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吉林anti-Myc COIP免疫磁珠性能

來源: 發(fā)布時間:2022-03-20

免疫共沉淀檢測(CO-IP

BEENbio提供免疫共沉淀(CO-IP)檢測服務(wù)??蓪煞N已知蛋白是否存在相互作用進(jìn)行驗證,也可以驗證在總蛋白中是否含有與已知蛋白相互作用的未知蛋白。其實驗方法為將靶蛋白(X)與目的蛋白(Y)在同一細(xì)胞內(nèi)孵育,形成“靶蛋白-目的蛋白”復(fù)合物。將靶蛋白的特異性抗體與復(fù)合物共孵育,形成“抗體-靶蛋白-目的蛋白”復(fù)合物,利用Proterin A/G純化。通過SDS-PAGE銀染,結(jié)合Western Blot及液相質(zhì)譜等對兩種蛋白之間是否存在相互作用進(jìn)行定性分析。

服務(wù)優(yōu)勢

?       使用銀染技術(shù),靈敏度是考馬斯亮藍(lán)100倍,SDS-PAGE電泳結(jié)果更加清晰;

?       擁有液相質(zhì)譜及Fortebio等完整配套檢測設(shè)備,可對檢測結(jié)果進(jìn)一步分析;

?       實驗重復(fù)進(jìn)行兩次,排除隨機(jī)因素影響,結(jié)果更加可靠;

?       擁有蛋白、抗體等制備平臺,您只需提供序列便可完成全部實驗;

密度梯度離心聯(lián)合上皮細(xì)胞黏附分子免疫磁珠富集法檢測卵巢Cancer循環(huán)腫瘤細(xì)胞及其與腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性.吉林anti-Myc COIP免疫磁珠性能

偶聯(lián)單抗NJ001的免疫磁珠對肺腺*裸鼠模型micro-CT掃描的增強(qiáng)作用.方法:經(jīng)尾靜脈注射SPC-A1-luc細(xì)胞建立肺腺*裸鼠模型,生物發(fā)光成像定量監(jiān)測**的大小.裸鼠分為:生理鹽水組,裸磁珠組和免疫磁珠組,每周分別注射生理鹽水,750nm裸磁珠溶液和偶聯(lián)NJ001的750nm免疫磁珠溶液,于注射前和注射后4h進(jìn)行micro-CT掃描.利用免疫組織化學(xué)驗證**組織中NJ001特異性抗原SP70的表達(dá).結(jié)果:免疫磁珠組在第4周即可檢測到**,而生理鹽水組和裸磁珠組均到第6周才能檢測到.第6周生理鹽水組,裸磁珠組和免疫磁珠組micro-CT掃描**的灰度值分別為注射前的59.05±0.66,60.69±0.55和58.25±0.32,注射后的60.30±1.83,61.05±0.68和67.41±3.82.與注射前相比,免疫磁珠組注射后的灰度值***增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.0079).生理鹽水組和裸磁珠組注射后的灰度值與注射前相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P0.05).結(jié)論:偶聯(lián)單抗NJ001的免疫磁珠對肺腺*裸鼠模型micro-CT掃描有增強(qiáng)作用,并且有望用于肺*的早期診斷.湖北protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠經(jīng)銷商價格4折起自制免疫磁珠在前列腺tumor組織干細(xì)胞提取中的應(yīng)用。

Anti Myc COIP磁珠

產(chǎn)品價格


產(chǎn)品貨號
規(guī)格
價格
BEENbio-PR004-0.4
0.4 mL
1150 RMB
BEENbio -PR004-1
mL
1780 RMB
BEENbio -PR004-5
5 mL
6825 RMB


產(chǎn)品描述

BEENbio Anti Myc COIP磁珠在大小為2um的納米磁珠上供價結(jié)合了大量的小鼠Anti Myc 單克隆抗體,與傳統(tǒng)的Anti Myc COIP瓊脂糖凝膠比較,抗體結(jié)合能力相同,背景更低,由于采用磁性分離,使得每次COIP可以節(jié)省40%的時間。


產(chǎn)品特性


項目
特性
抗體亞型
鼠源IgG1
抗體純化方法
Protein A 純化制備
適用范圍
免疫共沉淀(IP),Myc   tag蛋白純化
推薦使用體積
COIP: 500μl 細(xì)胞裂解液 使用 10μL磁珠
融合蛋白結(jié)合容量
大于1.1 mg Myc   tagged protein/mL 磁珠



儲存條件

4oC長期穩(wěn)定


使用說明

磁珠的準(zhǔn)備

重懸Anti Myc 免疫磁珠,取10 μL加入到500 μL TBS,洗滌3次,分離磁珠,棄上清。

樣品的結(jié)合(binding)

