免疫磁性細(xì)胞分選系統(tǒng)分離純化骨髓衍生肝干細(xì)胞亞群c-Kit^+lin^-。方法:實(shí)驗(yàn)于2006—07/08在南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心完成。6~8周齡的SPF級純系BALB,C雄性小鼠10只,體質(zhì)量18~20g。收集小鼠股骨骨髓細(xì)胞,利用免疫磁性細(xì)胞分選系統(tǒng),通過兩步法分選純化c-Kit^+lin^-:將獲取的lin^-細(xì)胞懸液8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按80μL/10^7加入Buffer重懸細(xì)胞。按20μL/10^7加生物素抗體磁珠,混勻,4℃冰箱孵育15min,按1 mL/10^7加入Buffer洗細(xì)胞1次,8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按500μL/10^8加入Buffer重懸細(xì)胞。Buffer 500μL潤MS柱,懸液過柱后,Buffer 500μL/次洗柱3次,柱子脫離磁場,加1mL Buffer,用配套柱塞推出柱中的c-Kit^+lin^-細(xì)胞,收集到c-kit^+lin-細(xì)胞,細(xì)胞計數(shù)。取2.0x108個細(xì)胞分成10等份,流式細(xì)胞儀分析c-Kit^+lin^-細(xì)胞純度,計算回收率,評估純化效率,苔盼蘭染色檢測純化前后的細(xì)胞活力。計算活細(xì)胞的百分率。細(xì)胞純度和細(xì)胞回收率的計算:細(xì)胞純度:分離產(chǎn)物中的陽性細(xì)胞數(shù),分離細(xì)胞的總細(xì)胞數(shù)×100%,細(xì)胞回收率:分離產(chǎn)物中的陽性細(xì)胞數(shù),起始標(biāo)本陽性細(xì)胞總數(shù)×100%。免疫磁珠的好處有很多。河南anti-Flag COIP免疫磁珠銷售

人腦**組織中分離,培養(yǎng),純化和鑒定腦**干細(xì)胞(BTSCs),探討CD133免疫磁珠分選方法獲取BTSCs的可行性及BTSCs的生物學(xué)特性.方法:留取人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤新鮮標(biāo)本,分離獲得腦腫瘤細(xì)胞.應(yīng)用CD133免疫磁珠分選方法純化BTSCs;流式細(xì)胞儀檢測分選陽性率;神經(jīng)球計數(shù)法分析CD133+/-亞群細(xì)胞神經(jīng)球形成情況;免疫熒光方法檢測CD133+/-亞群細(xì)胞表面神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)標(biāo)記物CD133,神經(jīng)巢蛋白(nestin)表達(dá)情況;檢測CD133+/-亞群細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)分化后細(xì)胞表面分化標(biāo)記物β-TubulinⅢ,GFAP表達(dá)情況.結(jié)果:CD133+亞群細(xì)胞具有干細(xì)胞特性,可形成明顯的神經(jīng)球,具有自我更新和明顯的增殖能力,并且NSCs標(biāo)記物CD133,nestin表達(dá)陽性,經(jīng)誘導(dǎo)分化后分化標(biāo)記物β-TubulinⅢ,GFAP表達(dá)陽性;CD133-亞群細(xì)胞無上述特性.結(jié)論:CD133免疫磁珠分選方法獲得的CD133+亞群細(xì)胞即為BTSCs,該方法可以得到高純度的BTSCs,可以用于BTSCs的實(shí)驗(yàn)研究.湖北蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠代理價格4折起免疫磁珠的優(yōu)勢您了解多少呢？

精原干細(xì)胞(spermatogonialstemcells,SSCs)富集純化是利用SSCs進(jìn)行基因修飾新方法等研究的前提基礎(chǔ)。采用免疫磁珠分選法,使用干細(xì)胞抗體CD90.2進(jìn)行小鼠SSCs的純化富集,并采用流式細(xì)胞分析法和定量PCR驗(yàn)證了磁珠分選效率。流式細(xì)胞分析結(jié)果:免疫磁珠分選后SSCs純度為50.11%。熒光定量PCR檢測結(jié)果:磁珠分選后支持細(xì)胞特異表達(dá)基因GATA4***下調(diào)(6倍)、SSCs表達(dá)基因GFRα-1上調(diào)(6.5倍)、生殖干細(xì)胞特異表達(dá)基因OCT4極***上調(diào)(5.9倍),3個基因相對表達(dá)量的變化說明,免疫磁珠分選效率為6倍。流式細(xì)胞分析法所產(chǎn)生的偏差可能是受到了未解離磁珠及SSCs本身轉(zhuǎn)基因熒光的影響。

