測柔紅霉素對CD34+CD38-細(xì)胞的抑制作用;BALB/c裸鼠皮下接種,觀察體內(nèi)成瘤能力.結(jié)果分選的CD34+CD38-細(xì)胞純度達(dá)95%以上,(69.03±3.25)%處于G0期,克隆形成率為(38.64±2.68)%,明顯抵抗柔紅霉素;不同濃度柔紅霉素作用后,CD34+CD38-,CD34+CD38+,HL60,K562細(xì)胞的活性差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=961.136,P=0.000);CD34+CD38-在裸鼠皮下成瘤率***高于CD34+CD38+細(xì)胞(P〈0.05).結(jié)論免疫磁珠法分選白血病干細(xì)胞簡單易行,分選的細(xì)胞符合白血病干細(xì)胞生物學(xué)特性.上海普平生物科技有限公司從事免疫磁珠供應(yīng)。廣東protein A/G COIP免疫磁珠哪家好

免疫磁珠的好處您了解嗎？湖南蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠哪家好

分離轉(zhuǎn)基因小鼠骨髓造血干細(xì)胞.運用針對小鼠干細(xì)胞表面特異表達(dá)的干細(xì)胞抗原-1(stemcellantigen-1,Sca-1)的單克隆抗體和包被于磁顆粒表面的第二抗體,采用磁吸附細(xì)胞分選方法(MACS)分離小鼠骨髓造血干細(xì)胞,用流式細(xì)胞術(shù)(FACS)檢測MACS分離后骨髓細(xì)胞中干細(xì)胞(Sca-1陽性細(xì)胞)比例,監(jiān)測細(xì)胞分選效果.結(jié)果顯示MACS分離后骨髓細(xì)胞中Sca-1陽性細(xì)胞所占比例達(dá)85%以上,涂片觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞組成和細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征與FACS所得結(jié)果一致.MACS可以從轉(zhuǎn)基因小鼠全骨髓細(xì)胞中分離出Sca-1陽性的骨髓造血干細(xì)胞,細(xì)胞純度可達(dá)85%以上.湖南蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠哪家好

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