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湖南蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠送貨上門

來源: 發(fā)布時間:2022-03-30

羥基淀粉沉淀去除臍血紅細胞和免疫磁珠(MACS)陽性選擇,建立富集,分離臍血CD34+細胞的簡易實用方法,通過造血祖細胞集落培養(yǎng)分析其在細胞因子作用下的增殖潛能,觀察羥基淀粉沉淀對造血細胞增殖功能的影響.方法:采用羥基淀粉沉淀和改進的MACS富集,分離臍血CD34+細胞,以甲纖半固體造血細胞培養(yǎng)法觀察其粒-單系細胞(CFU-GM)和紅系爆式集落(BFU-E)的數(shù)量和特性.結(jié)果:臍血分離前,CD34+細胞純度為1.5%~3%,MACS分離后其純度可達85%,羥基淀粉沉淀和MACS分離可達91%;CD34+造血祖細胞培養(yǎng)有明顯的增殖,采用IL-3,IL-6,SCF,GM-CSF,EPO等細胞因子組合擴增培養(yǎng)9~14d,CD34+細胞在液體培養(yǎng)中有明顯擴增,MACS分離后CD34+細胞總數(shù)增加39倍,羥基淀粉沉淀和MACS分離可增加45倍.結(jié)論:應用羥基淀粉沉淀和改進的MACS系統(tǒng)可有效富集,分離臍血CD34+細胞,羥基淀粉沉淀對CD34+細胞的富集,分離無影響;臍血細胞分離后作造血祖細胞培養(yǎng),可產(chǎn)生豐富的CFU-GM和BFU-E,說明羥基淀粉沉淀分離的CD34+細胞的增殖功能優(yōu)于MACS分離CD34+細胞的增殖功能.應用免疫磁珠分離成人骨髓中STRO-1陽性細胞。湖南蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠送貨上門

免疫磁珠法分選人骨髓多能成體祖細胞,觀察其分選效果,建立體外分選純化及培養(yǎng)人骨髓來源多能成體祖細胞(hMAPCs)的方法.方法:取健康成人志愿者適量骨髓后采用梯度密度離心法分離獲取單個核細胞,在自制培養(yǎng)基下貼壁培養(yǎng)后,將獲取的骨髓貼壁細胞通過CD45,血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)負分選,錐蟲藍拒染實驗計數(shù)MACS分選前后細胞活力.流式細胞儀鑒定分選后細胞純度;流式細胞儀分析培養(yǎng)細胞CD29,CD44,CD34和HLA-DR表達情況.結(jié)果:通過MACS分選,平均每1×106/ml骨髓貼壁細胞可分選出約(5~10)×104/mlhMAPCs,分選后的hMAPCs細胞生長良好,**長傳代到第20代.分選前后細胞活力分別為(96.7±1.7)%和(96.0±2.4)%,無明顯差異;流式細胞儀分析獲取的CD45-,GlyA-細胞純度大于98%;流式細胞儀檢測hMAPCs中CD29陽性表達細胞比率為99.2%,CD44陽性細胞比率為98.3%,CD34陽性細胞比率為1.2%,HLA-DR陽性細胞比率為5.3%.結(jié)論:CD45,GlyA免疫微磁珠負分選可從骨髓中分離高純度的hMAPCs;分選后hMAPCs在自行研制的培養(yǎng)基中有較強的增殖能力.遼寧anti-Myc COIP免疫磁珠市場報價免疫磁珠法分離和純化胚胎神經(jīng)干細胞。

免疫共沉淀(COIP)實驗過程(1)轉(zhuǎn)染后24-48h可收獲細胞,加入適量細胞裂解緩沖液(含蛋白酶抑制劑),冰上裂解30min,細胞裂解液于4°C,最大轉(zhuǎn)速離心30min后取上清;(2)取少量裂解液以備Westernblot分析,剩余裂解液加1μg相應的抗體加入到細胞裂解液,4°C緩慢搖晃孵育過夜;(3)取10μlproteinA瓊脂糖珠,用適量裂解緩沖液洗3次,每次3,000rpm離心3min;(4)將預處理過的10μlproteinA瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過夜的細胞裂解液中4°C緩慢搖晃孵育2-4h,使抗體與proteinA瓊脂糖珠耦聯(lián);(5)免疫沉淀反應后,在4°C以3,000rpm速度離心3min,將瓊脂糖珠離心至管底;將上清小心吸去,瓊脂糖珠用1ml裂解緩沖液洗3-4次;***加入15μl的2×SDS上樣緩沖液,沸水煮5分鐘;(6)SDS-PAGE,Westernblotting或質(zhì)譜儀分析。注意的問題:(1)細胞裂解采用溫和的裂解條件,不能破壞細胞內(nèi)存在的所有蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,多采用非離子變性劑(NP40或TritonX-100)。每種細胞的裂解條件是不一樣的,通過經(jīng)驗確定。不能用高濃度的變性劑(0.2%SDS),細胞裂解液中要加各種酶抑制劑,如商品化的cocktailer。(2)使用明確的抗體,可以將幾種抗體共同使用。(3)使用對照抗體:

