免疫共沉淀（COIP）優(yōu)點(diǎn)（1）相互作用的蛋白質(zhì)都是經(jīng)翻譯后修飾的，處于天然狀態(tài)；（2）蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進(jìn)行的，可以避免人為的影響；（3）可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物。免疫共沉淀（COIP）缺點(diǎn)（1）可能檢測(cè)不到低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用；（2）兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接結(jié)合，而可能有第三者在中間起橋梁作用；（3）必須在實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)目的蛋白是什么，以選擇***檢測(cè)的抗體，所以，若預(yù)測(cè)不正確，實(shí)驗(yàn)就得不到結(jié)果，方法本身具有冒險(xiǎn)性。（4）靈敏度沒有親和色譜高。上海普平生物科技有限公司主做免疫磁珠的批發(fā)銷售。北京蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠性能

免疫磁珠分選CD34+細(xì)胞及臍血中CD34+細(xì)胞含量的意義.[方法]臍血中分離單核細(xì)胞后,采用EasySep正選人CD34+免疫磁珠分選CD34+細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)分選前后CD34細(xì)胞的純度.[結(jié)果]分選前MNC中CD34+細(xì)胞純度為(1.14士0.71)%,分選后CD34+細(xì)胞純度達(dá)到(91.55士4.11)%.[結(jié)論]臍血作為CD347造血干/祖細(xì)胞的來源以及免疫磁珠方法在獲得高純度CD34+細(xì)胞中有重要的意義.免疫磁珠分選CD34+細(xì)胞及臍血中CD34+細(xì)胞含量的意義.[方法]臍血中分離單核細(xì)胞后,采用EasySep正選人CD34+免疫磁珠分選CD34+細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)分選前后CD34細(xì)胞的純度.[結(jié)果]分選前MNC中CD34+細(xì)胞純度為(1.14士0.71)%,分選后CD34+細(xì)胞純度達(dá)到(91.55士4.11)%.[結(jié)論]臍血作為CD347造血干/祖細(xì)胞的來源以及免疫磁珠方法在獲得高純度CD34+細(xì)胞中有重要的意義.河南anti-Myc 免疫共沉淀免疫磁珠批量定制免疫磁珠的特點(diǎn)成為了一個(gè)重要因素。

CoIP ：實(shí)驗(yàn)原理一切從 CoIP 的原理談起：免疫共沉淀是一種以抗體和抗原識(shí)別專一性為基礎(chǔ)，用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。實(shí)驗(yàn)步驟第一步：樣品制備首先進(jìn)行樣品制備，以提取出想要研究的蛋白，由于不同類型的細(xì)胞裂解條件有所差異，這里不展開介紹。注意事項(xiàng)：細(xì)胞裂解要采用溫和的裂解條件，避免破壞細(xì)胞內(nèi)存在的蛋白間相互作用，裂解、洗滌時(shí)需使用非變性裂解液，如 NP-40 和 Triton X-100。此外，由于不同細(xì)胞裂解條件不一樣，建議通過預(yù)實(shí)驗(yàn)來確定比較好條件。第二步：固定抗體在共沉淀之前，先將固相基質(zhì)與抗體共同孵育，從而使兩者結(jié)合，常用的固相基質(zhì)有瓊脂糖 Agarose 和磁珠 Magnetic beads。瓊脂糖 Agarose 具有簡(jiǎn)單易用，直徑大，結(jié)合力強(qiáng)，多孔易吸附的特點(diǎn)；磁珠具有直徑小，背景低，抗體消耗少的特點(diǎn)，但操作時(shí)需借助磁力架。注意事項(xiàng)：抗體的選擇十分重要，選經(jīng)過 IP 驗(yàn)證的抗體，可以減少假陽性概率。同時(shí)，要注意抗體/緩沖液的比例，抗體稀釋過度不利于后續(xù)抗原抗體結(jié)合；而抗體過多就不能完全沉降在固相基質(zhì)上，殘存于上清。操作時(shí)，為了避免損傷 beads，使用大口徑或截短***頭進(jìn)行加樣。

