常見問題及對策

5： 磁珠在使用過程中出現(xiàn)結塊現(xiàn)象？

磁珠在使用時如果出現(xiàn)結塊現(xiàn)象一般較難振蕩打散，容易導致分 布不均，出現(xiàn)該問題的原因是磁珠在磁場中放置太久而使磁珠牢固的 結合在一起。用超聲波水浴處理 2min 即可打散磁珠使其重新分散， 但應注意超聲處理也會使磁珠在樣品溶液中捕獲的抗體脫落，所以磁珠在加樣后洗脫前不宜使用該方法。

緩沖液匯總

Co-IP & CHIP磁珠緩沖液匯總：

細胞裂解液：正常RIPA 細胞裂解緩沖液(一般是公司購買)

抗體磁珠結合buffer：PBST(1*PBS + 1% Triton X-100)

Washing buffer: PBST(1*PBS + 1% Triton X-100)

抗原與抗體/磁珠復合物binding buffer：可以用RIPA 細胞裂解緩沖液代替

Washing buffer: PBST(1*PBS + 1% Triton X-100)

6、Elution buffer: (1)變性洗脫緩沖液，直接加入1*蛋白loading buffer, 98^oC 5 min后棄去磁珠后，收集上清液檢測。（2）非變性洗脫緩沖液：Elution buffer: 0.1 M -0.2 M Glycine, 0.1%-0.5% Triton 100 or Tween 20, pH 2.5-3.1。

建立檢測人血清抗白***烯醇化酶(Eno)IgG類抗體的免疫磁珠法,并評估其在***血癥診斷中的價值。方法將Eno重組蛋白耦聯(lián)至磁性微珠上,以辣根過氧化物酶(HRP)標記的羊抗人IgG為二抗,優(yōu)化免疫磁珠法的反應條件,考察其精密度和特異性。收集經血培養(yǎng)確診的***血癥患者(n=113)、***定植者(n=50)、細菌菌血癥患者(n=30)和健康人對照者(n=100)血清,用免疫磁珠法測定抗Eno抗體,并與ELISA法結果進行比較。結果免疫磁珠法測定抗Eno抗體的批內、批間變異系數(shù)(CV)分別為8.2%和14.2%,重組Eno抗原對相應抗體的阻斷率為91.6%。以吸光度(A)值0.29為cutoff值時,診斷***血癥的敏感性、特異性、陽性預測值和陰性預測值分別為80.5%、92.3%、90.1%和84.5%。免疫磁珠法的敏感性和特異性與ELISA法比較無統(tǒng)計學差異,但檢測流程從37℃2.5h縮短至常溫1h。結論免疫磁珠法檢測抗EnoIgG類抗體簡便、快捷、可靠,在侵襲性******研究中具有潛在的應用價值。廣東anti-HA 免疫共沉淀免疫磁珠代理價格4折起B(yǎng)EENbio Anti Flag Co-IP&CHIP磁珠全國招商代理。

免疫共沉淀檢測（CO-IP）

BEENbio提供免疫共沉淀（CO-IP）檢測服務?？蓪煞N已知蛋白是否存在相互作用進行驗證，也可以驗證在總蛋白中是否含有與已知蛋白相互作用的未知蛋白。其實驗方法為將靶蛋白（X）與目的蛋白（Y）在同一細胞內孵育，形成“靶蛋白-目的蛋白”復合物。將靶蛋白的特異性抗體與復合物共孵育，形成“抗體-靶蛋白-目的蛋白”復合物，利用Proterin A/G純化。通過SDS-PAGE銀染，結合Western Blot及液相質譜等對兩種蛋白之間是否存在相互作用進行定性分析。

服務優(yōu)勢

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兔前軟骨干細胞PSCs,(precartilagiousstemcells)的分離,培養(yǎng)方法及增殖,表型特征,為細胞移植***椎間盤退變,提供合適的種子細胞.[方法]取胎兔骨骺周圍軟骨膜(LaCroix環(huán))中的細胞進行原代培養(yǎng),然后采用免疫磁珠分離系統(tǒng)分選純化PSCs.體外培養(yǎng),傳代,凍存復蘇,繪制生長曲線,觀察細胞特性.分別采用免疫組化,免疫熒光,RT-PCR等方法鑒定純化后的PSCs.[結果]免疫磁珠分離可獲得純度較高的兔PSCs,培養(yǎng)后成活率高,細胞狀態(tài)良好.細胞凍存復蘇后,細胞增殖速度,細胞形態(tài)及表面標志物無明顯變化.免疫組化,免疫熒光,RT-PCR等方法鑒定后,細胞都有明顯的PSCs表面特異性標記物的表達.[結論]PSCs存在于LaCroix環(huán)中,免疫磁珠分離法得到的PSCs,體外培養(yǎng)條件下,細胞增殖較快,生物學特性穩(wěn)定.免疫磁珠法富集循環(huán)腫瘤細胞研究進展。

人腦**組織中分離,培養(yǎng),純化和鑒定腦**干細胞(BTSCs),探討CD133免疫磁珠分選方法獲取BTSCs的可行性及BTSCs的生物學特性.方法:留取人腦膠質母細胞瘤新鮮標本,分離獲得腦腫瘤細胞.應用CD133免疫磁珠分選方法純化BTSCs;流式細胞儀檢測分選陽性率;神經球計數(shù)法分析CD133+/-亞群細胞神經球形成情況;免疫熒光方法檢測CD133+/-亞群細胞表面神經干細胞(NSCs)標記物CD133,神經巢蛋白(nestin)表達情況;檢測CD133+/-亞群細胞經誘導分化后細胞表面分化標記物β-TubulinⅢ,GFAP表達情況.結果:CD133+亞群細胞具有干細胞特性,可形成明顯的神經球,具有自我更新和明顯的增殖能力,并且NSCs標記物CD133,nestin表達陽性,經誘導分化后分化標記物β-TubulinⅢ,GFAP表達陽性;CD133-亞群細胞無上述特性.結論:CD133免疫磁珠分選方法獲得的CD133+亞群細胞即為BTSCs,該方法可以得到高純度的BTSCs,可以用于BTSCs的實驗研究.BEENbio ProteinA/G Co-IP&CHIP磁珠全國招商代理。遼寧anti-Myc COIP免疫磁珠性能

免疫磁珠純化人呼吸道合胞病毒F蛋白方法的建立。湖北anti-Flag COIP免疫磁珠性能

實驗優(yōu)化建立基于免疫磁分離技術對金黃色葡萄球菌的快速分離方法,為后續(xù)快速檢測提供基礎.利用金黃色葡萄球菌多抗制備的免疫磁珠對其捕獲.結合平板菌落計數(shù),考察包被磁珠時多抗加入量,免疫磁珠加入量及捕獲時間等因素對捕獲效率的影響.在單因素實驗基礎上進行正交實驗,并對該方法的靈敏度,特異性及其在食品中的應用效果初步探索.結果表明,比較好捕獲條件為抗體加入量30μL,免疫磁珠加入量80μL,捕獲時間45min,在此條件下捕獲效率均超過30%,該方法捕獲限可達到101CFU/mL,特異性良好,并初步用于羊肉卷洗水中金黃色葡萄球菌的快速分離,捕獲時間小于1h.免疫磁分離作為一種快速的分離篩選方法,可用于食源性金黃色葡萄球菌的快速分離.湖北anti-Flag COIP免疫磁珠性能

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