免疫共沉淀檢測(CO-IP)BEENbio提供免疫共沉淀(CO-IP)檢測服務(wù)??蓪煞N已知蛋白是否存在相互作用進行驗證,也可以驗證在總蛋白中是否含有與已知蛋白相互作用的未知蛋白。其實驗方法為將靶蛋白(X)與目的蛋白(Y)在同一細胞內(nèi)孵育,形成“靶蛋白-目的蛋白”復合物。將靶蛋白的特異性抗體與復合物共孵育,形成“抗體-靶蛋白-目的蛋白”復合物,利用ProterinA/G純化。通過SDS-PAGE銀染,結(jié)合WesternBlot及液相質(zhì)譜等對兩種蛋白之間是否存在相互作用進行定性分析。服務(wù)優(yōu)勢?使用銀染技術(shù),靈敏度是考馬斯亮藍100倍,SDS-PAGE電泳結(jié)果更加清晰;?擁有液相質(zhì)譜及Fortebio等完整配套檢測設(shè)備,可對檢測結(jié)果進一步分析;?實驗重復進行兩次,排除隨機因素影響,結(jié)果更加可靠;?擁有蛋白、抗體等制備平臺,您只需提供序列便可完成全部實驗;對于不同的需求我們選擇不同的免疫磁珠系列。

建立檢測人血清抗白***烯醇化酶(Eno)IgG類抗體的免疫磁珠法,并評估其在***血癥診斷中的價值。方法將Eno重組蛋白耦聯(lián)至磁性微珠上,以辣根過氧化物酶(HRP)標記的羊抗人IgG為二抗,優(yōu)化免疫磁珠法的反應條件,考察其精密度和特異性。收集經(jīng)血培養(yǎng)確診的***血癥患者(n=113)、***定植者(n=50)、細菌菌血癥患者(n=30)和健康人對照者(n=100)血清,用免疫磁珠法測定抗Eno抗體,并與ELISA法結(jié)果進行比較。結(jié)果免疫磁珠法測定抗Eno抗體的批內(nèi)、批間變異系數(shù)(CV)分別為8.2%和14.2%,重組Eno抗原對相應抗體的阻斷率為91.6%。以吸光度(A)值0.29為cutoff值時,診斷***血癥的敏感性、特異性、陽性預測值和陰性預測值分別為80.5%、92.3%、90.1%和84.5%。免疫磁珠法的敏感性和特異性與ELISA法比較無統(tǒng)計學差異,但檢測流程從37℃2.5h縮短至常溫1h。結(jié)論免疫磁珠法檢測抗EnoIgG類抗體簡便、快捷、可靠,在侵襲性******研究中具有潛在的應用價值。免疫磁珠的多種系列總有一款是您滿意。陜西蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠性能

抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠的制備及初步應用。湖南蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠送貨上門

偶聯(lián)單抗NJ001的免疫磁珠對肺腺*裸鼠模型micro-CT掃描的增強作用.方法:經(jīng)尾靜脈注射SPC-A1-luc細胞建立肺腺*裸鼠模型,生物發(fā)光成像定量監(jiān)測**的大小.裸鼠分為:生理鹽水組,裸磁珠組和免疫磁珠組,每周分別注射生理鹽水,750nm裸磁珠溶液和偶聯(lián)NJ001的750nm免疫磁珠溶液,于注射前和注射后4h進行micro-CT掃描.利用免疫組織化學驗證**組織中NJ001特異性抗原SP70的表達.結(jié)果:免疫磁珠組在第4周即可檢測到**,而生理鹽水組和裸磁珠組均到第6周才能檢測到.第6周生理鹽水組,裸磁珠組和免疫磁珠組micro-CT掃描**的灰度值分別為注射前的59.05±0.66,60.69±0.55和58.25±0.32,注射后的60.30±1.83,61.05±0.68和67.41±3.82.與注射前相比,免疫磁珠組注射后的灰度值***增加,差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.0079).生理鹽水組和裸磁珠組注射后的灰度值與注射前相比差異均無統(tǒng)計學意義(均P0.05).結(jié)論:偶聯(lián)單抗NJ001的免疫磁珠對肺腺*裸鼠模型micro-CT掃描有增強作用,并且有望用于肺*的早期診斷.湖南蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠送貨上門

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