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免疫磁性細胞分選系統(tǒng)分離純化骨髓衍生肝干細胞亞群c-Kit^+lin^-。方法:實驗于2006—07/08在南方醫(yī)科大學實驗動物中心完成。6~8周齡的SPF級純系BALB,C雄性小鼠10只,體質量18~20g。收集小鼠股骨骨髓細胞,利用免疫磁性細胞分選系統(tǒng),通過兩步法分選純化c-Kit^+lin^-:將獲取的lin^-細胞懸液8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按80μL/10^7加入Buffer重懸細胞。按20μL/10^7加生物素抗體磁珠,混勻,4℃冰箱孵育15min,按1 mL/10^7加入Buffer洗細胞1次,8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按500μL/10^8加入Buffer重懸細胞。Buffer 500μL潤MS柱,懸液過柱后,Buffer 500μL/次洗柱3次,柱子脫離磁場,加1mL Buffer,用配套柱塞推出柱中的c-Kit^+lin^-細胞,收集到c-kit^+lin-細胞,細胞計數(shù)。取2.0x108個細胞分成10等份,流式細胞儀分析c-Kit^+lin^-細胞純度,計算回收率,評估純化效率,苔盼蘭染色檢測純化前后的細胞活力。計算活細胞的百分率。細胞純度和細胞回收率的計算:細胞純度:分離產物中的陽性細胞數(shù),分離細胞的總細胞數(shù)×100%,細胞回收率:分離產物中的陽性細胞數(shù),起始標本陽性細胞總數(shù)×100%。BEENbio ProteinA/G Co-IP&CHIP磁珠 蛋白相互作用。黑龍江anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠哪家好
免疫磁珠法分離,并培養(yǎng)人腦膠質瘤干細胞的方法.方法將術中取得的腦膠質瘤標本,通過剪切,消化和吹打成單細胞懸液,篩網過濾,免疫磁珠分選試劑盒分選出CD133^+細胞,用神經干細胞無血清培養(yǎng)法培養(yǎng)出具有單細胞克隆能力的細胞球,取第3代進行誘導分化,分化前后用免疫細胞熒光化學方法鑒定**干細胞及分化后細胞.結果免疫磁珠分選出的CD133^+細胞,可懸浮生長并形成神經干細胞樣細胞球,有較強的增殖能力,干細胞標志物巢蛋白(nestin)陽性,分化后細胞表達神經元小管相關蛋白β-3(β-tubulin3)和星形膠質細胞膠質纖維酸性蛋白質(GFAP)特異性抗原,而巢蛋白,CD133^+陰性,并具有**的核型.結論免疫磁珠分選法可避免原代培養(yǎng)中眾多細胞混雜生長的發(fā)生,能夠從大量腫瘤細胞中分離出只占極少比例的**干細胞,細胞結合磁珠后在體外可以長期培養(yǎng)和傳代,進一步證實了**干細胞的存在,并為膠質瘤干細胞的研究奠定基礎.浙江protein A/G COIP免疫磁珠經銷商價格4折起密度梯度離心聯(lián)合上皮細胞黏附分子免疫磁珠富集法檢測卵巢Cancer循環(huán)腫瘤細胞及其與腫瘤復發(fā)轉移的相關性.
戊二醛兩步交聯(lián)法將辣根過氧化物酶(HRP)結合于甲胎蛋白 (AFP)抗體上制成酶標AFP抗體,質量鑒定結果表明其比活性為200 U/mg,抗體效價為1: 256,滿足酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)要求;通過滴定法確定酶標AFP抗體的**適工作稀釋度為V(酶標抗體): V(磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液)=1: 160;血清用量及孵育時間的影響實驗表明:血清100 μL,孵育時間2 h為比較好測定條件.建立了肝*患者血清AFP免疫磁珠ELISA法的規(guī)范化檢測程序.初步應用實驗顯示:免疫磁珠ELISA法測定受試健康組血清AFP值 平均為3.9 ng/mL,肝*組血清AFP值平均為316.7 ng/mL,對肝*診斷陽性率為72.0%.批內及批間CV值分別為5.05%和8.20%.該項技術有較高的靈敏度和很好的特異性,操作簡便,分離快 速,適用于肝*的初期快速診斷.
免疫磁珠法分離細胞是基于細胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結合,在外加磁場中,通過抗體與磁珠相連的細胞被吸附而滯留在磁場中,無該種表面抗原的細胞由于不能與連接著磁珠的特異性單抗結合而沒有磁性,不在磁場中停留,從而使細胞得以分離。免疫磁珠應用分為正選法和負選法:正選法-磁珠結合的細胞就是所要分離獲得的細胞負選法-磁珠結合不需要的細胞,游離于上清液的細胞為所需細胞,一般而言,負選法比正選法的磁珠用量大磁珠:大小在0.1-0.45mm包被了生產的高質量單抗磁珠已為白細胞亞群的分選所優(yōu)化將包被了特異性單抗的BDIMag磁珠加入細胞懸液,磁珠特異性地與有相應抗原的細胞亞群結合,通過分離得到的連有磁珠的細胞可直接用于功能試驗和用流式細胞儀檢測。免疫磁珠法富集循環(huán)腫瘤細胞研究進展。
免疫磁珠分離法純化抗血清的實驗條件,并與A蛋白親和層析法比較純化效果,以求得到一種簡便,快速,高效的純化IgG方法.結果表明:從5只新西蘭兔獲得210 mL試管凝集效價高達1:5 120的兔抗鰻弧菌抗血清,磁珠與IgG結合10 min達到平衡,其比較大結合量為0.227 mg/mL;免疫磁珠分離法與A蛋白親和層析法得到的IgG純度都很高,經過SDS-PAGE電泳都只得到25 ku和55 ku左右的兩條帶;免疫磁珠分離法得到的抗體ELISA效價高于A蛋白親和層析法;免疫磁珠分離法反應所需時間(10 min)小于A蛋白親和層析法所需的20 min,其得率(11.5 mg/mL)也高于A蛋白親和層析法的10.25 mg/mL.BEENbio ProteinA/G Co-IP&CHIP磁珠廠家直銷。湖北蛋白質免疫共沉淀免疫磁珠生產廠家
免疫磁珠的制備及其富集,分離單增李斯特菌的研究。黑龍江anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠哪家好
人腦**組織中分離,培養(yǎng),純化和鑒定腦**干細胞(BTSCs),探討CD133免疫磁珠分選方法獲取BTSCs的可行性及BTSCs的生物學特性.方法:留取人腦膠質母細胞瘤新鮮標本,分離獲得腦腫瘤細胞.應用CD133免疫磁珠分選方法純化BTSCs;流式細胞儀檢測分選陽性率;神經球計數(shù)法分析CD133+/-亞群細胞神經球形成情況;免疫熒光方法檢測CD133+/-亞群細胞表面神經干細胞(NSCs)標記物CD133,神經巢蛋白(nestin)表達情況;檢測CD133+/-亞群細胞經誘導分化后細胞表面分化標記物β-TubulinⅢ,GFAP表達情況.結果:CD133+亞群細胞具有干細胞特性,可形成明顯的神經球,具有自我更新和明顯的增殖能力,并且NSCs標記物CD133,nestin表達陽性,經誘導分化后分化標記物β-TubulinⅢ,GFAP表達陽性;CD133-亞群細胞無上述特性.結論:CD133免疫磁珠分選方法獲得的CD133+亞群細胞即為BTSCs,該方法可以得到高純度的BTSCs,可以用于BTSCs的實驗研究.黑龍江anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠哪家好
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