COIP實(shí)驗(yàn)步驟第三步：免疫共沉淀根據(jù)不同的抗體結(jié)合方式，這里的免疫共沉淀步驟會(huì)稍有不同，但是本質(zhì)是一樣的，都是為了形成抗原-蛋白復(fù)合物。如果直接使用 Protein A/G 結(jié)合的 beads，先進(jìn)行細(xì)胞裂解液/蛋白混合物與抗體的孵育，再加入 beads 將蛋白-抗體復(fù)合物拉下來。如果使用了交聯(lián)劑將抗體與 Protein A/G 固定，或者直接將抗體固定在 beads，則將固定抗體的 beads 與細(xì)胞裂解液或則蛋白混合物一起孵育。增加在洗脫之前的洗滌次數(shù)或在免疫共沉淀緩沖液中加入 Triton X-100 ，可以降低非特異性結(jié)合，以防止蛋白在陰性對(duì)照樹脂實(shí)驗(yàn)樣品中被檢測(cè)到。第四步：洗脫與檢測(cè)***一步則是使用洗脫緩沖液將互作蛋白復(fù)合物洗脫，并通過 Western Blot 或者 Mass spectra 檢測(cè)鑒定蛋白。當(dāng)?shù)鞍谆蚩贵w對(duì)低 pH 的緩沖液敏感，可使用中性 pH 值的洗脫緩沖液。注意事項(xiàng)：如后續(xù)需進(jìn)行酶活或功能性分析，則需使用兼容下游檢測(cè)的 Elution buffer 進(jìn)行洗脫。對(duì)于交聯(lián)劑結(jié)合的 beads，為了保持抗體偶聯(lián)樹脂的活性，應(yīng)立即再生和存儲(chǔ)樹脂，保證抗體可以重復(fù)利用。上海普平生物科技有限公司銷售的免疫磁珠質(zhì)量很好。

   免疫磁珠分離成人骨髓中STRO-1^+陽性細(xì)胞,獲得同質(zhì)性骨髓基質(zhì)干細(xì)胞.方法:實(shí)驗(yàn)于2004-06/2005-06在東南大學(xué)修復(fù)重建外科研究所實(shí)驗(yàn)室完成.采集正常自愿獻(xiàn)髓者骨髓,淋巴細(xì)胞分離液體離心純化分離后利用免疫磁珠分離出STRO-1^+細(xì)胞,研究其生長(zhǎng)曲線,體外擴(kuò)增能力,集落形成能力,細(xì)胞表型,細(xì)胞周期,成骨能力.結(jié)果:①利用免疫磁珠可從成人骨髓中獲取STRO-1^+細(xì)胞.經(jīng)體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)STRO-1^+細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),相差顯微鏡下STRO-1^+細(xì)胞呈成纖維細(xì)胞梭形外觀.②生長(zhǎng)曲線可分為細(xì)胞生長(zhǎng)延滯期,對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期及穩(wěn)定期,細(xì)胞倍增時(shí)間為57h.③STRO-1^+細(xì)胞可以在體外擴(kuò)增12周左右,形成的成纖維細(xì)胞集落數(shù),處于細(xì)胞分裂期的細(xì)胞數(shù),擴(kuò)增倍數(shù)均低于傳統(tǒng)分離方法得到的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞.④經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè),STRO-1^+細(xì)胞穩(wěn)定地表達(dá)CD29,CD44,CD105,不表達(dá)造血細(xì)胞系的表面標(biāo)記CD14,CD34,CD45,HLA-DR.⑤經(jīng)成骨培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)STRO-1^+的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞具有很強(qiáng)的成骨分化能力.結(jié)論:利用免疫磁珠能夠從成人骨髓中快速分離,純化骨髓基質(zhì)干細(xì)胞,且具有高效,靈敏。上海普平生物科技有限公司就帶您了解一下免疫磁珠的特點(diǎn)。河南anti-Myc 免疫共沉淀免疫磁珠批量定制

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建立免疫磁珠法分離,并培養(yǎng)人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的方法.方法將術(shù)中取得的腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本,通過剪切、消化和吹打成單細(xì)胞懸液,篩網(wǎng)過濾,免疫磁珠分選試劑盒分選出CD133+細(xì)胞,用神經(jīng)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)法培養(yǎng)出具有單細(xì)胞克隆能力的細(xì)胞球,取第3代進(jìn)行誘導(dǎo)分化,分化前后用免疫細(xì)胞熒光化學(xué)方法鑒定**干細(xì)胞及分化后細(xì)胞.結(jié)果免疫磁珠分選出的CD133-細(xì)胞,可懸浮生長(zhǎng)并形成神經(jīng)干細(xì)胞樣細(xì)胞球,有較強(qiáng)的增殖能力,干細(xì)胞標(biāo)志物巢蛋白(nestin)陽性,分化后細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)元小管相關(guān)蛋白β-3(β-tubulin3)和星形膠質(zhì)細(xì)胞膠質(zhì)纖維酸性蛋白質(zhì)(GFAP)特異性抗原,而巢蛋白、CD133陰性,并具有**的核型.結(jié)論免疫磁珠分選法可避免原代培養(yǎng)中眾多細(xì)胞混雜牛長(zhǎng)的發(fā)生,能夠從大量腫瘤細(xì)胞中分離出只占極少比例的**干細(xì)胞,細(xì)胞結(jié)合磁珠后在體外可以長(zhǎng)期培養(yǎng)和傳代,進(jìn)一步證實(shí)了**干細(xì)胞的存在,并為膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的研究奠定基礎(chǔ).北京蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠性能

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