在上述沉淀中加入500 μL細(xì)胞裂解液,室溫緩慢孵育2小時或者4°C條件下過夜,分離磁珠,棄上清。

注意:結(jié)合過程中,磁珠可能會出現(xiàn)聚團(tuán)或呈片狀,屬于正?,F(xiàn)象,不會影響實驗結(jié)果。

洗滌(washing):0.5 mL TBS緩沖液洗滌四次,每次5min,分離磁珠,棄上清。

洗脫(elution):上述所得沉淀中加 50 μL 1×蛋白上樣緩沖液,煮沸5 min,冷卻后分離磁珠,吸取上清液,進(jìn)行SDS-PAGE檢測。


碳二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺(EDC/NHS)方法在羧基磁珠表面偶聯(lián)抗體,制備可高效分離細(xì)胞的免疫磁珠.方法用EDC和NHS活化磁珠表面羧基,活化的羧基再與抗體上氨基進(jìn)行反應(yīng),從而將抗體偶聯(lián)于磁珠表面,獲得免疫磁珠.使用高性能納米粒度分析儀(HPPS),二辛可酸(BCA)蛋白定量試劑盒,流式細(xì)胞儀,透射電鏡(TEM)表征磁珠的粒徑,磁珠表面聯(lián)接的抗體量及其免疫活性.結(jié)果HPPS檢測磁珠平均水力學(xué)粒徑為110nm;磁珠表面偶聯(lián)52.4μg抗CD11a+抗體/mg磁珠.經(jīng)磁分離后細(xì)胞的流式分析結(jié)果表明,CD11a+免疫磁珠可以有效分離髓系白血病細(xì)胞系(KG-1a)細(xì)胞,免疫磁珠均勻結(jié)合于細(xì)胞表面,且不影響細(xì)胞的活性.結(jié)論成功制備可用于細(xì)胞分離且不影響分離后細(xì)胞活性的新型免疫磁珠.免疫磁珠法富集循環(huán)腫瘤細(xì)胞研究進(jìn)展。

COIP 磁珠緩沖液匯總

細(xì)胞裂解液
正常RIPA 細(xì)胞裂解緩沖液(一般是公司購買)
結(jié)合緩沖液binding buffer
用RIPA 細(xì)胞裂解緩沖液代替
洗滌緩沖液Washing buffer
PBST(1*PBS + 1% Triton X-100)
洗脫緩沖液Elution buffer
直接加入1*蛋白loading buffer, 98oC 5 min后棄去磁珠后,收集上清液檢測。

COIP 常見問題及對策


BEENbio Anti Flag Co-IP&CHIP磁珠 蛋白相互作用。浙江COIP免疫磁珠批量定制

常見問題
原因
解決方法
高的背景條帶
蛋白非特異結(jié)合到抗體,磁珠或EP管上洗滌次數(shù)不夠
對裂解液進(jìn)行預(yù)處理去除非特異蛋白; 在***一次洗滌前, 轉(zhuǎn)移整個樣品到新的EP管中然后進(jìn)行離心。
洗滌次數(shù)不夠
增加洗滌的時間和次數(shù)。
無蛋白條帶
Myc 標(biāo)簽蛋白沒有表達(dá)
確保目的蛋白帶有Flag/HA/Myc 標(biāo)簽; 制備新鮮的裂解液; 使用恰當(dāng)?shù)牡鞍酌敢种苿?/span>
孵育時間不足
增加孵育時間。
樣品中存在干擾物質(zhì)
裂解液中存在高濃度的DTT,2-mercaptoetMyc nol或者其他的還原劑;

免疫磁珠法分離膽囊CancerCD133陽性細(xì)胞及其生物學(xué)特性鑒定。吉林anti-Myc COIP免疫磁珠性能

免疫磁珠法原代分離純化大鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞,并確定其免疫組化特征.方法免疫磁珠法結(jié)合傳統(tǒng)的膠原酶消化及篩網(wǎng)過濾法分離出大鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞,采用含有20%胎牛血清的DMEM培養(yǎng).通過周細(xì)胞的形態(tài)和生長方式初步鑒別,再進(jìn)行細(xì)胞α-SMA,vWF,GFAP抗體免疫組織化學(xué)特征鑒定,及激光共聚焦顯微鏡行周細(xì)胞PDGFR-β和desmin抗體熒光雙標(biāo)觀察.周細(xì)胞生長曲線通過MTT法測定.結(jié)果本法獲得的周細(xì)胞純度可達(dá)98%,并能連續(xù)傳代.原代周細(xì)胞約2~3周融合,傳代后生長和融合速度加快,細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,胞內(nèi)可見絲狀結(jié)構(gòu),無接觸性抑制.免疫組化證實周細(xì)胞胞漿內(nèi)α-SMA蛋白表達(dá)陽性,內(nèi)皮細(xì)胞特異性vWF因子表達(dá)陰性,膠質(zhì)細(xì)胞特異性GFAP表達(dá)陰性.激光共聚焦顯示周細(xì)胞PDGFR-β和desmin抗原表達(dá)均為陽性.結(jié)論本研究***報道應(yīng)用免疫磁珠法分離培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞.獲得高度純化的周細(xì)胞具有明確的免疫組化特征,可用于相關(guān)視網(wǎng)膜血管性疾病的進(jìn)一步研究.吉林anti-Myc COIP免疫磁珠性能

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標(biāo)簽: 免疫磁珠