磁珠分離細(xì)胞STRO-1+的DPSC、EMSC中HNK-1、Nestin的表達(dá),進(jìn)一步了解DPSC的表型特點(diǎn)及與EMSC的相關(guān)性,為今后研究提供較為純化的細(xì)胞來源。方法采用間接免疫磁珠分離法獲得DPSC、EMSC,間接免疫熒光雙標(biāo)法檢測抗原HNK-1、Nestin的表達(dá)。結(jié)果磁珠分離前后進(jìn)行細(xì)胞計數(shù),大約有5%的DPSC為STRO-1+的細(xì)胞,大約有1%的EMSC為STRO-1+的細(xì)胞;STRO-1+的DPSC免疫熒光檢測同時表達(dá)HNK-1(++)、Nestin(+),STRO-1+的EMSC免疫熒光檢測顯示也同時表達(dá)HNK-1(++)、Nestin(++)。結(jié)論免疫磁珠分離法獲得STRO-1+陽性的DPSC共表達(dá)EMSC的標(biāo)記HNK-1和Nestin,進(jìn)一步說明二者作為間充質(zhì)來源的干細(xì)胞,細(xì)胞表型具有繼承性。免疫磁珠的各種系列應(yīng)用領(lǐng)域還是不一樣的。

用多聚抗原肽(multipleantigenpeptides,MAP)包被磁珠制備單表位抗體的方法.方法:通過Fmoc法固相化學(xué)合成UreB的8分支單表位MAP,將其作為免疫原免疫小鼠,獲得多克隆抗血清.將MAP以共價偶聯(lián)的方式包被磁珠制備免疫磁珠(immunomagneticbeads,IB),通過IB從多克隆抗血清中純化單表位抗體,熒光偏振(fluorescencepolarization,FP)法鑒定抗體的特異性,SDS-PAGE鑒定抗體純度,紫外分光光度法測定其回收率.結(jié)果:合成的MAP具有較強(qiáng)的免疫原性,免疫小鼠后得到的抗體滴度高達(dá)1∶12800.MAP制備免疫磁珠的比較好包被濃度為100mg/L,包被效率比較高可達(dá)79%.應(yīng)用MAP免疫磁珠從抗血清中純化得到的單表位抗體,經(jīng)鑒定與其他抗原表位無反應(yīng)性,其純度為95%,抗體的回收率為5.8%.結(jié)論:MAP包被的磁珠可快速分離純化出針對某一抗原表位的特異性抗體,其性質(zhì)類似單克隆抗體.這一方案在快速制備少量高特異性抗體中具有廣闊的應(yīng)用前景.上海普平生物科技有限公司專業(yè)致力于免疫磁珠銷售。湖北蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠代理價格4折起

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免疫磁珠細(xì)胞分選方法可以在幾分鐘內(nèi)從復(fù)雜的細(xì)胞混合物中分離出很高純度的細(xì)胞。把細(xì)胞用超級順磁性的免疫磁珠特異性地標(biāo)記，磁性標(biāo)記完后，把這些細(xì)胞通過一個放在強(qiáng)而穩(wěn)定磁場中的分選柱。分選柱里的基質(zhì)造成一個高梯度磁場。被磁性標(biāo)記的細(xì)胞滯留在柱里而未被標(biāo)記的細(xì)胞則流出。當(dāng)分選柱移出磁場后，滯留柱內(nèi)的磁性標(biāo)記細(xì)胞就可以被洗脫出來，這樣就完全可以獲得標(biāo)記和未標(biāo)記的兩個細(xì)胞組份。超順磁性的磁珠的體積很小，其直徑約為50nm，體積約小于真核細(xì)胞的一百萬份之一，可與病毒的大小相比。標(biāo)記細(xì)胞上的微型磁珠即使在掃描電鏡照片上也幾乎看不到。磁性抗體和磁性標(biāo)記物間的反應(yīng)可在幾分鐘內(nèi)完成。由于微型磁珠的體積極小，所以不會對細(xì)胞造成機(jī)械性壓力，而且使孵育時間短，操作過程快。免疫磁珠形成一個穩(wěn)定的膠體液，它們在磁場中既不沉淀又不凝聚。微型磁珠的大小和它的組成成份（氧化鐵和多糖）使其可被生物降解，且不會***細(xì)胞或影響細(xì)胞的功能和活力，細(xì)胞的生理功能也不變。磁珠不需要去除，因此，陽性分選出的細(xì)胞（即磁性標(biāo)記細(xì)胞）可立即用于分析和隨后的實(shí)驗(yàn)。河南anti-Flag COIP免疫磁珠銷售

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